隋雁南，任云華，羅 陽(yáng)，羊 慧，薛 敏，張菊華，閆俊書，周維仁*

（1.泰興瑞泰化工有限公司，江蘇 泰州 225453；2.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所，南京 210014）

為滿足畜禽所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和能量需求，通常在飼料生產(chǎn)加工過(guò)程中會(huì)添加一些油脂含量較高的原料。但由于油脂含量高的飼料在加工、貯存和運(yùn)輸過(guò)程中受光照、溫度等因素的影響極易發(fā)生氧化酸敗，飼料中一些金屬鹽礦物質(zhì)的添加也會(huì)促進(jìn)飼料的氧化酸敗，從而導(dǎo)致飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值降低、變質(zhì)、變味，降低飼料的適口性，嚴(yán)重影響畜禽的身體健康[1]。因此，在飼料中添加抗氧化劑防止或延緩飼料氧化酸敗、延長(zhǎng)飼料貯存期尤為重要。目前，常用的抗氧化劑為人工合成抗氧化劑，如乙氧基喹啉（Ethoxyquin,EQ）、二丁基羥基甲苯（Butylat?ed hydroxytoluene,BHT）、沒(méi)食子酸丙酯（Propyl gal?late,PG）和特丁基對(duì)苯二酚（Butylhydroquinone,TB?HQ）等。EQ 和BHT 作為飼料抗氧化劑均可用于保護(hù)飼料中蛋白質(zhì)、脂肪及維生素不被氧化，且二者的作用機(jī)理相似，但關(guān)于二者對(duì)濃縮料抗氧化保護(hù)效果的對(duì)比研究甚少，因此，本試驗(yàn)以25%的豬濃縮料作為研究對(duì)象，對(duì)比研究了EQ和BHT對(duì)豬濃縮料的抗氧化保護(hù)效果，以期為實(shí)際生產(chǎn)合理選用抗氧化劑提供科學(xué)有效的指導(dǎo)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 添加劑及濃縮料

乙氧基喹啉（EQ）粉劑，有效成分含量為60%，泰興瑞泰化工有限公司產(chǎn)品；二丁基羥基甲苯（BHT），有效成分含量為99%，市售；25%豬濃縮料（豆粕80%，5%預(yù)混料20%），南通康之潤(rùn)農(nóng)牧有限公司產(chǎn)品；食用大豆油，市售。

1.2 試驗(yàn)儀器與試劑

恒溫培養(yǎng)箱（型號(hào)為HWS-010），江蘇富奇恒溫設(shè)備有限公司產(chǎn)品；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（型號(hào)為RE-2000A），鄭州特爾儀器設(shè)備有限公司產(chǎn)品；分光光度計(jì)（型號(hào)為UV-2000），尤尼柯儀器有限公司產(chǎn)品；恒溫水浴鍋（型號(hào)為HHS-21-6），常州諾基儀器有限公司產(chǎn)品。

冰乙酸、三氯甲烷、異丙醇、石油醚、三氯乙酸、乙二胺四乙酸二鈉、硫代巴比妥酸，以上試劑均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.3 試驗(yàn)分組

試驗(yàn)按照有效含量一致的原則將EQ和BHT兩種抗氧化劑添加到25%濃縮料中，共設(shè)6個(gè)組，添中不同水平的抗氧化劑；另外設(shè)置1組不加任何抗氧化劑的對(duì)照組（C組）。具體分組情況及抗氧化劑的添加量見(jiàn)表1。

表1 25%濃縮料中各抗氧化劑的添加量 mg·kg-1

1.4 貯存試驗(yàn)

試驗(yàn)采用逐級(jí)混勻的方式，先將濃縮料與食用大豆油（添加量為8%）混合均勻，再將抗氧化劑按各分組的要求進(jìn)行添加并混合均勻，對(duì)照組不添加任何抗氧化劑。然后置于溫度為37 ℃、濕度為60%的恒溫恒濕培養(yǎng)箱中貯存，每隔7 d進(jìn)行1次油脂氧化檢測(cè)，每組每次測(cè)定3個(gè)重復(fù)，試驗(yàn)期為90 d。

1.5 指標(biāo)檢測(cè)

按照GB 5009.229—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中酸價(jià)的測(cè)定》提取油脂的酸價(jià)（AV，mg·g-1），按照GB 5009.227—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中過(guò)氧化值的測(cè)定》測(cè)定過(guò)氧化值（POV，g·100 g-1）及國(guó)標(biāo)GB 5009.181—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中丙二醛的測(cè)定》測(cè)定丙二醛含量（MDA，mg·kg-1）[2-4]。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

各試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2016 進(jìn)行整理，利用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件的one-way ANOVA 進(jìn)行單因素方差分析，使用LSD 法進(jìn)行多重比較，P<0.05 為顯著差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度抗氧化劑對(duì)濃縮料POV值的影響

