俞向前，程曼玲，文德亮，徐偉峰，郭志波，徐 蕾，孫福華，朱建國，葉承榮

（1.上海市浦東新區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，上海 201299；2.上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院，上海 200240；3.上海市浦東新區(qū)合慶鎮(zhèn)集體資產(chǎn)管理，上海 201201；4.上海市浦東新區(qū)川沙新鎮(zhèn)集體資產(chǎn)管理事務(wù)中心，上海 201202）

動物過敏性胃腸炎是過敏性(變態(tài)反應(yīng)性)胃腸炎，即變應(yīng)原與免疫球蛋白E(IgE)在胃腸道發(fā)生反應(yīng)，患病動物可出現(xiàn)一系列胃腸道反應(yīng)，如腹瀉、嘔吐、甚至便血等。過敏性胃腸炎發(fā)生原因很復(fù)雜，隨著生活方式改變、生態(tài)環(huán)境及社會的變化，包括人類在內(nèi)的動物過敏性胃腸炎發(fā)生呈上升趨勢，日益引起醫(yī)學(xué)界的關(guān)注。但與人的過敏性胃腸炎相比，犬過敏性胃腸炎遠沒有引起足夠重視。筆者經(jīng)過多年對浦東地區(qū)寵物診所臨床病例回顧性調(diào)查，并結(jié)合文獻檢索分析發(fā)現(xiàn)，臨床上犬的胃腸炎很多，但診斷為過敏性的胃腸炎很少，很多臨床胃腸炎都沒有取得良好的治療效果。社會的發(fā)展，特別是城市化進程加快，人類與寵物的生活環(huán)境甚至飲食結(jié)構(gòu)都出現(xiàn)了趨同化，使得人們有理由相信，與人類一樣，犬過敏性胃腸炎也應(yīng)該是危害嚴重的疾病。過敏性胃腸炎缺乏癥狀特異性，在臨床上尚未明確地提出診斷標準，目前主要根據(jù)患者胃腸道癥狀，同時結(jié)合食物過敏病史及癥狀，食物回避和激發(fā)試驗來診斷。因此，對犬過敏性胃腸炎進行系統(tǒng)研究，調(diào)查分析其發(fā)病原因，檢測發(fā)病犬血清IgE，對過敏性胃腸炎的明確診斷和治療具有重要意義。

1 材料

1.1 樣品來源

樣品為2019~2020年度于上海浦東多家寵物診所采集的有胃腸炎癥狀的犬的血清樣品40份，于-20℃保存。

1.2 實驗材料

犬（Canine）免疫球蛋白E（IgE）檢測ELISA檢測試劑盒（購自上海少辛生物有限公司）、酶標儀（Thermo Scientific）、離心機（Thermo Scientific）

2 實驗方法

按照試劑盒說明書進行操作，檢測樣品中IgE含量。操作步驟如下：

2.1 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條。

2.2 設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL。

2.3 樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

2.4 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

2.5 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。

2.6 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

2.7 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。結(jié)果判斷繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應(yīng)OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

3 結(jié)果

40例疑似過敏性胃腸炎犬的臨床表現(xiàn)主要為腹瀉、嘔吐、便血、局部皮膚疹塊等，根據(jù)初步臨床診斷判斷的誘因及針對性初步采取處理措施后，大多數(shù)的癥狀都有改善和緩解，因此診斷為過敏性胃腸炎。血清IgE濃度檢測結(jié)果分顯示，40例疑似過敏胃腸炎樣品中，IgE濃度顯著增加2例，升高33例,IgE過敏原檢測分級評估（表1），具體的結(jié)果分析（表2），IgE分布情況顯示（圖1），出現(xiàn)過敏性胃腸炎的犬只，82.5%（33/40）的IgE檢測值評估為高。

圖1 IgE檢測值分布圖

表1 IgE過敏原檢測分級評估

表2 疑似犬過敏性胃腸炎臨床樣品檢測結(jié)果

4 討論

食物過敏是過敏性胃腸炎的首要原因，已成為一個日益嚴重的問題。因?qū)δ承┦澄锎嬖诟呙魻顟B(tài)，包括人在內(nèi)的動物易出現(xiàn)過敏性胃腸病，幼齡動物最常見，全球估計有6%～8%的幼齡動物受到食物過敏的影響。常見的食物變態(tài)反應(yīng)原除了乳蛋白外，還有小麥、雞蛋、黃豆和花生，隨著年齡的增長，對有些食物的過敏可逐漸消失。藥物過敏也是一個常見因素。據(jù)文獻報道，一內(nèi)酰胺類抗生素(青霉素、頭孢菌素)、氨基糖甙類、磺胺、解熱止痛(水楊酸類)藥均可導(dǎo)致人的急性過敏性胃腸炎。

