葛京 張耀紅 徐建華 陳力 郭敏莉

摘 要：總結(jié)了淡水培育的青海湖裸鯉（Gymnocypris przewalskii）的人工繁殖技術(shù)，包括親魚(yú)培育、人工繁育等。2015—2018年繁育試驗(yàn)中，親魚(yú)平均相對(duì)懷卵量為 46.20粒/g 體重，催產(chǎn)率可達(dá)80.00%，受精率8952%，孵化率95.46%。

關(guān)鍵詞：青海湖裸鯉（Gymnocypris przewalskii）;人工催產(chǎn);人工授精;人工孵化

青海湖裸鯉（Gymnocypris przewalskii）屬鯉科，裸鯉屬，原產(chǎn)于高海拔地區(qū)的鹽堿水域，是中國(guó)名貴的冷水魚(yú)類(lèi)之一，因其味道鮮美而倍受人們喜愛(ài)，市場(chǎng)潛力大，其人工養(yǎng)殖極具發(fā)展前途[1]。青海湖裸鯉能在內(nèi)陸淡水中培育且能繁育成功[1-7]。為豐富當(dāng)?shù)乩渌~(yú)品種，河北省保定市綜合養(yǎng)殖試驗(yàn)推廣站（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“試驗(yàn)站”）自2013年引進(jìn)內(nèi)陸淡水培育的青海湖裸鯉苗種，放養(yǎng)于淶源縣昌源漁場(chǎng)，在內(nèi)陸淡水環(huán)境中養(yǎng)殖并進(jìn)行后備親魚(yú)培育，2015—2021年，連續(xù)7年進(jìn)行人工繁殖，取得一些經(jīng)驗(yàn)，現(xiàn)將人工繁殖技術(shù)總結(jié)如下。

1 親魚(yú)培育

1.1 親魚(yú)來(lái)源

后備親魚(yú)從河北省青海裸鯉良種場(chǎng)引進(jìn)。2013年購(gòu)買(mǎi)1 000尾（規(guī)格100～200 g/尾，以下稱(chēng)“首批親魚(yú)”），2015年開(kāi)始人工繁育;2017年引進(jìn)2 000尾（規(guī)格200～350 g/尾）。2018年6月，因陸續(xù)作為商品魚(yú)出售，兩次引進(jìn)的后備親魚(yú)共剩余300尾，開(kāi)始并池混養(yǎng)（以下稱(chēng)“混養(yǎng)親魚(yú)”），混養(yǎng)親魚(yú)中首批親魚(yú)占30%，2019年開(kāi)始人工繁育。人工繁育時(shí)親魚(yú)均為4齡以上。

1.2 水源

水源為拒馬河源頭的泉水，水流暢通，水質(zhì)清新、無(wú)污染、符合養(yǎng)殖用水標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 池塘培育條件

水泥池面積150～250 m2，水深0.8～1.2 m。微流水養(yǎng)殖，進(jìn)水口處流速40～50 dm3/s。溶解氧≥13 mg/L。冬季水溫3～6 ℃，夏季水溫最高17 ℃。親魚(yú)放養(yǎng)密度≤10 kg/m2。

1.4 飼料及投喂

投喂虹鱒親魚(yú)飼料（粗蛋白≥42.0%，粗脂肪≥8.0%，粗纖維≤5.0%，粗灰分≤14.0%，水分≤12.0%，賴(lài)氨酸≥2.6%，總磷≥0.9%），日投喂兩次，日投喂量為親魚(yú)體重的1%，并視水溫、天氣、魚(yú)體情況適當(dāng)調(diào)整。人工繁育期間投喂量為親魚(yú)體重0.5%～0.7%。

1.5 日常管理

堅(jiān)持每日3～4次巡池，觀(guān)察魚(yú)的活動(dòng)情況，及時(shí)撈取池面上樹(shù)葉等雜物，檢查進(jìn)排水口防止堵塞。做好養(yǎng)殖、用藥、銷(xiāo)售三項(xiàng)記錄。

2 人工繁育

2.1 雌雄鑒別

主要借助臀鰭形狀鑒別。雄性個(gè)體的臀鰭呈圓形，邊緣有較深的缺刻，最后2枚分支鰭條具有明顯的角質(zhì)倒鉤;雌性個(gè)體的臀鰭呈斜三角形或橢圓形，末端尖形，邊緣光滑無(wú)缺刻。

