劉勝麗，郭姚蕊，秦建華

（河北省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系奶牛產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)疫病防控，河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，河北保定 071000）

奶牛場(chǎng)犢牛養(yǎng)殖過程中， 經(jīng)常發(fā)生感染性腹瀉， 如伴發(fā)消化道出血?jiǎng)t稱之為出血性腹瀉，常規(guī)的抗感染、止血、補(bǔ)液、止瀉、退熱和維持電解質(zhì)平衡療法效果欠佳，病死率極高，已成為困擾奶牛養(yǎng)殖主要難題之一。 為此，河北省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系奶牛產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)歷經(jīng)數(shù)年系統(tǒng)研究，形成了輸血療法在奶犢牛感染性出血性腹瀉治療中的應(yīng)用技術(shù)模式，有效控制了出血性腹瀉對(duì)犢牛健康的危害，現(xiàn)將該技術(shù)介紹如下：

1 感染性出血性腹瀉的主要病原類別

河北省不同區(qū)域和不同養(yǎng)殖模式的奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)中，多種致病菌、病毒和寄生蟲的單一感染或兩種病原乃至多種病原的混合感染，均可引起出血性犢牛腹瀉。 常見的致病菌有產(chǎn)腸毒素大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌、彎曲桿菌、壞死桿菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌等；常見的病毒主要有病毒性腹瀉病毒、輪狀病毒、冠狀病毒、傳染性鼻氣管炎病毒和細(xì)小病毒等； 常見的寄生蟲主要有球蟲、微小隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲。

2 出血嚴(yán)重程度劃分與預(yù)后初判

犢牛出血性腹瀉根據(jù)出血量不同分為輕度、中度、重度和極重度四個(gè)級(jí)別。

輕度（隱性）出血：奶犢牛腹瀉出血量較少時(shí)（小于100 毫升），不造成糞便顏色的改變，肉眼觀察糞便無血色，需要借助實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)才能確定，此時(shí)的出血為輕度出血，也稱潛血。 檢驗(yàn)糞便中隱性出血的方法叫糞便隱血試驗(yàn)。 鄰聯(lián)甲苯胺法靈敏度高，使用該方法可檢出消化道1～5毫升的微量出血；聯(lián)苯胺法和無色孔雀綠法中度靈敏，可檢出5～10 毫升的出血；若用愈創(chuàng)木法檢測(cè)， 出血量超過20 毫升的才能呈現(xiàn)陽性反應(yīng)。

顯性出血時(shí)， 腹瀉糞便眼觀呈不同程度紅色，可為微粉、粉紅、鮮紅、暗紅、黑紅或柏油狀以及有血絲、血塊或完全是血液。

中度出血：肉眼觀察腹瀉糞便有微粉紅、粉紅色或有血絲， 出血量大于100 毫升小于200毫升；

重度出血：肉眼觀察腹瀉糞便呈鮮紅、暗紅或有血塊，出血量大于200 毫升小于500 毫升；極重度出血； 糞便呈黑紅或柏油狀甚至全是血液，出血量大于500 毫升。

犢牛消化道發(fā)生出血后， 除少數(shù)輕度 （隱性） 出血性病例會(huì)經(jīng)及時(shí)使用止血藥物處理，不再出血，預(yù)后良好；絕大多數(shù)病例，隨時(shí)間推移，出血量逐漸增加，犢牛會(huì)出現(xiàn)急性失血的病理過程，僅憑藥物止血效果欠佳，病情進(jìn)展迅速，向危重死亡邁進(jìn)；中度和重度出血，在病原診斷的基礎(chǔ)上，常規(guī)抗感染、止血、補(bǔ)液、止瀉、退熱和維持電解質(zhì)平衡治療的同時(shí)，若立即輸入足量新鮮血液，可達(dá)到更為滿意的療效，病程縮短，病死率降低一半；出血一旦達(dá)到極重度程度，隨時(shí)會(huì)發(fā)生死亡。 因此，犢牛一旦發(fā)生感染性腹瀉，應(yīng)立即進(jìn)行糞便隱血試驗(yàn)檢測(cè)， 及時(shí)使用止血藥物處理，并同時(shí)輸注足量新鮮血液，彌補(bǔ)流失的血液，提高抵抗力和耐受性。

3 供血牛選擇

供血牛應(yīng)為體況良好、膘情中等、無傳染病和血液寄生蟲病的健康奶?；蛉馀?，并且6 個(gè)月內(nèi)未接受過輸血。 首先選用和受血患牛親緣關(guān)系較近的后備母牛或作為肉牛飼養(yǎng)6 月齡內(nèi)的奶公犢；其次為生母牛。 不超過4 胎的泌乳牛亦可。 每頭供血?？蔀槭苎ɑ迹┡９┭?～5 次，盡量不超過3 次。 避免一頭供血牛同時(shí)為多頭受血（患）牛供血。

4 輸血量和輸血次數(shù)確定

輕度出血患牛： 體重小于40 千克輸血量150～200 毫升； 體重在40～80 千克輸血量200～400 毫升。一般經(jīng)一次輸血即可，不需重復(fù)；第一次輸血后48 小時(shí)糞便隱血試驗(yàn)檢測(cè)仍為陽性，需要再次輸血。

中度出血患牛： 體重小于40 千克輸血量200～300 毫升； 體重在40～80 千克輸血量300～500 毫升。 大多數(shù)經(jīng)3 次輸血即可。

