許惠娟，劉 坤，鄭景妹，姜秋利，魯華東，許建芳

(復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院廈門醫(yī)院 病理科， 福建 廈門 361015)

人乳頭瘤病毒(human papilloma virus，HPV)感染是世界范圍內(nèi)一種常見的性傳播疾病，它能夠引起生殖道皮膚/黏膜發(fā)生一系列病變，與全球約5%的癌相關(guān)[1]。目前已知HPV型別200余種，其中約40種能夠感染生殖道[2]。在這40種型別中，根據(jù)其致病力大小分為低危型和高危型[3]。篩查癌前病變和HPV免疫是減輕宮頸癌負(fù)擔(dān)的有效預(yù)防策略，宮頸癌控制和預(yù)防的策略是通過有效篩查HPV、接種HPV、巴氏涂片檢測(cè)和治療癌前病變來早期檢測(cè)[4]。通過使用HPV疫苗和宮頸癌篩查，高收入國家的宮頸癌發(fā)病率大大降低[5]。由于人群年齡分布、種族及相關(guān)生活方式的不同，HPV各個(gè)地區(qū)的感染情況存在差異[6]，所采取的疫苗型別是否應(yīng)根據(jù)HPV的感染型別選擇靶向型別的疫苗。了解本地區(qū)HPV 感染現(xiàn)狀，提供疫苗接種策略，為宮頸疾病的診斷、治療及預(yù)后提供參考。本研究對(duì)3 144例宮頸癌篩查婦女HPV感染及亞型分布分析，分析HPV聯(lián)合液基薄層細(xì)胞檢測(cè)(thinPrep cytological test,TCT)宮頸病變的臨床價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

1.1.1 病例：選取2019年5月至2020年6月在復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院廈門醫(yī)院接受宮頸篩查的3 144例婦女為研究對(duì)象?；颊吣挲g18～80歲，納入標(biāo)準(zhǔn)：1)年齡≥18歲患者；2)患者21 h內(nèi)無性生活；3)非月經(jīng)期采集細(xì)胞學(xué)標(biāo)本。參與本實(shí)驗(yàn)患者均對(duì)本研究知情同意，本研究已獲復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院廈門醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.1.2 試劑：人乳頭瘤病毒核酸檢測(cè)試劑盒(北京博暉創(chuàng)新生物科技有限公司)；液基細(xì)胞處理試劑盒(LMG-100)、巴氏染色液[泰普生物科學(xué)(中國)有限公司]。

1.2 方法

1.2.1 采集標(biāo)本：臨床婦科醫(yī)師通過專業(yè)拭子在宮頸處順時(shí)針旋轉(zhuǎn)3圈以上，獲取患者宮頸處的分泌物和脫落細(xì)胞。將宮頸刷插入樣本品保存管底部，自刻度線處折斷，封蓋保存，室溫送至病理科進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.2 HPV基因分型的檢測(cè)：博暉生物芯片法檢測(cè)人體宮頸中的24種HPV亞型，經(jīng)過核酸提取——PCR擴(kuò)增——反向點(diǎn)雜交——CCD掃描分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。在微流控芯片上發(fā)現(xiàn)探針與目標(biāo)DNA雜交的區(qū)域出現(xiàn)斑點(diǎn)，判別感染HPV及感染的亞型。

1.2.3 液基薄層細(xì)胞檢查(Thinprep cytologic test,TCT)檢測(cè)細(xì)胞病變：用TCT操作系統(tǒng)對(duì)采集到的樣本進(jìn)行程序化處理，制成液基薄層涂片，95%乙醇進(jìn)行固定，隨后巴氏染色處理，通過光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察與結(jié)果統(tǒng)計(jì)。細(xì)胞學(xué)診斷報(bào)告根據(jù)Bethesda系統(tǒng)(the Bethesda system,TBS)進(jìn)行判讀。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用率(%)表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 3 144例婦女中HPV感染分布情況

本研究HPV基因分型檢測(cè)型別為24種，包括高危型別18種，分別為16、18、31、33、39、35、45、52、51、56、58、59、66、68、82、53、73和83。低危型別6種，分別為6、11、42、43、44和81。3 144例婦女中HPV感染率為22.3%(704/3 144)，其中高危型HPV感染率為18.6%(585/3 144)，低危型感染率為3.8%(119/3 144)。感染率由高到低依次為HPV52、58、16、56、44、42，81、51、53和39。3 144例婦女HPV流行情況及基因型分布(圖1)。704例HPV陽性患者中，單一感染患者550例，HPV陽性病例中以單一型別HPV感染為主，多重感染以雙重感染為主。