2.2 成熟度鑒別

繁殖季節(jié)青海湖裸鯉體表出現(xiàn)第二性征—“追星”，即白色顆粒狀凸起，手摸有刺突感。多分布于臀鰭和尾柄等部位，雌魚(yú)的“追星”在數(shù)量和大小上遠(yuǎn)不如雄魚(yú)。繁殖末期，“追星”消失，此時(shí)，產(chǎn)卵活動(dòng)結(jié)束[2]。

成熟好的雄魚(yú)生殖孔周?chē)彳?，輕壓腹部，即見(jiàn)精液流出。成熟雌魚(yú)腹部膨大柔軟，生殖孔紅腫外突，當(dāng)尾柄上提時(shí)，兩側(cè)卵巢下垂輪廓明顯，輕壓腹部有卵粒流出體外。

2.3 人工催產(chǎn)

2.3.1 挑選親魚(yú) 親魚(yú)3齡以上，體質(zhì)健壯、無(wú)病無(wú)傷、無(wú)畸形。為保證授精效果，親魚(yú)雌雄比為1∶（1.5～2）。

2.3.2 催產(chǎn)時(shí)機(jī) 一般在四月下旬水溫穩(wěn)定在13 ℃左右時(shí)進(jìn)行催產(chǎn)。雄魚(yú)能擠出精液，鏡檢精子活力較好，且有少量追星時(shí)，對(duì)腹部變軟的雌魚(yú)進(jìn)行催熟。

2.3.3 催產(chǎn)藥物及使用方法 采用促黃體素釋放激素A2催熟催產(chǎn)。用生理鹽水稀釋后按魚(yú)體重注射，劑量2～4 μg/kg，第一次注射4 d后檢查，視情況進(jìn)行第二次、第三次注射。第二次、第三次注射后間隔3 d檢查。注射部位為腹鰭基部，針頭與魚(yú)體呈45°角，入針深度0.5 cm左右。催產(chǎn)后沒(méi)有特意加大流量刺激親魚(yú)。

2.4 人工授精

采用濕法授精。繁殖條件成熟后，用手輕擠雌親魚(yú)腹部，使卵自然流出，置于浸泡在等滲液中的密眼塑料筐中，魚(yú)卵要全部沒(méi)入等滲液。隨后提起密眼塑料筐，稍微控水后將魚(yú)卵緩緩倒入另一干燥、光滑的新塑料盆，隨即擠入雄親魚(yú)精液，輕攪均勻，接著加入少量的等滲液繼續(xù)攪拌，使精卵充分接觸。靜置1～2 min再換清水洗卵2～3次，隨后置于微流水中，吸水55～65 min，待卵膜硬化并富有彈性，計(jì)數(shù)裝入孵化器中進(jìn)行孵化。

需要注意的是：整個(gè)采卵、授精及清洗的過(guò)程，必須在遮光條件下進(jìn)行，防止魚(yú)卵被陽(yáng)光直接照射。

2.5 親魚(yú)產(chǎn)后消毒

產(chǎn)后親魚(yú)用聚維酮碘（有效碘1%）30 mL/L流水消毒1 h或甲醛100 mL/L停水消毒30 min或食鹽60 g/kg浸泡1 min。

2.6 人工孵化

2.6.1 用水 孵化用水采用泉水或者淺表地下水，無(wú)雜質(zhì)和懸浮物，溶氧高于7.0 mg/L，水溫9～14 ℃。

2.6.2 孵化器 采用桶式孵化器孵化受精卵。水流自桶底流經(jīng)全部魚(yú)卵后從上部溢出。同批卵占用一個(gè)或以上孵化桶，非同批次卵不能合用孵化桶。孵化桶有效容積約為10 L，裝卵4萬(wàn)～6萬(wàn)粒/桶。調(diào)節(jié)水流使表層受精卵浮起不超過(guò)3 cm。

2.6.3 破膜 待發(fā)眼卵破膜時(shí)把卵轉(zhuǎn)入玻璃缸中繼續(xù)孵化。玻璃缸直徑2 m，缸深50 cm。因魚(yú)苗纖細(xì)如發(fā)絲，出水口處需要包裹一層密網(wǎng)（100目）防逃逸。玻璃缸注水量10～15 L/min。玻璃缸內(nèi)放置塑料孵化筐（規(guī)格：長(zhǎng)55 cm，寬45 cm，高18 cm）4個(gè)。調(diào)節(jié)孵化缸進(jìn)水方向，使孵化筐順時(shí)針或逆時(shí)針勻速轉(zhuǎn)動(dòng)。用泡沫塊調(diào)整孵化筐入水深度，使筐內(nèi)受精卵在水面10 cm以下。發(fā)眼卵0.8萬(wàn)～1萬(wàn)粒/筐，均勻鋪放。孵化筐上覆一層窗紗（18目），既可阻止受精卵漏出，又方便魚(yú)苗破膜后鉆出，進(jìn)入玻璃缸。玻璃缸底可鋪設(shè)納米管或氣石增氧，保證溶氧在7.0 mg/L。氣石位于相鄰塑料孵化筐縫隙的下方，以免頻繁振動(dòng)受精卵。剛孵化出來(lái)的魚(yú)苗伏臥于缸底，體質(zhì)嫩弱，顏色很淡，具有卵黃囊，體長(zhǎng)0.7～1.1 cm。魚(yú)苗極易集群，要及時(shí)用軟刷、尼龍抄網(wǎng)等推散，避免缺氧窒息。

