彭麗娜,武川軍,馮志星,趙倩
(邯鄲市中心醫(yī)院 耳鼻喉科,河北 邯鄲056001)
原發(fā)性喉癌以喉鱗狀細(xì)胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma, LSCC)最為常見,患者以聲嘶、咳嗽、呼吸困難為主要臨床表現(xiàn),早期確診并根據(jù)個體化病情采取合理的治療方案是提升患者5年生存率的最可靠方式[1-2]。腫瘤細(xì)胞迅速增殖、侵襲、遷移等是導(dǎo)致患者生存時間短、預(yù)后不良的重要因素,故尋找腫瘤惡性演進(jìn)過程中扮演重要角色的分子是后續(xù)靶向治療的基礎(chǔ),對早期明確腫瘤惡性程度及治療方案的選擇具有重要意義。吲哚胺2,3-雙加氧酶1(indoleamine 2, 3-dioxygenase 1, IDO1)是肝外色氨酸沿犬尿氨酸途徑分解代謝過程中的一種限速酶,已被證實在宮頸癌[3]、食管癌[4]等惡性腫瘤組織中呈異常高表達(dá),并且參與腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移等過程,與患者的不良預(yù)后密切相關(guān)。 白細(xì)胞介素-10(Interleukin-10, IL-10)是腫瘤發(fā)生過程中重要的免疫抑制因子,IL-10 在甲狀腺癌[5]、胰腺癌[5]等腫瘤中高表達(dá),參與腫瘤細(xì)胞周期調(diào)控、免疫逃逸、遷移等過程,與腫瘤的惡性程度和不良預(yù)后相關(guān)。目前關(guān)于IDO1、IL-10 在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其對疾病預(yù)后的影響研究不多,本次研究以此為切入點展開分析,旨在明確檢測IDO1、IL-10 表達(dá)在LSCC 病情評估、預(yù)后判斷中的作用。
選取2015年7月—2017年7月邯鄲市中心醫(yī)院進(jìn)行喉部腫瘤切除術(shù)治療且術(shù)中病理確診為LSCC 的患者89 例作為研究對象。其中,男性48例,女性41 例;年齡32~78 歲,平均(59.38±8.21)歲;體質(zhì)量指數(shù)(BMI)為21~27 kg/m2,平均(24.03±2.17)kg/m2。術(shù)中留取患者的LSCC 組織及癌旁組織標(biāo)本各89 份。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn),患者簽署知情同意書。
納入標(biāo)準(zhǔn):①符合LSCC 診斷,首次確診并接受治療、既往無相關(guān)病史;②根治性手術(shù)前無放化療等保守治療;③合并喉部嚴(yán)重感染性疾病;④年齡18~80 歲。排除標(biāo)準(zhǔn):①復(fù)發(fā)性喉癌、喉腺癌;②合并其他原發(fā)惡性腫瘤疾病;③妊娠或者哺乳期女性;④拒絕接受隨訪者。
所有標(biāo)本組織均離體后2 h 內(nèi)放入4%甲醛中固定24 h,石蠟包埋,常規(guī)病理蘇木精-伊紅染色。常規(guī)石蠟切片,每張切片厚4 μm。免疫組織化學(xué)法檢測標(biāo)本組織中IDO1、IL-10 的表達(dá)。免疫組織化學(xué)試劑盒購自上海西唐生物科技公司,具體操作按試劑盒說明書步驟進(jìn)行。一抗為鼠抗人單克隆抗體(濃度1∶30),每次染色均使用PBS 作為一抗的陰性對照。在高倍顯微鏡下觀察可見,LSCC組織細(xì)胞中IDO1、IL-10 分別定位于胞質(zhì)、胞核,呈淺黃色及棕褐色顆粒染色。單個標(biāo)本隨機(jī)選取10 個視野。染色面積計分標(biāo)準(zhǔn)如下:無著色為0分,<25%著色為1 分,25%~50% 著色為2 分,>50%著色為3 分;染色強(qiáng)度計分標(biāo)準(zhǔn)如下:不顯色為0 分,淺棕黃色為1 分,棕黃色為2 分,棕褐色為3 分。表達(dá)陽性情況以染色面積積分+染色強(qiáng)度積分進(jìn)行判斷,設(shè)0分為“-”,1~2分為“+”,3~4 分為“++”,5~6 分為“+++”。將“+”“++”“+++”均判定為陽性。
采用門診或住院復(fù)查、電話回訪等方式進(jìn)行隨訪,隨訪終點為2019年9月1日或者患者死亡時間點,記錄平均生存時間。
