王艷艷，許爍(.江蘇聯(lián)合職業(yè)技術(shù)學(xué)院連云港中醫(yī)藥分院，江蘇 連云港 007； .沈陽(yáng)藥科大學(xué)藥學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 006)

0 引言

尼麥角林是一種具有強(qiáng)的腎上腺素作用的酯類麥角生物堿，廣泛應(yīng)用于臨床，能有效促進(jìn)腦梗塞后、神經(jīng)外科手術(shù)后神經(jīng)功能的恢復(fù)；治療由腦血管疾病引起的腦血管性癡呆、多發(fā)性腦梗死癡呆有較好的療效[1]。尼麥角林原型藥物本身的半衰期較短，患者需要多次服藥，因此將其制備成控制釋放12 h左右的滲透泵可以很好地緩慢恒速控制釋放藥物，一天服藥一次，使得臨床療效達(dá)約24 h，提高患者服藥的順應(yīng)性。

1 儀器與試藥

UV-9100型紫外可見分光光度計(jì)(北京瑞利分析儀器公司)； TDP型單沖壓片機(jī)(上海第一制藥機(jī)械廠)；尼麥角林原料藥(北京嘉瑞時(shí)代科技有限公司，批號(hào)：20100321)；聚氧乙烯(美國(guó)陶氏化學(xué)公司)；聚乙二醇(上海化學(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站)；醋酸纖維素(上海醋酸纖維素廠)；甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 尼麥角林雙層滲透泵型控釋片的制備

含藥層：將藥物、混懸劑等輔料分別過(guò)80目篩，稱取處方量的各組分，以等量遞加法共同過(guò)60目篩混勻，加無(wú)水乙醇制軟材，以20目篩制粒，40 ℃下干燥6 h，以18目篩整粒，加入適量硬脂酸鎂，混勻，備用。

助推層：助推劑、滲透壓促進(jìn)劑和氧化鐵紅分別過(guò)80目篩，稱取處方量的各組分，以等量遞加法共同過(guò)60目篩混勻，加無(wú)水乙醇制軟材，以20目篩制粒，40 ℃下干燥6 h，以18目篩整粒，加入硬脂酸鎂，混勻，備用。

包衣：將制好的片芯置于包衣鍋中，包衣，包衣后于40 ℃干燥24 h，在含藥層一側(cè)表面打孔即得。

2.2 尼麥角林滲透泵片Beagle犬體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究[2-4]

由于尼麥角林藥物進(jìn)入到體內(nèi)后迅速被酶解為MMDL(1,6-二甲基-8β-羥甲基-10α-甲氧基-尼麥角林)，MDL(6-二甲基-8β-羥甲基-10α-甲氧基-尼麥角林)等活性代謝產(chǎn)物，血漿中無(wú)法檢測(cè)到原型藥物，因此本文以其活性代謝產(chǎn)物之一的MMDL為檢測(cè)指標(biāo)。

2.2.1 溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱取MMDL對(duì)照品1.0 mg，置于100 mL容量瓶中，用乙腈溶解、定容、搖勻，配制成質(zhì)量濃度為10 mg·L-1的儲(chǔ)備液，至4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

內(nèi)標(biāo)溶液：精密稱取非那西丁對(duì)照品2.0 mg，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解、定容，配制成質(zhì)量濃度為20 mg·L-1的儲(chǔ)備液，至4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2.2 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18(200 mm×4.6 mm，5 μm)；預(yù)處理柱：YGW C18；

流動(dòng)相：甲醇-30 mmol/L磷酸二氫鈉溶液=60∶40(v∶v)，0.2 mol·L-1磷酸調(diào)節(jié)pH至4.0；

檢測(cè)波長(zhǎng)：228 nm；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2.3 血漿樣品處理

精密吸取200 μL血漿加入到10 mL具塞尖底玻璃離心試管中，加入50 μL內(nèi)標(biāo)溶液，加入乙腈150 μL，渦旋3 min， 8 000 r·min-1離心15 min，取上清液進(jìn)樣。進(jìn)樣量20 μL，記錄色譜圖及峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算Beagle犬體內(nèi)MMDL血藥濃度。