在水溫12～14 ℃下，經(jīng)6～8 d后，卵黃囊逐漸吸收，體表黑色素增多，游動(dòng)能力增強(qiáng)，仔魚(yú)開(kāi)始上浮。

2.6.4 孵化期管理 整個(gè)孵化期間注意遮光和避免機(jī)械震動(dòng)。隨時(shí)挑揀孵化筐內(nèi)的水霉卵及死卵團(tuán)。及時(shí)清除玻璃缸內(nèi)的卵皮和死苗，刷洗出水孔，保持水流清新、暢通。

2.6.5 水霉防治 受精卵孵化第三天開(kāi)始使用甲醛溶液80～100 mg/L流水消毒20～30 min，到發(fā)眼前兩天結(jié)束，1次/d。

3 結(jié)果與分析

2015—2018年和2019—2021年兩個(gè)階段人工繁殖過(guò)程中，死亡雌魚(yú)數(shù)量、相對(duì)懷卵量、受精率、孵化率無(wú)明顯變化，但年催產(chǎn)率下降明顯，由80.00%降至47.86%。見(jiàn)表1。

4 討論與結(jié)論

4.1 催產(chǎn)情況

4.1.1 催產(chǎn)藥物 各文獻(xiàn)中采用的催產(chǎn)藥物主要為L(zhǎng)RH-A2、DOM，而本試驗(yàn)中沒(méi)有采用DOM，催產(chǎn)注射后檢查親魚(yú)的間隔時(shí)間也有所延長(zhǎng)，但催產(chǎn)結(jié)果比較理想。見(jiàn)表2。

4.1.2 催產(chǎn)率 關(guān)于催產(chǎn)率，康鵬天[6]的數(shù)據(jù)最高，為84.6%，閆保國(guó)等[3]的最低，為36%。閆保國(guó)等[1]認(rèn)為與四大家魚(yú)相比，青海湖裸鯉的催產(chǎn)率非常低，只有30%～40%，原因有多種猜測(cè)，但具體沒(méi)有定性。本試驗(yàn)中2015—2018年催產(chǎn)率平均80.00%，到2019—2021年催產(chǎn)率明顯下降，為47.86%。下降原因可能是種質(zhì)退化，也可能是親魚(yú)環(huán)境變化所致，培育條件中缺乏某些刺激，延緩了生殖發(fā)育。裸鯉原產(chǎn)于高海拔地區(qū)的鹽堿水湖泊中，每到繁殖季節(jié)來(lái)臨時(shí)，就成群結(jié)隊(duì)洄游，溯河而上尋找產(chǎn)卵場(chǎng)[9]。而本試驗(yàn)環(huán)境為內(nèi)陸淡水，鹽堿度不同，其生存的水域面積也差異巨大。

4.1.3 催產(chǎn)次數(shù) 雌親魚(yú)一般注射1～3次就能成熟可采卵。2020年在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，雌魚(yú)注射催產(chǎn)針劑超過(guò)三次，如果還按照原檢查魚(yú)的間隔時(shí)間（即3～4 d），80%以上會(huì)錯(cuò)過(guò)采卵期，雖然親魚(yú)腹部膨大，很柔軟，肛門(mén)紅腫外翻明顯，但擠壓腹部不能出卵，此類(lèi)親魚(yú)死亡率在70%以上。死魚(yú)腹部極漲大，解剖發(fā)現(xiàn)卵子過(guò)熟。根據(jù)以往經(jīng)驗(yàn)，如果注射次數(shù)增多，檢查魚(yú)的間隔時(shí)間要比前期縮短，以免親魚(yú)過(guò)熟。關(guān)于雄魚(yú)注射問(wèn)題，因?yàn)樾埕~(yú)數(shù)量大大多于雌魚(yú)，且發(fā)育早于雌魚(yú)至少一個(gè)月以上，每次檢查中有精液的雄魚(yú)數(shù)量很多，所以雄魚(yú)第一次不用注射。第二、三次視雌魚(yú)數(shù)量來(lái)定，這與閆保國(guó)等[1]觀(guān)點(diǎn)基本一致。