過敏性疾病可以同時發(fā)生在不同的部位，雖然有著不同的臨床表現(xiàn)，但它們同根共源，都是因為變態(tài)反應(yīng)引起。過敏原是過敏性疾病的誘發(fā)因素.因此，詳細詢問寵物近期攝入的食（藥）物，且改變食（藥）物后癥狀是否緩解非常重要。雖然遺傳因素是過敏性疾病發(fā)生的內(nèi)在因素，但環(huán)境因素可能直接觸發(fā)疾病的發(fā)生，所以遠離過敏原和環(huán)境因素同樣至關(guān)重要。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認為，過敏主要是由免疫機制介導(dǎo)的某種食物或藥物等引起腸道內(nèi)或全身的變態(tài)反應(yīng)，大多是由免疫球蛋E（IgE）介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。人類嬰幼兒過敏性胃腸炎患兒均有不同程度的高蛋白食物接觸史，根據(jù)臨床表現(xiàn)的不同，目前尚無特異性診斷方法，所以容易導(dǎo)致病情遷延，出現(xiàn)誤診或漏診，影響嬰幼兒的生長發(fā)育和健康。

目前，過敏性胃腸炎的的診斷主要依靠：（1）首先是疑似臨床癥狀和病史。過敏性疾病患者均為特應(yīng)性體質(zhì)，遺傳因素是過敏性疾病的內(nèi)在因素。因此，詳細詢問個人和父母的過敏史均很重要。本文40例疑似過敏性胃腸炎犬的臨床表現(xiàn)主要為腹瀉（34例）、便血（14例）、嘔吐（18例）、局部皮膚疹塊（4例）、尿血（1例）這都符合過敏性疾病的臨床癥狀指標。（2）血清IgE抗體，血清特異性IgE抗體測定，目前國內(nèi)人醫(yī)應(yīng)用最廣泛的檢測方法，當(dāng)IgE>0.35 U／mL時，可認為結(jié)果陽性，此法可檢測數(shù)百種食物過敏原，有較高的敏感性和特異性。本研究對采自浦東新區(qū)部分寵物診所的臨床疑似樣品進行檢測，血清IgE濃度檢測結(jié)果分析顯示，40例疑似過敏胃腸炎樣品中，IgE濃度升高且達到3級以上的為34例,占85%；（3）食物回避試驗，首先告知病人記錄基本癥狀和食譜2周，如果飲食回避2周后癥狀改善，這是診斷食物過敏的金標準。從本文表1中所列可以看出，根據(jù)癥狀懷疑誘因（攝入食物和藥物）后，終止這些誘因后，過敏癥狀都得到不同程度的緩解；（4）病理組織學(xué)診斷：查外周酸性粒細胞。外周血、腸粘膜活檢以及腹水等作為樣品。人類過敏性胃腸炎的的組織學(xué)診斷已經(jīng)很完善，無疑也是寵物診斷過敏性胃腸炎的一個發(fā)展趨勢，這有待于今后進行進一步的數(shù)據(jù)積累，形成標準。

本文主要從癥狀觀察、過敏原追蹤及回避以及血清IgE檢測三個方面對采自浦東新區(qū)幾個寵物診所的臨床疑似樣品進行了檢測，通過確定臨床癥狀、過敏原及免疫學(xué)檢測指標，綜合進行分析，明確了IgE檢測在犬過敏性胃腸炎診斷中具有重要價值，為建立準確可靠的犬、貓過敏性胃腸炎診斷技術(shù)積累數(shù)據(jù)，進一步通過構(gòu)建完整系統(tǒng)的疾病流行病學(xué)資料，為寵物診所制定過敏性胃腸炎診斷、防治規(guī)程及推廣應(yīng)用，研制科學(xué)有效的防治技術(shù)提供理論依據(jù)。