張海霞，張 蓉

（甘肅省瓜州縣畜牧獸醫(yī)技術(shù)服務(wù)中心，甘肅 瓜州 736100）

小反芻獸疫病毒屬副黏病毒科麻疹病毒屬，主要感染山羊、綿羊等小反芻動(dòng)物，俗稱“羊瘟”，非人畜共患傳染病，病畜的排泄物與分泌物是主要傳染源。該病潛伏期一般為4～5 d，最長(zhǎng)可達(dá)21 d。山羊感染該病后臨床癥狀猶為嚴(yán)重，綿羊偶有嚴(yán)重病例發(fā)生。被感染的動(dòng)物體溫急劇上升，口腔黏膜內(nèi)充血，煩躁不安、食欲減退，背毛粗糙無(wú)光澤，鼻液呈膿性，呼出惡臭氣體，從而使養(yǎng)殖企業(yè)及養(yǎng)殖戶遭受巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1]。

羊痘病毒是一種脫氧核糖核酸病毒，對(duì)乙醚敏感，具有極強(qiáng)的感染力與傳播力，俗稱“羊天花”，是一種人畜共患的急性、熱性、高接觸性傳染病[2]。羊群一旦感染該病，放牧人員應(yīng)高度重視，立即采取防控措施。該病潛伏期為4～20 d，初期病羊體溫升高至40～42℃，呼吸加快，精神極度沉郁，食欲減退，伴以可視黏膜卡他、膿性炎癥，經(jīng)1～2 d后皮膚少毛或無(wú)毛處開始發(fā)痘，如綠豆或豌豆大的淡紅色圓形充血斑點(diǎn)，而后凸出于皮膚表面形成堅(jiān)實(shí)的結(jié)節(jié)，再經(jīng)5～7 d變?yōu)榛野咨馄健⒅醒氚枷莸乃?。此時(shí)病羊體溫下降，水泡很快化膿，而后漸漸干涸，形成黃黑褐色痂皮，約7 d痂皮脫落，留有蒼白瘢痕。該病病期長(zhǎng)達(dá)3～4周，多以痊愈告終。在發(fā)病過程中，最忌并發(fā)其他疾病，如在膿泡期有壞死桿菌繼發(fā)感染，病變部就會(huì)泡痘融合，形成壞疽性潰瘍，發(fā)出惡臭氣味，此為惡性病變，容易造成病羊死亡。羔羊、體弱羊易并發(fā)眼結(jié)膜炎、鼻炎、咽炎，并可繼發(fā)肺炎、胃腸炎和膿血癥等。綿羊中細(xì)毛羊比粗毛羊或土種羊更易感染。羊痘對(duì)成年羊危害較輕，死亡率為1%～2%，對(duì)羊羔危害嚴(yán)重，死亡率達(dá)20%～50%，從而使養(yǎng)殖企業(yè)及養(yǎng)殖戶遭受巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

對(duì)以上2種疫病進(jìn)行免疫接種是預(yù)防和控制疫病發(fā)生的最主要手段，但仍存在很多免疫難題，如疫苗種類過多、接種強(qiáng)度大、抗體持續(xù)時(shí)間短、免疫程序繁瑣、經(jīng)費(fèi)及人力緊張等。與單獨(dú)疫苗相比，聯(lián)合疫苗防疫效果更好。因?yàn)槁?lián)合疫苗可以同時(shí)預(yù)防多種疾病，可減少動(dòng)物的接種次數(shù)，有效避免漏種情況的發(fā)生，提高疫苗接種率，同時(shí)可減少接種后的不良反應(yīng)。因此，為了探討小反芻獸疫、山羊痘二聯(lián)活疫苗的免疫效果，同時(shí)加強(qiáng)對(duì)小反芻獸疫和羊痘的防控，及時(shí)掌握這兩種病的流行病學(xué)動(dòng)態(tài)，在瓜州縣鎖陽(yáng)城鎮(zhèn)某養(yǎng)殖場(chǎng)開展了小反芻獸疫、山羊痘二聯(lián)活疫苗對(duì)羊只的免疫效果試驗(yàn)，以期為養(yǎng)殖企業(yè)及養(yǎng)殖戶選擇最佳疫苗和制定科學(xué)的免疫程序提供依據(jù)。

1 試驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

在瓜州縣鎖陽(yáng)城鎮(zhèn)某養(yǎng)殖場(chǎng)選擇未接種小反芻獸疫和羊痘疫苗的4月齡健康羊60只。按照正常的飼喂方法，由專人負(fù)責(zé)飼養(yǎng)管理。