試驗(yàn)持續(xù)進(jìn)行了12周，POV值測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2和圖1。

表2 EQ和BHT對(duì)豬濃縮料POV值的影響 g·100 g-1

圖1 EQ和BHT對(duì)豬濃縮料POV值的影響

由表2可以看出，沒(méi)有添加任何抗氧化劑的對(duì)照組（C 組），在第5 周時(shí)油脂氧化達(dá)到最高點(diǎn)（POV 值達(dá)228.59 g·100 g-1）；在第6 周時(shí)，C 組POV 值迅速降低，到第7 周時(shí)油脂進(jìn)入氧化末期；同時(shí)，在第1～7周時(shí)，C組POV值均顯著高于其他各處理組（P<0.01）。在第3～12 周時(shí)，添加兩種抗氧化劑的試驗(yàn)組POV 值基本隨著抗氧化劑添加量的增加呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢(shì)；同時(shí)，在第1～10 周時(shí)，添加60%EQ各組的POV值與對(duì)應(yīng)劑量BHT各組的POV 值相比在數(shù)值上相對(duì)較低；在第3～9 周時(shí)，B1組POV值均顯著高于其他各處理組（P<0.05）；而E2 和E3 組的POV 值在第3～12 周時(shí)均顯著低于其他各處理組（P<0.05），二者之間差異不明顯（P>0.05），但E3組POV在數(shù)值上要低于E2組。

由圖1可知，在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)C組、B1組、B2組和E1 組的POV 值均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，且在開始迅速升高至最高點(diǎn)后又迅速降低；而其余各組POV 值均呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)，且上升速度相對(duì)緩慢，其中B3組的POV 值在試驗(yàn)?zāi)┢陂_始快速升高，而其余幾組的POV值仍處于較低水平。

2.2 不同濃度抗氧化劑對(duì)濃縮料AV值的影響

試驗(yàn)測(cè)定濃縮料酸價(jià)見(jiàn)表3和圖2。

表3 EQ和BHT對(duì)豬濃縮料AV值的影響 mg·g-1

圖2 EQ和BHT對(duì)豬濃縮料AV值的影響

由表3 可知，在試驗(yàn)分別進(jìn)行至第6 周、第8周和第11周時(shí)，C組、B1組和B2組提油量分別不足以測(cè)定AV值，故放棄測(cè)定其AV值。各組AV值隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而不斷提高，且在0～5周內(nèi)C組和E1組AV值在數(shù)值上均低于B3組，其中在第0～4周時(shí)，C組和E1組AV值均顯著低于B3組（P<0.05）。

在第7～12 周時(shí)，E1 組AV 值在數(shù)值上均要低于其他各處理組，其中在第8～12 周時(shí)顯著低于E2、E3和B3組（P<0.05）。

由圖2 可以看出，各組AV 值隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸升高，其中從第8 周開始，E1、B2 和B3 組AV值要低于E2和E3組。

2.3 不同濃度抗氧化劑對(duì)濃縮料MDA含量的影響

測(cè)定濃縮料MDA含量，結(jié)果見(jiàn)表4和圖3。

圖3 EQ和BHT對(duì)豬濃縮料MDA含量的影響

表4 EQ和BHT對(duì)豬濃縮料MDA含量的影響 mg·kg-1

在試驗(yàn)分別進(jìn)行至第7 周、第8 周和第11 周時(shí)，C組、B1組和B2組提油量分別不足以測(cè)定MDA含量，故放棄測(cè)定其MDA。由表3中數(shù)據(jù)可以看出，沒(méi)有添加任何抗氧化劑的C組，在第4周時(shí)MDA含量達(dá)到最高點(diǎn)（MDA 含量已達(dá)到10.87 mg·kg-1）；在第5 周時(shí)，C組MDA含量開始逐漸降低；同時(shí)，在1～5周時(shí)，C組MDA含量均顯著高于其他各處理組（P<0.05），在第6 周時(shí)，C 組MDA 含量顯著高于E1、E2、E3、B2 和B3 組（P<0.05），顯著低于B1組（P<0.05）。由表3 還可以看出，在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)，添加兩種抗氧化劑的試驗(yàn)組隨著抗氧化劑添加量的增加，各組MDA 含量均呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢(shì)，同時(shí)，添加60%EQ各組的MDA含量與對(duì)應(yīng)劑量BHT 各組的MDA 含量相比數(shù)值上相對(duì)較低，這與POV 值的變化趨勢(shì)基本相同。在第1～7 周時(shí)，B1組MDA含量要顯著高于其他添加抗氧化劑各組（P<0.05）。在第4～9 周時(shí)，B2 組MDA 含量要顯著高于其他添加抗氧化劑各組（P<0.05）。在第6～12 周時(shí)，E2 和E3 組MDA 含量要顯著低于其他添加抗氧化劑各組（P<0.05），二者之間差異不明顯（P>0.05），但E3 組MDA 含量在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)數(shù)值上均低于E2 組。

