裴艷艷

（漯河市畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測檢驗(yàn)中心，河南 漯河 462000）

蛋白質(zhì)在生命活動中是一種重要的物質(zhì)基礎(chǔ)，在畜禽營養(yǎng)中具有非常重要的地位，其作用是其他營養(yǎng)物質(zhì)不可取代的。飼料中粗蛋白質(zhì)是所有含氮化合物的總稱，包括蛋白質(zhì)和其他一些非蛋白質(zhì)含氮化合物。粗蛋白是飼料營養(yǎng)成分中的一個主要營養(yǎng)指標(biāo)，也是評價飼料營養(yǎng)價值的重要指標(biāo)之一。因此，在飼料檢測中粗蛋白含量的測定是必測的常規(guī)檢測項(xiàng)目。國標(biāo)法測定飼料中的粗蛋白采用凱氏定氮法，由于操作過程相對復(fù)雜，如果操作不當(dāng)，就會導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。筆者通過查閱相關(guān)資料，總結(jié)在近些年飼料粗蛋白檢測操作實(shí)踐中積累的經(jīng)驗(yàn)，談?wù)勗诖值鞍讬z測過程中應(yīng)注意的事項(xiàng)。

1 樣品的采取與制備

根據(jù)樣品的產(chǎn)地、品種、成熟度、均勻度、存活狀態(tài)、新鮮度、生霉情況抽取有代表性的飼料樣品，按照四分法取得分析樣本，粉碎或研磨，樣品通過0.42 mm 標(biāo)準(zhǔn)篩，混勻，裝入密封容器中備用。粉碎過程要快，避免樣品的成分發(fā)生變化。由于飼料樣品顆粒較大，成分復(fù)雜，檢測時稱量樣品少，如果細(xì)度不夠，導(dǎo)致稱樣時樣品不均勻，會產(chǎn)生結(jié)果誤差。

2 樣品的稱取

國標(biāo)GB/T 6432-2018 中規(guī)定試樣用分析天平稱取0.5～2g（含氮量5mg～80mg），一式兩份，確保結(jié)果準(zhǔn)確。試樣的稱樣量應(yīng)根據(jù)具體情況而定，濃縮料、配合飼料、魚粉、豆粕等蛋白含量較高的樣品稱取量適當(dāng)稍低點(diǎn)，稻谷、玉米等蛋白含量較低的樣品稱取量適當(dāng)稍高點(diǎn)。結(jié)合筆者多年經(jīng)驗(yàn)，濃縮飼料（粗蛋白含量≥40%）稱樣量在0.5 g～0.6 g 之間，配合飼料（粗蛋白含量≤20%）稱樣量在0.6 g～0.8 g 之間，避免在滴定鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積過小，減少實(shí)驗(yàn)誤差，增加結(jié)果的準(zhǔn)確性。稱樣時應(yīng)讓樣品緊貼樣品勺，避免取出的樣品灑落。每稱完一個樣品后，都應(yīng)該用定量濾紙擦拭干凈取樣勺，避免影響下一個樣品取樣。

3 樣品的消化

消化時速度要緩慢，開始要用小火，待樣品焦化后，逐步緩慢加大火力，防止火力過大含氮物質(zhì)以氣體的形式損失，而造成檢測結(jié)果偏低。消化時將濺到瓶壁上的黑渣搖入瓶底硫酸溶液中，以避免消化不完全。消化過程要控制好溫度，過低則消化時間長，消化不完全，所以消化時最好采用可調(diào)式電爐。樣品消煮過程中，凱氏瓶內(nèi)可以加幾粒玻璃珠，用以防止硫酸漲沸流失。當(dāng)消化液達(dá)到透明狀態(tài)時，并非表示樣品已消化完全，至少還須加熱消化2 h 左右，防止蛋白含量結(jié)果偏低。

4 樣品的蒸餾

開始時要先打開冷凝水，蒸餾之前檢查每根乳膠管是否漏氣，整個裝置應(yīng)該是密封完全的，不能漏氣，否則產(chǎn)生的氨氣逸出會影響檢驗(yàn)結(jié)果。做樣品檢驗(yàn)之前，要用0.2 g 硫酸銨代替樣品檢查整個裝置的氣密性。加樣之前應(yīng)把整流管末端浸入吸收液，樣液加入蒸餾裝置后，用蒸餾水沖洗進(jìn)樣口，先塞好入口玻璃塞，并在進(jìn)樣口處用蒸餾水密封，然后再加入堿液，加入時要緩慢，不可太快。蒸餾時間以反應(yīng)室液體沸騰時開始計時，蒸餾時間低于4 min，蛋白含量偏低，蒸餾時間5 min，蛋白含量相對穩(wěn)定，蒸餾時間過長，含量沒有明顯增加，增加檢測時間。

5 樣品的空白測定

是衡量整個操作過程中一個非常重要的綜合性指標(biāo)，良好的空白值是保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確的前提，粗蛋白的空白測定是用0.5 g 蔗糖代替樣品，消耗0.1 mol/l 鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積不得超過0.2 ml 或者消耗0.02 mol/l 鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積不得超過0.3 ml。檢測時若空白值偏高可能是所用試劑級別不夠、試驗(yàn)用水不純或玻璃器皿不干凈等原因造成的。

6 樣品的滴定

是檢測粗蛋白含量的最后一步，滴定用的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度必須準(zhǔn)確，否則直接影響檢測結(jié)果。滴定前要將滴定管中所有的氣泡排出，調(diào)節(jié)好活塞的松緊度，防止滴定液灑漏。滴定時讀數(shù)不準(zhǔn)、滴定液灑落會影響蛋白含量的檢測結(jié)果。