數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,比較用t檢驗;計數(shù)資料以例(%)表示,比較用χ2檢驗;繪制Kaplan-Meier 生存曲線,比較用Log rank χ2檢驗;采用Cox 多因素風(fēng)險回歸模型分析預(yù)后的影響因素。P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
LSCC 組織中IDO1 表達(dá)陽性率與癌旁組織比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),LSCC 組織高于癌旁組織;LSCC 組織中IL-10 表達(dá)陽性率與癌旁組織比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),LSCC 組織高于癌旁組織。見表1 和圖1。
圖1 LSCC組織及其癌旁組織中IDO1、IL-10表達(dá) (HTC×400)
表1 LSCC組織與癌旁組織中IDO1和IL-10表達(dá)陽性率的比較 [n=89,例(%)]
不同TNM 分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的LSCC 患者IDO1、IL-10 表達(dá)陽性率比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);不同性別、年齡、腫瘤位置的LSCC 患者IDO1、IL-10表達(dá)陽性率,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。
表2 不同臨床病理特征LSCC患者IDO1和IL-10表達(dá)陽性率的比較 例(%)
繪制Kaplan-Meier 生存曲線并進(jìn)行Log rank χ2檢驗,與IDO1、IL-10 陰性患者比較,IDO1、IL-10陽性患者的總生存時間明顯縮短(P<0.05)。截至到隨訪時間,IDO1 陽性組的術(shù)后總生存率為35.09%(20/57)、術(shù)后中位生存時間為24 個月,IDO1 陰性組的術(shù)后總生存率為46.88%(15/32)、術(shù)后中位生存時間為35 個月。兩組比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.015,P=0.014)。IL-10 陽性組的術(shù)后總生存率為32.81%(21/64)、術(shù)后中位生存時間為27 個月,IL-10 陰性組的術(shù)后總生存率為48.00%(12/25)、術(shù)后中位生存時間為33 個月。兩組比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.164,P=0.023)。見圖2。
圖2 IDO1、IL-10陽性表達(dá)與IDO1、IL-10陰性表達(dá)患者的生存曲線
建立Cox 比例風(fēng)險回歸模型,以TNM 分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、IDO1、IL-10為自變量,以預(yù)后狀況為因變量,賦值1=死亡,0=生存,t=生存期,其他各變量賦值見表3。采用逐步后退法,以進(jìn)行自變量的選擇和剔除,設(shè)定α入=0.05,α出=0.10。Cox 回歸結(jié)果顯示,TNM 分期較高[=1.351(95% CI:1.055,1.730)]、分化程度較低[=0.734(95% CI:0.562,0.959)]、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[=1.448(95%CI:1.095,1.915)]、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[=1.246(95%CI:1.035,1.500)]、IDO1 陽性表達(dá)[=1.575(95% CI:1.156,2.146)]、IL-10 陽性表達(dá)[=1.771(95% CI:1.250,2.508)]是LSCC 患者預(yù)后的 影響因素(P<0.05)。見表3。
表3 LSCC患者預(yù)后影響因素的Cox多因素風(fēng)險回歸模型參數(shù)
