王 樂,朱琳芳,畢艷平

（1.吉林中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗(yàn)科;2.吉林中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院婦產(chǎn)科,吉林吉林 132000）

妊娠糖尿病是指沒有糖尿病癥狀的女性在懷孕時(shí)出現(xiàn)高血糖的癥狀。該病的發(fā)生提升了孕婦的臨床風(fēng)險(xiǎn)性[1]。孕婦在妊娠過程中發(fā)生糖尿病的病因主要對(duì)胰島素產(chǎn)生拮抗作用的激素分泌量呈現(xiàn)出明顯增加趨勢(shì)，同時(shí)對(duì)胰島素的敏感度降低[2-3]。明艷等[4]醫(yī)學(xué)者經(jīng)臨床研究證實(shí)，妊娠糖尿病患者的外周血miRNA-21表達(dá)明顯高于正常群體，臨床可通過該項(xiàng)指標(biāo)評(píng)價(jià)孕婦是否患有妊娠糖尿病，同時(shí)評(píng)估患者病情程度。分析外周血miRNA-21檢測(cè)在妊娠糖尿病患者中的表達(dá)情況對(duì)給予患者及時(shí)診斷和針對(duì)性治療具有積極意義。本次研究以妊娠糖尿病患者為對(duì)象，分析外周血miRNA-21檢測(cè)的應(yīng)用效果。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取吉林中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院2019年6月至2020年12月期間收治的75例妊娠糖尿病患者作為本次研究觀察組，選取同期75例無糖尿病孕婦作為對(duì)照組。對(duì)照組孕婦年齡為22～38歲，平均年齡（28.18±4.89）歲；產(chǎn)次1～2次，平均產(chǎn)次為（1.18±0.32）次；孕周22～32周，平均孕周為（27.32±1.25）周；觀察組孕婦年齡為23～39歲，平均年齡（28.76±4.13）歲；產(chǎn)次1～2次，平均產(chǎn)次為（1.41±0.22）次；孕周21～31周，平均孕周為（27.87±1.12）周。兩組患者一般資料對(duì)比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]：于孕24～28周行75 g口服葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)，達(dá)到以下1項(xiàng)或1項(xiàng)以上條件即可確診：①1 h血糖不低于10.0 mmol/L；②2 h血糖不低于8.5 mmol/L。納入標(biāo)準(zhǔn)：①處于21-32孕周；②具有完整臨床資料；③在近3個(gè)月內(nèi)不存在口服激素類藥物和避孕藥史；④單胎妊娠產(chǎn)婦。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在子宮內(nèi)膜異位癥；②有卵巢手術(shù)史；③存在盆腔結(jié)核史；④同時(shí)具有其他嚴(yán)重性內(nèi)分泌疾病。研究取得吉林中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 研究方法 于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下和餐后2 h采集兩組孕婦靜脈外周血各2 mL，常規(guī)方式對(duì)兩組孕婦血糖水平進(jìn)行檢測(cè)。采用TRIzol試劑（北京天根生化科技有限公司，規(guī)格：100 mL）移步提取法提取外周血總RNA，于-- 80 ℃環(huán)境中對(duì)所提取到的總RNA進(jìn)行凍存處理。采取電泳法檢測(cè)RNA完整性，采取紫外可見分光光度計(jì)（Amer sham，型號(hào)：Ultrospec 2100 pro）檢測(cè)RNA純度和濃度。

調(diào)查孕婦的相關(guān)資料，檢測(cè)孕婦的血糖指標(biāo)，包括孕婦的孕次、年齡、產(chǎn)次、身高、孕周等各項(xiàng)一般資料，檢測(cè)并記錄兩組孕婦的空腹血糖水平（FPG）、餐后2 h血糖水平（2 hPG）和外周血miRNA-21水平。通過qRT-PCR對(duì)兩組孕婦的miRNA-21表達(dá)水平展開檢測(cè)，選取實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（北京金諾美生物技術(shù)有限公司，國(guó)械注準(zhǔn)20153220948，型號(hào)：GNM-C7-8）實(shí)施qRT-PCR。對(duì)于cDNA和合成體系來說，其共計(jì)含有總RNA20～25 ng，將反應(yīng)條件設(shè)置為42 ℃，1 h；95 ℃，5 min，PCR反應(yīng)總體積參數(shù)為 20 μL。將實(shí)時(shí)PCR反應(yīng)條件設(shè)置為先于95 ℃展開預(yù)變性，時(shí)間為 10 min，然后調(diào)整為 95 ℃，10 s;60 ℃，1 min，于實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀上展開擴(kuò)增反應(yīng)。根據(jù)在內(nèi)參U6的反應(yīng)體系中獲取到的Ct值和niiRNA-21來對(duì)兩組孕婦的miRNA-21的相對(duì)表達(dá)水平展開計(jì)算。將5'-CGGCTAGCTTATCAGACTGA-3'作為miRNA-21的上游引物，將5'-CGGCTAGCTTATCAGACTGA-3'作為miRNA-21的下游引物，將5'-CGGCTAGCTTATCAGACTGA-3'作為U6上游引物，將5'-CGGCTAGCTTATCAGACTGA-3'作為U6下游引物。

