范 婭，馮文英，張 博，張繼偉，牛洺鑫，王鵬思，張宇鑄

（中化化工科學(xué)技術(shù)研究總院有限公司，北京 100083）

農(nóng)藥原藥熔點(diǎn)的研究對(duì)其制劑加工、儲(chǔ)存等具有很大的意義，如低熔點(diǎn)原藥在懸浮劑加工中出現(xiàn)原藥變軟難以砂磨等問(wèn)題，且熱貯后膏化、結(jié)晶、結(jié)塊，故一些低熔點(diǎn)原藥不適宜加工成懸浮劑等。由于低熔點(diǎn)農(nóng)藥原藥高溫易熔化，故需低溫陰涼儲(chǔ)存。

在農(nóng)藥登記試驗(yàn)中，農(nóng)藥原藥熔點(diǎn)/熔程的測(cè)定是其理化性質(zhì)測(cè)定的一項(xiàng)重要指標(biāo)。測(cè)定農(nóng)藥純品和原藥的熔點(diǎn)有多種方法[1]：0～300℃時(shí)宜采用毛細(xì)管法；20～300℃時(shí)宜采用金屬塊毛細(xì)管法或熔點(diǎn)顯微鏡法；-100～1 000℃時(shí)宜采用差熱分析儀或差示掃描量熱儀（DSC）等。在農(nóng)藥登記試驗(yàn)中，毛細(xì)管法和DSC法是最常用的。吳銳等[2]用這2種方法對(duì)藥物熔點(diǎn)進(jìn)行了分析，并研究了實(shí)驗(yàn)條件，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，毛細(xì)管法熔點(diǎn)結(jié)果延后1～2℃；DSC法熔點(diǎn)分析中，升溫起點(diǎn)和氣體流量參數(shù)影響較小，建議采用10℃/min的升溫速率作為試驗(yàn)參數(shù)。黃朝瑜等[3]研究了傳溫液法、自動(dòng)熔點(diǎn)測(cè)定儀法、熱分析法的適用性。江海波等[4]用DSC與熔點(diǎn)儀測(cè)定了雙酚A的熔點(diǎn)。卞雯等[5]用DSC法測(cè)定了蠟的熔點(diǎn)。本研究將用上述2種方法對(duì)啶蟲(chóng)脒、稻瘟靈等農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的熔點(diǎn)進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

DSC 8231型差示掃描量熱儀，美國(guó)賽默飛公司；YRT-3型藥物熔點(diǎn)儀，上海易測(cè)儀器設(shè)備有限公司；梅特勒MS半微量天平，梅特勒-托利多集團(tuán)。

農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：啶蟲(chóng)脒（批號(hào)20190606）、戊唑醇（批號(hào)20190604）、嘧菌酯（批號(hào)20191121）、阿維菌素（批號(hào)20210121），上海農(nóng)藥研究有限公司；稻瘟靈（批號(hào)20181005），沈陽(yáng)化工研究院有限公司；赤霉酸（GA4，GA7）（批號(hào)GA251-B），捷克Olchemlm公司；201-100#硅油，上海易測(cè)儀器設(shè)備有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)條件

1.2.1 毛細(xì)管法

采用藥物熔點(diǎn)儀，樣品干燥研磨后裝入毛細(xì)管中，將毛細(xì)管自由下落，使其壓實(shí)，樣品高度約3 mm，把毛細(xì)管插入到熔點(diǎn)儀的油浴中。將熔點(diǎn)儀初熔溫度設(shè)定比預(yù)定熔點(diǎn)低10℃，設(shè)置升溫速率。通過(guò)顯微鏡觀察熔化情況，當(dāng)樣品形成彎月面時(shí)為初熔溫度，全部液化時(shí)為全熔溫度。初熔溫度和全熔溫度差值大于0.3℃，需報(bào)告熔程；小于0.3℃，以全熔溫度作為熔點(diǎn)；熔化之前分解，則報(bào)告分解溫度[1]。

1.2.2 DSC法

采用電子天平稱取1～3 mg干燥研磨樣品，將其平鋪于鋁坩堝中，用壓片機(jī)壓實(shí)，置于DSC內(nèi)。氮?dú)饬魉俦３衷?00～300 mL/min，初始溫度30℃，設(shè)置升溫速率。在DSC曲線中，選取oneset值為初熔溫度（即DSC曲線上放熱峰前半段斜率最大處切線與基線前沿延伸線的交點(diǎn)），選取peak值作為全熔溫度（曲線放熱峰的峰值點(diǎn)）。327℃以下，初熔溫度和全熔溫度差值大于0.5℃，需報(bào)告熔程，小于0.5℃，以全熔溫度作為熔點(diǎn)，熔化之前分解，則報(bào)告分解溫度；1 000℃以下，差值標(biāo)準(zhǔn)為2℃[1]。

1.2.3 重復(fù)性

選取啶蟲(chóng)脒、稻瘟靈、戊唑醇、嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)品，用熔點(diǎn)儀和DSC分別測(cè)定熔點(diǎn)3次。在相同實(shí)驗(yàn)條件下，熔點(diǎn)儀升溫速率1.0℃/min，DSC升溫速率10.0℃/min。

1.2.4 升溫速率

選取啶蟲(chóng)脒、稻瘟靈、戊唑醇、嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)品，用熔點(diǎn)儀和DSC分別測(cè)定熔點(diǎn)，在相同實(shí)驗(yàn)條件下，熔點(diǎn)儀升溫速率分別為1.0、1.5、3.0℃/min，DSC升溫速率分別為1.0、5.0、10.0、15.0℃/min。