LSCC 惡性程度較高,早期易出現(xiàn)侵襲、轉(zhuǎn)移,嚴(yán)重威脅患者生命安全[7]。有研究指出免疫逃逸在LSCC 發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用,故明確對機(jī)體免疫功能產(chǎn)生關(guān)鍵性影響作用的分子可能對日后的治療具有重要意義[8]。IDO1異常高表達(dá)可促使細(xì)胞中色氨酸耗竭,使多種細(xì)胞失去正常功能,并且抑制免疫細(xì)胞增殖,對機(jī)體正??鼓[瘤免疫功能產(chǎn)生負(fù)面影響[9-10]。IL-10 也是一種重要的免疫抑制因子,通過促進(jìn)Th2 細(xì)胞增殖、抑制Th1 細(xì)胞增殖、抑制APC抗原遞呈功能,最終影響細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞對腫瘤的識別[11-13]。關(guān)于IDO1、IL-10 在LSCC 組織中的表達(dá)已有初步報道[14-15],但關(guān)于上述分子對LSCC 病情及預(yù)后的影響研究涉及不多。鑒于這一現(xiàn)狀,本研究以LSCC 組織中IDO1、IL-10 的表達(dá)為切入點,發(fā)現(xiàn)LSCC 組織中IDO1、IL-10 的陽性表達(dá)率高于癌旁組織,這一結(jié)果說明IDO1、IL-10的異常高表達(dá)參與了LSCC的發(fā)生、發(fā)展。
臨床病理特征可從不同方面客觀反映患者病情嚴(yán)重程度,故衡量蛋白表達(dá)情況與病理特征的相關(guān)性可間接說明該蛋白對病情嚴(yán)重程度的影響[16-17]。文中根據(jù)腫瘤組織中IDO1、IL-10的表達(dá)陽性與否對入組患者進(jìn)行二次分組,通過比較其性別、年齡、腫瘤位置、TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等因素后發(fā)現(xiàn):TNM分期高、分化程度低、合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者IDO1、IL-10 陽性表達(dá)率更高,說明高表達(dá)的IDO1、IL-10 是LSCC 惡性程度高的重要標(biāo)志,與既往研究所述IDO1、IL-10在腫瘤進(jìn)展中發(fā)揮的作用吻合。IDO1、IL-10表達(dá)增加后可對機(jī)體免疫系統(tǒng)造成不同程度抑制,促使腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸,并加速病情進(jìn)展,這可能是高表達(dá)IDO1、IL-10的LSCC患者病理特征不理想的核心原因之一。
本研究對入組患者進(jìn)行術(shù)后長期隨訪并發(fā)現(xiàn),IDO1、IL-10 陽性表達(dá)者生存時間較短,說明IDO1、IL-10 高表達(dá)對LSCC 患者的遠(yuǎn)期生存具有負(fù)面作用。使用Cox 多因素風(fēng)險回歸模型探討對LSCC 患者生存時間產(chǎn)生直接影響的因素,發(fā)現(xiàn)較高的TNM 分期、較低的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、IDO1 陽性表達(dá)、IL-10陽性表達(dá)均是縮短患者生存時間的危險因素。該結(jié)果推測與IDO1、IL-10 高表達(dá)后促進(jìn)LSCC 病情進(jìn)展相關(guān)。IDO1、IL-10 表達(dá)陽性與LSCC惡性程度以及患者的不良預(yù)后相關(guān),提示可以將IDO1、IL-10 應(yīng)用到LSCC 的臨床診斷和預(yù)后評估當(dāng)中,并且早期聯(lián)合檢測有助于預(yù)測LSCC 的預(yù)后風(fēng)險,從而為臨床制訂針對性干預(yù)方案提供參考。
綜上所述,LSCC 組織中IDO1、IL-10 表達(dá)陽性率較癌旁組織異常升高,且陽性表達(dá)患者的TNM 腫瘤分期較高、分化程度較低、合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的比例較高,同時是導(dǎo)致患者遠(yuǎn)期生存時間縮短的危險因素之一。IDO1、IL-10表達(dá)可能是影響LSCC 發(fā)生、發(fā)展的重要分子之一,干擾其表達(dá)對疾病病情及預(yù)后的影響研究有望在日后進(jìn)一步展開。