郭步慶，龐新豐，喬 靜，楊廣平，李紅芬，李小榮，倫瑞花，李文剛

焦作市婦幼保健院：1.檢驗(yàn)科；2.輸血科；3.兒科，河南焦作 454000

難治性肺炎支原體肺炎(RMPP)近年在兒童患者中發(fā)病率明顯增高，RMPP易累及心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等器官組織造成肺外感染，引起嚴(yán)重并發(fā)癥[1]。RMPP病理特點(diǎn)是由富含漿細(xì)胞的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)支氣管，淋巴細(xì)胞在RMPP發(fā)病機(jī)制中起著重要的作用[2]。嬰幼兒肺炎支原體23SrRNA基因突變位點(diǎn)A2603G或(和)A2604G突變導(dǎo)致大環(huán)內(nèi)酯類藥物治療嬰幼兒肺炎支原體感染過程發(fā)生治療無效，也可導(dǎo)致嬰幼兒RMPP[3]；CD4+輔助性T細(xì)胞參與了RMPP的免疫病理過程，CD4+輔助性T細(xì)胞決定疾病的嚴(yán)重程度和對(duì)感染的抵抗力，而CD8+T淋巴細(xì)胞則參與抑制這些炎性反應(yīng)[4]。外周血白細(xì)胞介素-6(IL-6)是一種多功能的炎癥因子，可以作用于T淋巴細(xì)胞，促使炎性反應(yīng)的發(fā)生，對(duì)RMPP發(fā)生及進(jìn)展有鑒別作用，IL-6在抗感染的免疫反應(yīng)中與機(jī)體損傷有關(guān)[5]?；颊咄庵苎狪L-6、淋巴細(xì)胞亞群異常情況及肺炎支原體耐藥基因位點(diǎn)成為RMPP近年來研究的熱點(diǎn)[6]。本研究旨在對(duì)0～6歲RMPP患兒進(jìn)行肺炎支原體23SrRNA基因突變位點(diǎn)A2603G或(和)A2604G檢測(cè)結(jié)合外周血IL-6、淋巴細(xì)胞亞群異常情況，采用Logistic回歸方程對(duì)RMPP發(fā)生的危險(xiǎn)因素進(jìn)行分析，為早期診斷RMPP提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年6月1日至2020年5月31日在焦作市婦幼保健院兒童呼吸病區(qū)住院的RMPP嬰幼兒45例(研究組)作為研究對(duì)象，年齡為0～6歲；45例普通單純肺炎支原體感染患兒作為對(duì)照組，對(duì)照組符合單純肺炎支原體感染診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]，年齡0～6歲；兩組年齡、體質(zhì)量、性別比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物正規(guī)治療超過7 d，仍持續(xù)發(fā)熱38 ℃以上；(2)臨床癥狀加重、出現(xiàn)肺外合并癥；(3)病程延長(zhǎng)并伴隨影像學(xué)異常。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)先天性支氣管發(fā)育異常，先天性肺功能不全；(2)先天性免疫缺陷，繼發(fā)性免疫缺陷；(3)嚴(yán)重的肝腎心功能障礙，影響檢測(cè)結(jié)果。研究通過焦作市婦幼保健院倫理委員會(huì)審核(批準(zhǔn)編號(hào)jzfy-2020-1360)，患者享有知情權(quán)、選擇權(quán)。

1.2方法 23SrRNA基因突變位點(diǎn)A2603G或(和)A2604G檢測(cè)采用PCR-Taqman熒光探針技術(shù)，外周血淋巴細(xì)胞亞群采用流式細(xì)胞分析儀進(jìn)行CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞百分比檢測(cè)。參考中國(guó)不同年齡及性別的健康兒童外周血淋巴細(xì)胞亞群參考值范圍[8]，患兒淋巴細(xì)胞亞群結(jié)果不在正常范圍內(nèi)即為異常；IL-6檢測(cè)方法為化學(xué)發(fā)光法，儀器選用深圳新產(chǎn)業(yè)生物MAGLUMI 2000 Plus型全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀，0～6歲人群IL-6>7 pg/mL為IL-6水平異常。

2 結(jié) 果

2.1各組肺炎支原體23SrRNA基因突變位點(diǎn)A2603G或(和)A2604G突變情況 研究組肺炎支原體23SrRNA基因突變位點(diǎn)A2603G或(和)A2604G突變率明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；研究組各年齡段肺炎支原體23SrRNA基因突變位點(diǎn)A2603G或(和)A2604G突變率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，年齡越大，其突變比例也越高。見表1。

表1 各組肺炎支原體23SrRNA基因突變位點(diǎn)A2603G或(和)A2604G突變情況

2.2研究組各年齡段IL-6水平及其異常情況比較 研究組各年齡段IL-6水平及其異常情況比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 研究組各年齡段IL-6水平及其異常情況比較

2.3兩組CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞水平及異常情況比較 兩組CD4+T淋巴細(xì)胞百分比、CD4+T淋巴細(xì)胞異常數(shù)、CD4+T淋巴細(xì)胞/CD8+T淋巴細(xì)胞異常數(shù)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞水平及異常情況比較