2.2 不同年齡組宮頸組織病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果HPV感染分布情況

3 144 例患者共分成 5個(gè)年齡組，60歲以上年齡組的HPV陽性檢出率最高，其次是51～60歲年齡組和30歲及以下年齡組。30～40歲年齡組的 HPV 陽性人數(shù)占總陽性人數(shù)的占比最高，其次為30歲及以下年齡組(表1)。不同年齡組HPV感染情況存在差異(P<0.01)，且不同年齡組HPV高危感染情況存在差異(P<0.05)。535例進(jìn)行TCT檢測(cè)的HPV陽性患中，高度鱗狀上皮內(nèi)病變(HILS)患者中60歲以上人群檢出率較高，其次為41～50歲年齡組。低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)患者中，30歲及以下年齡組檢出率較高，其次為41～50歲年齡組。低度鱗狀上皮內(nèi)病變可能(ASC-US)，30歲及以下年齡組檢出率較高，其次為51～60歲年齡組(表1)。

表1 不同年齡段宮頸組織病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果及HPV感染情況Table 1 Results o f HPV infection and cervical lesions in different age groups[n(%)]

2.3 LSIL、HSIL和ASC-US患者中HPV感染情況

704例HPV感染患者中有535例同時(shí)進(jìn)行TCT檢測(cè)。其中585例高危型HPV患者中有444例進(jìn)行TCT檢測(cè)，119例低危型HPV患者中有90例進(jìn)行TCT檢測(cè)。LSIL、HSIL和ASC-US患者中HPV各亞型分布(表2)。HPV陽性患者宮頸病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果中以單一高危型感染較為多見，單一低危型HPV感染其次。多重感染包含雙重高危型HPV感染，雙重低危型HPV感染，3種及3種以上高危型HPV感染以及HPV高危和低危型合并感染。其中以雙重高危型HPV感染為主HPV(表1)。單一高危型HPV組與多重高危型HPV組患者宮頸病理學(xué)結(jié)果有差異(P<0.01)。

HR.high risk；LR.low risk圖1 3 144例婦女中HPV流行情況及基因型分布Fig 1 Prevalence and genotype distribution of HPV among 3 144 women

表2 LSIL、HSIL 和ASCUS患者中HPV亞型分布

3 討論

HPV的持續(xù)感染被認(rèn)為是宮頸癌和癌前病變的重要原因[7]。加強(qiáng)對(duì)高危型HPV感染的檢測(cè)，以便早期發(fā)現(xiàn)宮頸癌變趨勢(shì)，對(duì)HPV感染者應(yīng)以重視，給予早期干預(yù)。本研究發(fā)現(xiàn)本地區(qū)HPV感染亞型前3位依次為52、58和16型，與國內(nèi)其他學(xué)者報(bào)道有所不同，但相同于這些報(bào)道的是HPV感染率排名靠前的亞型均包含有這3種亞型[8-9]。本研究中，3 144例宮頸癌篩查婦女HPV感染率為22.3%，高危型HPV感染率18.6%，低危型感染率3.8%。由于中國人口多、地域廣，人群年齡分布、種族及相關(guān)生活方式的不同，HPV各個(gè)地區(qū)的感染情況存在差異[6]。一項(xiàng)全球性的Meta分析表明，HPV-16和HPV-18是世界范圍內(nèi)與宮頸病變相關(guān)的HPV最流行的類型，而HPV-52和HPV-58在東亞女性中更為普遍[10]，本結(jié)果與之是一致的。535例HPV陽性患者有32%與不同的宮頸病變等級(jí)的發(fā)生相關(guān)。HPV陽性患者宮頸病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果以單一高危型感染較為多見，多重感染以雙重高危型HPV感染為主。與單一高危HPV感染相比，多重高危型HPV感染組患者促進(jìn)宮頸病變的發(fā)展。

本研究還發(fā)現(xiàn)不同年齡組HPV感染情況存在差異。60歲以上年齡組的陽性檢出率最高， HILS患者中60歲以上人群檢出率較高，其次為41～50歲年齡組。老年婦女的免疫力隨著年齡的增長而下降，特別是絕經(jīng)前和絕經(jīng)后婦女，消除既往和新感染的能力減弱，因此HPV感染的高發(fā)也發(fā)生在老年婦女[11]。HPV陽性人數(shù)最高發(fā)生在30～40歲年齡組，該年齡組宮頸篩查基數(shù)較大。LSIL患者及ASC-US患者中，均為30歲及以下年齡組檢出率較。年輕女性中HPV感染的高患病率可能與不良的性習(xí)慣有關(guān)，雖然年輕女性的HPV感染率很高，但大多數(shù)HPV感染可能在1～2年內(nèi)自動(dòng)清除，因此HPV感染的患病率將會(huì)降低[12]。通過本次研究發(fā)現(xiàn)攜帶高危HPV并且年齡>40歲的婦女宮頸癌前病變比例較高，應(yīng)列入宮頸癌前病變或子宮頸癌的重點(diǎn)篩查對(duì)象。為本地區(qū)女性的HPV篩查和預(yù)防策略提供了一定的參考價(jià)值，由于中西方乃至國內(nèi)不同地區(qū)HPV亞型差異，未來新一代HPV疫苗的接種應(yīng)該更具有針對(duì)性。