4.1.4 水流刺激 親魚(yú)注射催產(chǎn)針劑后增大水流刺激方面，2018年試驗(yàn)站做對(duì)比試驗(yàn)，每天加大水流刺激2 h與保持原養(yǎng)殖環(huán)境的微流水兩種處理之間，結(jié)果沒(méi)有區(qū)別。但2021年發(fā)現(xiàn)，減弱水流刺激和提前密集暫養(yǎng)對(duì)親魚(yú)性腺成熟有影響。為方便操作打針催產(chǎn)，以往親魚(yú)注射第二次催產(chǎn)針劑后單獨(dú)放在網(wǎng)箱內(nèi)（聚乙烯網(wǎng)包裹的空心鐵架，長(zhǎng)5 m、寬3 m）密集暫養(yǎng)，雌雄不分開(kāi)。網(wǎng)箱放在養(yǎng)殖親魚(yú)的水泥池（長(zhǎng)40 m，寬4～5 m）內(nèi)，位于進(jìn)水口處，進(jìn)水量40～50 dm3/s。2021年，第一次注射催產(chǎn)劑后將親魚(yú)放入網(wǎng)箱密集暫養(yǎng)，位于水泥池尾部排水口處，發(fā)現(xiàn)親魚(yú)性成熟時(shí)間晚于往年7 d以上，且沒(méi)有形成集中成熟。

4.2 產(chǎn)卵情況

本試驗(yàn)中2015—2018年親魚(yú)相對(duì)懷卵量平均為 46.20 粒/g 體重，遠(yuǎn)高于康鵬天等[6]的試驗(yàn)結(jié)果（相對(duì)懷卵量平均為17.45粒/g體重）及青海湖7齡野生親魚(yú)的相對(duì)懷卵量（32.3 粒/g 體重）[1]，與閆保國(guó)等[1]試驗(yàn)中的4 齡親魚(yú)的相對(duì)懷卵量（45.4 粒/g 體重）相差不大。

本試驗(yàn)中親魚(yú)產(chǎn)出的卵多為淡黃色，極少量為乳白色，占總卵數(shù)的3%～8%。卵受精吸水后有一層透明膜包裹，膜和內(nèi)部圓形胚胎之間有2～3 mm間隔。卵粒圓而飽滿(mǎn)、大小均勻、色澤晶瑩，手指微擠壓有彈力?？爹i天等[6]試驗(yàn)中親魚(yú)所產(chǎn)卵粒有四種顏色，分別是深黃色、淡黃色、乳白色、淡灰色，且親魚(yú)中產(chǎn)出淡黃色和暗灰色卵粒的個(gè)體數(shù)量基本均等，在整個(gè)群體所占比例較高。

分析相對(duì)懷卵量及卵質(zhì)量有所差異的原因，可能與飼料及營(yíng)養(yǎng)有關(guān)?？爹i天等[6]給親魚(yú)投喂蛋白含量32%的鯉魚(yú)全價(jià)配合飼料，另加部分水草;本試驗(yàn)親魚(yú)培育中投喂粗蛋白≥42.0%的虹鱒親魚(yú)飼料，親魚(yú)因飼料充足、蛋白水平高，營(yíng)養(yǎng)狀況比較好。

4.3 授精方法的選擇

授精方法一般有干法、半干法、濕法等。經(jīng)查閱文獻(xiàn)，多采用干法授精[2-6.8]。筆者在前期干法授精與濕法授精的對(duì)比試驗(yàn)中未發(fā)現(xiàn)明顯區(qū)別。濕法授精不需擦干魚(yú)體，生產(chǎn)上更方便快捷，且對(duì)親魚(yú)的損傷較低，所以選擇采用濕法授精。此問(wèn)題可待樣本數(shù)量擴(kuò)大后進(jìn)一步探討。

4.4 受精卵脫黏問(wèn)題

裸鯉卵屬沉性卵，微黏。一些學(xué)者認(rèn)為需要專(zhuān)門(mén)添加滑石粉等進(jìn)行脫黏處理[5-6]，也有一些學(xué)者認(rèn)為不需要，只需用清水浸洗2～3遍[2，4，8]。經(jīng)過(guò)實(shí)踐，筆者認(rèn)同后者觀(guān)點(diǎn)，即受精卵不需專(zhuān)門(mén)脫黏，只需清水浸洗2～3遍即可。

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（收稿日期：2021-10-09;修回日期：2021-11-04）