如圖3 所示，在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)C 組和E1 組MDA 含量均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，且在開始時(shí)升高相對(duì)迅速；而其余各組MDA 含量均呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)，其中E3 組MDA 含量上升相對(duì)緩慢，在試驗(yàn)?zāi)┢谌蕴幱谳^低水平。由表3還可以看出，各組MDA 含量的變化趨勢(shì)基本與POV 值相同，且E3組MDA含量在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)均低于其他各處理組。

3 討論

氧化酸敗是油脂貯藏過(guò)程中保持新鮮的最大阻礙，氧化酸敗過(guò)程是不飽和脂肪酸經(jīng)過(guò)氧化最終形成低分子化合物的過(guò)程，氧化酸敗的初級(jí)產(chǎn)物是氫過(guò)氧化物，其性質(zhì)一般不穩(wěn)定，容易進(jìn)一步氧化生成低分子化合物[5-6]。過(guò)氧化值（POV 值）的測(cè)定原理是利用樣品中的過(guò)氧化物與碘化鉀反應(yīng)并生成碘，再用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定析出的碘，從而算出過(guò)氧化值的量[3]。王永慶等[7]研究發(fā)現(xiàn)，POV指標(biāo)是評(píng)價(jià)豆油、豬油和菜籽油等油脂氧化程度的敏感指標(biāo)之一。在本試驗(yàn)中，除B3 組外其他各組POV 值均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，先上升可能是由于在這一階段氫過(guò)氧化物的生成速率大于分解速率，而后面下降可能是由于過(guò)氧化物的生成速率又小于分解速率。同時(shí)，在本試驗(yàn)中，添加60%EQ各組的POV值與對(duì)應(yīng)劑量BHT各組的POV值相比在數(shù)值上相對(duì)較低；E2、E3 組POV 值始終處于較低水平，這可能是由于劑量較高的EQ 清除自由基的能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對(duì)應(yīng)劑量的BHT，EQ 抗氧化能力較BHT更佳。

AV 值是用來(lái)檢測(cè)游離脂肪酸含量的[8]。在油脂貯藏過(guò)程中，各種環(huán)境因素的影響下容易發(fā)生變質(zhì)，這時(shí)就會(huì)水解產(chǎn)生游離的脂肪酸，測(cè)定出的AV 值就會(huì)升高。游離脂肪酸對(duì)飼料品質(zhì)影響不大，但是大量的游離脂肪酸會(huì)導(dǎo)致飼料發(fā)出難聞氣味，使得畜禽食欲降低[9]。

在本試驗(yàn)中，各試驗(yàn)組AV 值均呈現(xiàn)略微不同程度的上升，這可能是由于隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，濃縮料中的油脂逐漸開始酸敗。由于AV值只能反映三酰甘油脂肪水解產(chǎn)生游離脂肪酸的含量多少，進(jìn)一步準(zhǔn)確反映油脂酸敗程度還需要測(cè)定其POV 值和MDA含量。

MDA 作為氧化反應(yīng)的次級(jí)產(chǎn)物，與初級(jí)產(chǎn)物氫過(guò)氧化物息息相關(guān)，同時(shí)也能較好地反映濃縮料的氧化程度[10]。在本試驗(yàn)中，MDA 含量大多也呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì)，這與POV 值變化趨勢(shì)相似，在初期階段MDA含量升高可能是由于MDA的產(chǎn)生速度比氫過(guò)氧化物產(chǎn)生的速度快[11]，而后，在終止階段，MDA 產(chǎn)生的速度逐漸變慢，雖然MDA還會(huì)繼續(xù)產(chǎn)生，但是蛋白質(zhì)的羰基化會(huì)使MDA 總體含量下降。

在本試驗(yàn)中，E3組的MDA 含量一直變化不明顯，E2 組的MDA 含量后期才開始增加，整體E2、E3組MDA還是遠(yuǎn)小于其他試驗(yàn)組，且對(duì)應(yīng)劑量的EQ 組MDA 含量低于BHT 組，這說(shuō)明EQ 比BHT 可能更能阻止MDA的生成。

4 結(jié)論

綜上所述，本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，兩種抗氧化劑均可起到抗氧化保護(hù)的效果，隨著抗氧化劑添加量的增加，其對(duì)濃縮料中油脂的保護(hù)效果越好；等濃度的EQ 抗氧化劑對(duì)濃縮料中油脂的保護(hù)效果要優(yōu)于BHT 抗氧化劑；添加150 mg·kg-1的60%EQ 抗氧化劑對(duì)濃縮料中油脂的保護(hù)效果要優(yōu)于其有效成分3 倍劑量的BHT。