2.2.4 線性試驗(yàn)及方法學(xué)驗(yàn)證

精密量取空白狗血漿100 μL分別置于10 mL的具塞離心管中，精密加入MMDL標(biāo)準(zhǔn)溶液50 μL，再加入內(nèi)標(biāo)溶液50 μL(20 μg·L-1)，按血樣處理方法項(xiàng)下操作，記錄色譜圖和峰面積。以MMDL血藥濃度C為橫坐標(biāo)，藥物和內(nèi)標(biāo)峰面積的比值A(chǔ)(AMMDL/A內(nèi)標(biāo))為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，MMDL的線性范圍為1.0～100.0 μg·L-1，線性關(guān)系良好。本法精密度和回收率均符合要求。其中，低、中、高三種濃度血漿樣品的日內(nèi)RSD分別為11.68%、5.15%、7.81%；日間精密度分別為14.22%、6.82%、6.65%。低、中、高三種血漿濃度回收率分別為81.47%、81.23%、78.69%，RSD分別為7.1%、6.6%、6.0%.

2.2.5 給藥方案和樣品采集

6條健康Beagle犬隨機(jī)分成2組，每組3條。實(shí)驗(yàn)前一天禁食12 h，給藥2 h后統(tǒng)一進(jìn)水，4 h后統(tǒng)一進(jìn)食。自身對(duì)照，隨機(jī)交叉口服同等劑量(30 mg)自制尼麥角林雙層滲透泵控釋片或市售尼麥角林普通片，給藥間隔為一周。給藥后普通片分 別 于0.25、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、10、12、14、24 h共14個(gè)時(shí)間點(diǎn)取前肢靜脈血3～4 mL，控釋片分別于1、2、3、4、5、6、7、8、10、12、14、24、36 h共13個(gè) 時(shí) 間點(diǎn)取前肢靜脈血約4 mL，并立即移入涂有肝素的試管中，于 1 200×g離心10 min，分離血漿，于-20 ℃冰箱保存，待分析。一周后交叉。

2.2.6 樣品血藥濃度-時(shí)間曲線的繪制

將6條Beagle犬口服自制控釋片(Test)和市售普通片劑(Reference)的經(jīng)時(shí)血藥濃度平均值進(jìn)行擬合，得兩條藥-時(shí)曲線(如圖1所示)。

圖1 Beagle犬口服兩種尼麥角林制劑后MMDL藥-時(shí)曲線 (n=6, Mean±S.D.)

2.2.7 藥動(dòng)學(xué)參數(shù)計(jì)算

采用DAS2.0軟件，以非房室模型法分別處理尼麥角林普通片和尼麥角林雙層滲透泵片的血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)，求算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。血藥達(dá)峰時(shí)間tmax和峰濃度Cmax均為實(shí)測(cè)值，AUC0-t，AUC0-∞等由軟件計(jì)算給出。各主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)如表1所示。由表可知，受試制劑的Cmax明顯降低，tmax明顯延長(zhǎng)，達(dá)到預(yù)期目的。

表1 主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù) (n= 6)

分別對(duì)受試片與參比片的藥-時(shí)曲線下面積AUC0-t、Cmax進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換，然后對(duì)ln(AUC)和ln(Cmax)進(jìn)行三因素方差分析(周期間、制劑間和個(gè)體間)。根據(jù)tmax的分布特定，采用非參數(shù)檢驗(yàn)法和秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果表明，受試制劑與參比制劑相比 Cmax和tmax存在顯著性差異，說(shuō)明自制滲透泵片與市售片相比Cmax降低，具有良好的控釋效果。

由 雙單側(cè)t檢驗(yàn)結(jié)果 顯示AUC0-t的tL＞t(1-0.05)、tH＞t(1-0.05)同時(shí)成立，受試制劑的AUC0-t的90%可信限落在參比制劑88.2%～102.6%范圍內(nèi)，說(shuō)明受試制劑與參比制劑生物等效。

3 結(jié)語(yǔ)

文章以尼麥角林為模型藥物，制備了具有良好零級(jí)釋放特征的雙層滲透泵型控釋片，并進(jìn)行了體內(nèi)藥物代謝動(dòng)力學(xué)的研究。Beagle 犬體內(nèi)藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究表明，與參比試劑藥動(dòng)參數(shù)相比，尼麥角林雙層滲透泵控釋片的Cmax降低，tmax延長(zhǎng)，具有良好的控釋效果。體內(nèi)外相關(guān)性研究表明，自制滲透泵片具有良好的體內(nèi)外相關(guān)性。