1.2.5 分解樣品2種方法的對(duì)比

選取阿維菌素、赤霉酸標(biāo)準(zhǔn)品，用熔點(diǎn)儀和DSC分別測(cè)定熔點(diǎn)。在相同實(shí)驗(yàn)條件下，熔點(diǎn)儀升溫速率為1.0℃/min，DSC升溫速率為10.0℃/min。

2 結(jié)果與分析

2.1 重復(fù)性

4種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品分別采用熔點(diǎn)儀和DSC測(cè)定熔點(diǎn)，結(jié)果見(jiàn)表1。采用毛細(xì)管法和DSC法測(cè)定，樣品的初熔和全熔溫度差值分別大于0.3℃和0.5℃時(shí)，需報(bào)告熔程。使用熔點(diǎn)儀時(shí)，稻瘟靈、啶蟲(chóng)脒、戊唑醇、嘧菌酯3次測(cè)定結(jié)果顯示，初熔溫度或全熔溫度的最大差值分別為0.2、0.1、0.3、0.2℃，最大差值均不超過(guò)0.3℃，符合農(nóng)業(yè)農(nóng)村部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求，故毛細(xì)管法重復(fù)性好；而使用DSC時(shí)，稻瘟靈、啶蟲(chóng)脒、戊唑醇、嘧菌酯3次測(cè)定結(jié)果顯示，初熔溫度或全熔溫度的最大差值分別為0.7、0.4、0.4、0.6℃，最大差值超過(guò)0.5℃，故DSC法重復(fù)性一般。

表1 毛細(xì)管法及DSC法測(cè)定4種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的熔點(diǎn)結(jié)果

2.2 升溫速率

4種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品分別采用不同的升溫速率用熔點(diǎn)儀和DSC測(cè)定熔點(diǎn)，結(jié)果見(jiàn)表2和表3。由表2可見(jiàn)，升溫速率由1.0℃/min提高到3.0℃/min，使用毛細(xì)管法4種樣品的熔點(diǎn)差異不大，結(jié)果影響較小。升溫速率越快，樣品內(nèi)部溫度分布越不均勻，發(fā)生過(guò)熱現(xiàn)象，導(dǎo)致觀察到的溫度略高。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部推薦使用1.0℃/min作為升溫速率。使用DSC時(shí)，升溫速率由1.0℃/min提高到15.0℃/min，相比全熔溫度，初熔溫度受影響較小。測(cè)得的熔程對(duì)升溫速率有相依性，出現(xiàn)明顯延后趨勢(shì)。降低升溫速率有助于熔點(diǎn)的準(zhǔn)確測(cè)量，但是升溫速率過(guò)低，測(cè)量時(shí)間較長(zhǎng)，影響檢測(cè)效率。兼顧到檢測(cè)效率和準(zhǔn)確性，低熔點(diǎn)樣品推薦使用5.0℃/min作為升溫速率，高熔點(diǎn)樣品推薦使用10.0℃/min作為升溫速率，或者根據(jù)檢測(cè)需要自行選擇升溫速率。

表2 不同升溫速率下毛細(xì)管法測(cè)定4種樣品溶點(diǎn)結(jié)果

表3 不同升溫速率下DSC法測(cè)定4種樣品熔點(diǎn)結(jié)果

2.3 分解樣品方法對(duì)比

由表4可知，阿維菌素及赤霉酸在毛細(xì)管法和DSC法測(cè)定下的熔點(diǎn)結(jié)果。阿維菌素和赤霉酸使用熔點(diǎn)儀測(cè)定時(shí)可以明顯觀察到初熔和全熔時(shí)的現(xiàn)象，期間產(chǎn)生大量氣泡，現(xiàn)象較明顯；使用DSC也能準(zhǔn)確分析到放熱峰，故對(duì)于低熔點(diǎn)熔融并分解且現(xiàn)象明顯的樣品，以上2種方法都適用；現(xiàn)象不明顯的樣品用2種方法結(jié)合檢測(cè)；高熔點(diǎn)樣品，比如多菌靈分解溫度高于300℃，使用DSC法測(cè)定。

表4 熔融并分解樣品的熔點(diǎn)測(cè)定結(jié)果

3 結(jié) 論

在農(nóng)藥登記試驗(yàn)中，農(nóng)藥熔點(diǎn)/熔程的測(cè)定常使用毛細(xì)管法和DSC法。使用熔點(diǎn)儀，重復(fù)性較好，操作簡(jiǎn)單，但此方法主觀因素影響較大，有時(shí)初熔溫度較難判斷，所以需多次測(cè)量。DSC法具有客觀性，且測(cè)量范圍更廣，但儀器較昂貴，重復(fù)性一般。毛細(xì)管法升溫速率對(duì)熔點(diǎn)結(jié)果影響較小，推薦使用1.0℃/min作為升溫速率；使用DSC時(shí)，隨著升溫速率的提高，測(cè)得的熔程有明顯延后趨勢(shì)，可根據(jù)需要選擇合適升溫速率。在GLP試驗(yàn)中，基于檢測(cè)成本、便利性等，對(duì)于較穩(wěn)定、有敏銳熔點(diǎn)的農(nóng)藥樣品，低熔點(diǎn)建議優(yōu)先采用毛細(xì)管法，熔點(diǎn)高于300℃的樣品采用DSC法。對(duì)于熔融過(guò)程中現(xiàn)象不明顯、熔融時(shí)分解的農(nóng)藥樣品，可以結(jié)合2種方法綜合分析熔點(diǎn)/熔程。