2.4RMPP logistic回歸模型分析 通過多因素Logistic分析RMPP：肺炎支原體23SrRNA基因突變位點(diǎn)A2603G或(和)A2604G突變、IL-6水平異常是RMPP發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。見表4。

表4 RMPP多因素Logistic分析

2.5聯(lián)合指標(biāo)診斷RMPP的ROC曲線分析 IL-6水平異常診斷RMPP的ROC曲線下面積(AUC)為0.844(95%CI:0.758～0.931)；肺炎支原體23SrRNA基因突變位點(diǎn)A2603G或(和)A2604G突變?cè)\斷RMPP的AUC為0.756(95%CI:0.652～0.859)；肺炎支原體23SrRNA基因突變位點(diǎn)A2603G或(和)A2604G突變、IL-6水平異常聯(lián)合指標(biāo)診斷預(yù)測(cè)RMPP的AUC為0.927(95%CI:0.870～0.984)，對(duì)比單一因素診斷RMPP具有較高價(jià)值，見圖1。

圖1 A2603G或(和)A2604G突變、IL-6水平異常聯(lián)合指標(biāo)診斷RMPP的ROC曲線

3 討 論

RMPP具有發(fā)熱時(shí)間長(zhǎng)、病情進(jìn)展快的臨床特點(diǎn)，容易發(fā)生肺實(shí)質(zhì)病變，造成胸腔積液和肺不張等合并癥，嚴(yán)重病例可發(fā)展成壞死性肺炎。病原體感染類型可以為單純肺炎支原體、混合型病原體感染。RMPP以肺炎支原體引起的肺炎感染及肺外損傷為病理特點(diǎn)，肺炎支原體A2063、A2064核苷酸突變，可引起核糖體結(jié)合抗菌藥物的親和力下降，從而使肺炎支原體產(chǎn)生耐藥性[9]。0～6歲RMPP患兒通常出現(xiàn)炎癥因子變化劇烈、氣管平滑肌痙攣、呼吸困難及肺外器官如心臟、肝臟損傷，造成病情加重[10]。

本研究結(jié)果提示，肺炎支原體23SrRNA基因突變位點(diǎn)A2603G或(和)A2604G產(chǎn)生耐藥性可能是肺炎支原體肺炎轉(zhuǎn)為RMPP的重要原因，耐藥性導(dǎo)致大環(huán)內(nèi)酯類藥物對(duì)于兒童患者無效或者效果減低[11]，而常規(guī)用于成人治療肺炎支原體的藥物對(duì)于兒童是慎用的，普通治療方案不能控制病情，造成病程增加，病情加重。本研究結(jié)果顯示，研究組各年齡段肺炎支原體23SrRNA基因突變位點(diǎn)A2603G或(和)A2604G突變率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，年齡越大，其突變比例也越高。提示肺炎支原體23SrRNA基因突變位點(diǎn)A2603G或(和)A2604G的檢測(cè)可以作為RMPP診斷指標(biāo)[12]。

IL-6作為臨床常用一種的炎癥指標(biāo)，可以反映炎癥感染程度及肺部實(shí)質(zhì)病變指標(biāo)，單純肺炎支原體感染造成的感染程度有限，且合并癥較少[12-13]。本研究結(jié)果證實(shí)了IL-6可以作為RMPP診斷指標(biāo)。與文獻(xiàn)[14-15]報(bào)道結(jié)果一致。

肺炎支原體感染可導(dǎo)致淋巴細(xì)胞多克隆活化，淋巴細(xì)胞亞群發(fā)生改變，淋巴細(xì)胞亞群變化與肺炎支原體感染導(dǎo)致的肺炎進(jìn)展密切相關(guān)[16]。有學(xué)者認(rèn)為輔助性T細(xì)胞參與了肺部感染肺炎支原體的免疫病理過程，而CD8+T淋巴細(xì)胞則抑制了肺部免疫反應(yīng)，CD4+輔助性T細(xì)胞與肺炎的嚴(yán)重程度有關(guān)[17-18]。本研究結(jié)果顯示，兩組CD4+T淋巴細(xì)胞百分比、CD4+T淋巴細(xì)胞異常數(shù)、CD4+T淋巴細(xì)胞/CD8+T淋巴細(xì)胞異常數(shù)比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。肺炎支原體23SrRNA基因突變位點(diǎn)A2603G或(和)A2604G突變、IL-6水平異常是RMPP發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。肺炎支原體基因突變位點(diǎn)A2603G或(和)A2604G突變、IL-6水平異常聯(lián)合指標(biāo)診斷對(duì)比單一因素診斷RMPP具有較高價(jià)值。

綜上所述，肺炎支原體23SrRNA基因突變位點(diǎn)A2603G或(和)A2604G檢測(cè)可作為RMPP診斷的常規(guī)項(xiàng)目，該檢測(cè)結(jié)果可以為早期診斷RMPP提供依據(jù)。