1.3 觀察指標(biāo) ①分析妊娠糖尿病發(fā)生的影響因素：包括孕婦年齡超過35歲、產(chǎn)前肥胖、妊娠期營(yíng)養(yǎng)過度、喜食甜食、有糖尿病家族史和外周血miRNA-21。其中產(chǎn)前肥胖的判定依據(jù)為肥胖度超過10%，肥胖度=（實(shí)際體質(zhì)量-標(biāo)準(zhǔn)體質(zhì)量）/標(biāo)準(zhǔn)體質(zhì)量×100%；妊娠期營(yíng)養(yǎng)過度的判定依據(jù)為妊娠前3個(gè)月體質(zhì)量增加超過3 kg，3個(gè)月后每個(gè)月體質(zhì)量增加超過0.35 kg；以孕婦主觀意愿判定其是否喜食甜食。②對(duì)妊娠糖尿病發(fā)生展開Logistic多因素分析，包括孕婦年齡超過35歲、產(chǎn)前肥胖、妊娠期營(yíng)養(yǎng)過度、喜食甜食、有糖尿病家族史和外周血miRNA-21。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用（±s）表示，行t檢驗(yàn)；應(yīng)用Logistic回歸分析，行Waldχ2檢驗(yàn)，P＜0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 妊娠糖尿病發(fā)生的影響因素分析 對(duì)照組孕婦年齡超過35歲、產(chǎn)前肥胖、妊娠期營(yíng)養(yǎng)過度、有糖尿病家族史和外周血miRNA-21的占比低于觀察組（P＜0.05），見表1。

表1 妊娠糖尿病發(fā)生的影響因素分析[例數(shù)（%）]

2.2 妊娠糖尿病患者多因素分析 妊娠糖尿病發(fā)生的影響因素主要有孕婦年齡超過35歲、產(chǎn)前肥胖、妊娠期營(yíng)養(yǎng)過度、喜食甜食、有糖尿病家族史和外周血miRNA-21，OR值分別為 1.661、0.825、1.467、1.579、0.789和1.657（均P＜0.05），見表2。

表2 分析妊娠糖尿病發(fā)生的影響因素

3 討論

當(dāng)下，妊娠糖尿病缺乏統(tǒng)一的臨床診斷和篩查標(biāo)準(zhǔn)，受該病引發(fā)病因具有復(fù)雜性影響，該病的發(fā)生與環(huán)境因素和遺傳因素等密切相關(guān)，病情監(jiān)控尚無可靠且明確的生物標(biāo)志物。miRNA-21來源于長(zhǎng)RNA轉(zhuǎn)錄物，不存在非編碼DNA，是翻譯阻遏物起作用的目標(biāo)mRNA與核苷酸的3'UTR配對(duì)[6]。大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為miRNA-21是生物病理學(xué)的重要控制器和基因表達(dá)的關(guān)鍵監(jiān)管者，胰島β細(xì)胞在調(diào)節(jié)胰島素過程中，miRNA-21發(fā)揮著非常關(guān)鍵的作用[7]。胰島素抵抗作用的主要過程為激活磷脂酰肌醇-3-激酶和絲裂原活化蛋白激酶，對(duì)細(xì)胞代謝、生長(zhǎng)和凋亡過程起到控制作用[8]。

因miRNA-21能夠?qū)θ焉锾悄虿〉陌l(fā)生起到調(diào)控作用，對(duì)其表達(dá)量進(jìn)行抑制可以調(diào)控患者胰島素水平，經(jīng)臨床研究推測(cè)，miRNA-21能夠?qū)θ焉锾悄虿』颊叩男盘?hào)通路起到明顯調(diào)控作用，可以從更深層次探索該病的相關(guān)分子機(jī)制，深入研究miRNA-21功能，有利于為妊娠糖尿病患者的臨床診斷和治療開辟全新的渠道[9]。臨床上有關(guān)于miRNA-21的研究表明，其作用于基因翻譯以后，在修飾調(diào)控過程中發(fā)揮著重要意義，可以在轉(zhuǎn)錄后對(duì)靶基因的表達(dá)起到負(fù)性調(diào)控作用，其表達(dá)存在較高的特異度，能夠在血液檢測(cè)過程中作為疾病診斷的一項(xiàng)重要標(biāo)志物。妊娠糖尿病屬于一種多因素疾病，主要受環(huán)境因素、遺傳因素等影響，但是當(dāng)下臨床上尚未給出明確的疾病發(fā)生機(jī)制，需要展開更深入、更徹底的研究。該項(xiàng)指標(biāo)在糖尿病患者病情進(jìn)展中發(fā)揮著非常重要的作用，但是其于妊娠糖尿病患者中的具體影響尚不清楚。本次研究結(jié)果表明，對(duì)照組孕婦年齡超過35歲、產(chǎn)前肥胖、妊娠期營(yíng)養(yǎng)過度、有糖尿病家族史和外周血miRNA-21的占比低于觀察組（P＜0.05）。妊娠糖尿病發(fā)生的危險(xiǎn)因素主要有孕婦年齡超過35歲、產(chǎn)前肥胖、妊娠期營(yíng)養(yǎng)過度、喜食甜食、有糖尿病家族史和外周血miRNA-21。與張小燕等學(xué)者[10]的研究結(jié)論具有一致性。

綜上所述，給予妊娠糖尿病患者外周血miRNA-21檢測(cè)能夠顯著提升患者的診斷效果，可以為患者疾病的診斷與評(píng)估工作提供重要依據(jù)，具有推廣價(jià)值。