重度出血患牛： 體重小于40 千克輸血量400～600 毫升； 體重在40～80 千克輸血量800～1000 毫升。 需經(jīng)3～5 次輸血。

5 交叉配血試驗(yàn)

5.1 采血

對(duì)供血牛和受血牛（患牛）分別采集10 毫升血液，其中5 毫升血液置于促凝管，另外5 毫升血液置于抗凝管， 采集的血樣分別進(jìn)行標(biāo)記，標(biāo)記需清晰明確、不易去除。

5.2 血清分離和紅細(xì)胞生理鹽水混懸液制備

將供血牛和受血牛 （患牛） 的已經(jīng)凝固血樣，以2000 rpm，3 分鐘離心分離血清，析出的血清分別單獨(dú)轉(zhuǎn)移到無菌試管中備用。

將采集的供血牛和受血牛（患牛）的抗凝血液加10 倍體積生理鹽水，以2000 rpm，3 分鐘反復(fù)離心清洗5 次， 棄去上清即為100%紅細(xì)胞泥，吸取20 微升，加入含有3800 微升生理鹽水的試管中，吹吸混勻即成5%紅細(xì)胞生理鹽水混懸液。

5.3 交叉配血步驟

選取凹面載玻片或普通載玻片一張。 兩個(gè)凹窩， 分別用記號(hào)筆標(biāo)號(hào)A 和B，A 凹窩進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)主側(cè)試驗(yàn)，滴加受血（患）牛的血清50 微升（2 滴）和供血牛的5%紅細(xì)胞生理鹽水混懸液25 微升 （1 滴）；B 凹窩進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)次側(cè)試驗(yàn)，滴加供血牛的血清50 微升（2 滴）和受血（患）牛5%紅細(xì)胞生理鹽水混懸液25 微升（1 滴）；血清與紅細(xì)胞懸液滴加后，充分進(jìn)行上下、 左右震蕩混勻或分別用牙簽攪拌均勻，室溫下靜置5～10 分鐘，在顯微鏡下觀察結(jié)果。

5.4 交叉配血結(jié)果判定

在顯微鏡下觀察主側(cè)與次測(cè)試驗(yàn)均無凝集反應(yīng)，表示配血完全相合，可以輸血；如主側(cè)管無凝集及溶血，而次側(cè)出現(xiàn)凝集，但凝集較弱，可以輸少量(不超過200 毫升)血液；不論何種原因?qū)е轮鱾?cè)有凝集時(shí)，堅(jiān)決不可輸用。

6 采血和輸血

交叉配血合格后根據(jù)輸血量對(duì)供血牛進(jìn)行采血。

6.1 采血

無菌盛血瓶或血袋需預(yù)先注入5%檸檬酸鈉抗凝劑，抗凝劑與血液的比例為1∶9～10，每個(gè)盛血瓶或袋抗凝劑總量不能超過50 毫升，即每個(gè)盛血瓶或袋最多采集450 毫升血液。

對(duì)供血牛確實(shí)保定，在牛頸部近心端1/3 處用止血帶進(jìn)行結(jié)扎使頸靜脈弩張； 再用20 號(hào)采血針連接無菌盛血瓶或袋采血，讓血液沿瓶或袋壁緩慢流入，邊采血邊輕微搖晃輸血瓶（袋），使血液與抗凝劑均勻混合。 采血接近完成時(shí)，解開結(jié)扎止血帶，達(dá)到采血量拔出針頭。 實(shí)際采血量應(yīng)該比輸血量多5%。

6.2 輸血步驟

將采集好的含有抗凝劑的全血盡早使用16號(hào)針頭通過頸靜脈輸入到患（受血）牛體內(nèi)；若使用一次性輸液器連接儲(chǔ)血瓶或袋應(yīng)剪掉過濾網(wǎng)；血液輸入速度開始時(shí)控制在每分鐘3～5 毫升，同時(shí)密切觀察犢牛10 分鐘，看其是否有輸血反應(yīng)，如有震顫、焦躁不安、不停嘶鳴、站立不穩(wěn)、呼吸頻數(shù)、心跳加快、嘔吐、眼結(jié)膜充血、流淚、流涎和抗拒等異常， 立即停止輸血，30 分鐘后癥狀可自行消失； 如無異常，10分鐘后可將速度調(diào)至每分鐘5～15 毫升。 輸血完畢后留觀30分鐘。

6.3 輸血間隔

輕度出血患牛：如需連續(xù)輸血間隔48 小時(shí)，即第一次輸血后間隔2 天再次輸血。

中度出血患牛：需連續(xù)輸血，間隔為24～48 小時(shí)，即第一次輸血后間隔1～2 天再次輸血。

重度出血患牛：需連續(xù)輸血，間隔為24 小時(shí)，即每天輸血一次，必要時(shí)可上、下午各一次。

7 注意事項(xiàng)

采血和輸血時(shí)所用的器具或部位，均須消毒滅菌；

患有呼吸道疾患、腎臟或心臟疾病的犢牛少輸、慢輸；

可左右兩邊同時(shí)進(jìn)行輸血和輸液，也可先輸液，待有尿后再進(jìn)行輸血；

供血牛采血后需要輸入等量林格氏液；

不能選擇圍產(chǎn)期奶牛作為供血牛，采血時(shí)容易導(dǎo)致流產(chǎn)。