1.2 試驗(yàn)疫苗

小反芻獸疫、山羊痘二聯(lián)活疫苗（Clone9株+AV41株），由華派生物工程集團(tuán)有限公司生產(chǎn)（批號(hào)獸藥生字221014035），甘肅省酒泉市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心提供。

1.3 其他

450 nm、630 nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器，加樣槽，酶標(biāo)儀，離心機(jī)等。

1.4 主要試劑

酶標(biāo)板、20X濃縮洗滌液、陰陽(yáng)性對(duì)照血清、抗體工作液、酶標(biāo)記物、TMB底物液、終止液（試劑全部由深圳芬德生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)020016）。

GPV抗原包被板、GPV陰性血清、GPV陽(yáng)性血清、酶標(biāo)抗原（Ⅶ）、20X濃縮洗滌液、底物液、終止液（試劑全部由青島立見診斷技術(shù)發(fā)展公司生產(chǎn)批號(hào)20312102）。

2 試驗(yàn)方法

2.1 試驗(yàn)分組及免疫

選擇4月齡無(wú)小反芻獸疫、羊痘抗體的健康羊只60只，按疫苗說(shuō)明書規(guī)定，皮內(nèi)注射小反芻獸疫、山羊痘二聯(lián)活疫苗[3]（Clone9株+AV41株）0.5 ml/只。

2.2 抗體監(jiān)測(cè)

對(duì)免疫前及免疫后21 d、42 d、63 d、84 d、105 d羊只頸靜脈采血，共60份，分離血清，按照GB/T 27982-2011小反芻獸疫診斷技術(shù)和NY/T 576-2015綿羊痘和山羊痘診斷技術(shù)要求進(jìn)行。

3 結(jié)果

3.1 不同劑型小反芻獸疫、山羊痘二聯(lián)活疫苗（Clone9株+AV41株）的免疫效果對(duì)比

從表1可以看出，在2組監(jiān)測(cè)的60份樣品中，免疫前的抗體均呈陰性，免疫后小反芻獸疫抗體存在，羊痘抗體不存在。

表1 不同劑型疫苗的免疫效果對(duì)比 單位：只

3.2 不同劑型小反芻獸疫、山羊痘二聯(lián)活疫苗免疫后產(chǎn)生抗體保護(hù)情況

小反芻獸疫、山羊痘二聯(lián)活疫苗（Clone9珠+AV41珠）皮內(nèi)注射后再隔21 d分別進(jìn)行5次采血檢測(cè)，每次檢測(cè)出羊只體內(nèi)有小反芻獸疫抗體形成，但羊痘抗體沒有形成。

4 小結(jié)與討論

小反芻獸疫、山羊痘二聯(lián)活疫苗（Clone9株+AV41株）免疫效果不理想，兩者不能混在一起接種，重組使用會(huì)降低兩者抗體效價(jià)。

免疫反應(yīng)是一個(gè)復(fù)雜的生物學(xué)過程，免疫效果會(huì)受到多種因素的影響，如環(huán)境因素、免疫抑制性疾病、營(yíng)養(yǎng)因素、免疫方法及應(yīng)激因素等。同時(shí)，疫苗使用不當(dāng)、未按要求使用指定的稀釋劑、注射器定量控制失敗、針頭過短過粗、免疫程序不當(dāng)、接種時(shí)間和次數(shù)安排不當(dāng)?shù)?，也?huì)影響免疫效果。需要注意的是，幼齡動(dòng)物免疫器官尚未成熟，免疫應(yīng)答能力不完全，免疫過早時(shí)，免疫效果也不好。遺傳因素和品種不同，個(gè)體對(duì)疫苗的反應(yīng)能力也不同。當(dāng)環(huán)境中存在大量病原微生物時(shí)，任何一種疫苗注射都不能達(dá)到最佳免疫效果，環(huán)境衛(wèi)生不良會(huì)降低動(dòng)物的抵抗力。此外，飼養(yǎng)密度過大、室內(nèi)濕度高、室內(nèi)通風(fēng)不良、噪音嚴(yán)重、突然換料等因素會(huì)對(duì)畜禽造成不同程度的應(yīng)激，從而在降低抵抗力的同時(shí)影響免疫效果。因此，在免疫過程中應(yīng)避免應(yīng)激因素。