丁寧， 許葉， 曾瑋思， 胡彥周， 洪凌宇， 黃昆侖， 賀曉云*

1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)工程學(xué)院，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全評(píng)價(jià)（食用）重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100083；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)生物學(xué)院，北京100094

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）是一種常見(jiàn)的腸道疾病，其主要病因?yàn)槟c黏膜發(fā)生病變，以腹瀉、腹痛及血便為主要癥狀，且易復(fù)發(fā)，增加了患結(jié)腸癌的風(fēng)險(xiǎn)[1-2]。該病在歐美國(guó)家比較常見(jiàn)，國(guó)內(nèi)近幾年發(fā)病率也呈明顯上升趨勢(shì)[3]。免疫、遺傳、感染及環(huán)境等因素均與其發(fā)病機(jī)制相關(guān)。中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T 淋巴細(xì)胞和B 淋巴細(xì)胞等釋放的抗體、細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)均會(huì)引起炎性病變的發(fā)生[1]，同時(shí)，腸黏膜細(xì)胞損傷也會(huì)導(dǎo)致腸道屏障減弱，通透性增加。UC還具有復(fù)雜的遺傳基礎(chǔ)，有研究[4]報(bào)道UC 的發(fā)病有明顯的種族差異和家族聚集性。研究證實(shí)，與健康人相比，UC 患者的結(jié)腸黏膜存在嚴(yán)重細(xì)菌感染，某些革蘭氏陰性厭氧菌含量增加而有益菌減少[5-6]。

乳鐵蛋白是存在于哺乳動(dòng)物乳汁或由其他黏膜分泌的一種鐵結(jié)合蛋白，主要在非特異性免疫系統(tǒng)中發(fā)揮作用，還能作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)攝入[7]，且具有抗炎、抗癌、促進(jìn)雙歧桿菌生長(zhǎng)、調(diào)節(jié)腸道菌群以及促進(jìn)腸道細(xì)胞增殖和分化的功能[8]。已有研究表明，牛乳鐵蛋白對(duì)UC 小鼠有顯著的改善作用，是一種新型的潰瘍性結(jié)腸炎治療劑[9]，但目前尚未有人乳鐵蛋白治療結(jié)腸炎的相關(guān)報(bào)道。溶菌酶廣泛存在于自然界，在機(jī)體中主要參與非特異性防御，可通過(guò)殺死腸道腐敗球菌，促進(jìn)雙歧桿菌等有益菌的增殖，增強(qiáng)腸道抗感染力，保護(hù)腸道微生態(tài)環(huán)境[1]，因而推測(cè)溶菌酶可能對(duì)于UC 具有一定的治療潛力，但尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。

天然的人乳鐵蛋白和人溶菌酶不易獲得，而用轉(zhuǎn)基因技術(shù)在動(dòng)物體內(nèi)表達(dá)人乳鐵蛋白和人溶菌酶具有效率高、成本低等特點(diǎn)，且表達(dá)的重組蛋白具有天然生物活性，適用于大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。本研究旨在探究從轉(zhuǎn)基因牛乳中提取的重組人乳鐵蛋白和重組人溶菌酶對(duì)小鼠UC 的改善效果，以期為這兩種生物技術(shù)產(chǎn)品的未來(lái)應(yīng)用提供新的思路和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 6周齡C57BL/6N 雄性小鼠30只，體質(zhì)量（25±2）g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，合格證號(hào)：SCXK（京）2016-0006。飼養(yǎng)于中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)東校區(qū)SPF 級(jí)動(dòng)物房，合格證號(hào)：SYXK（京）2015-0045。環(huán)境溫度20～24 ℃，相對(duì)濕度40%～70%，12 h 人工照明/12 h 黑暗循環(huán)，換氣次數(shù)15 次·h-1。本研究經(jīng)中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，倫理批準(zhǔn)號(hào)：Aw30210202-4-3。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)材料 從重組人乳鐵蛋白和重組人溶菌酶的轉(zhuǎn)基因牛產(chǎn)生的牛乳中分離純化得到重組人乳鐵蛋白和人溶菌酶，其中重組人乳鐵蛋白和重組人溶菌酶的轉(zhuǎn)基因牛均來(lái)自中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑 硫酸葡聚糖鈉鹽（dextran sulfate sodium salt，DSS）購(gòu)自MP 生物醫(yī)療公司（MP Biomedicals LLC）。

1.2 方法

1.2.1 UC 小鼠模型的建立 30 只 6 周齡 C57BL/6N 雄性小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組（CON 組，n=5）和結(jié)腸炎造模組（n=25），每籠5只飼養(yǎng)，自由進(jìn)食和飲水。適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后，結(jié)腸炎造模組小鼠給予無(wú)菌水配制的3%DSS 溶液，每天更換，連續(xù)7 d，每只小鼠每天飲用4～7 mL。CON 組小鼠飲用正常無(wú)菌水。根據(jù)表1 的疾病活動(dòng)指數(shù)（disease activity index，DAI）評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)判定小鼠造模情況。

表1 DAI評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[10]Table 1 DAI scroing criteria[10]

1.2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 進(jìn)入試驗(yàn)階段全部小鼠飲用正常無(wú)菌水。對(duì)造模成功的小鼠根據(jù)體質(zhì)量隨機(jī)分為模型對(duì)照組（DSS組）和4個(gè)處理組，所有組均按照10 mL·kg-1·BW-1的灌胃量給予不同的受試物。CON組和DSS組：每只鼠每天灌胃10 mL·kg-1·BW-10.9%氯化鈉溶液；低濃度乳鐵蛋白處理組（L-rLF組）：每只小鼠每天灌胃50 mg·kg-1·BW-1重組人乳鐵蛋白；高濃度乳鐵蛋白處理組（H-rLF 組）：每只鼠每天灌胃 100 mg·kg-1·BW-1重組人乳鐵蛋白；低濃度溶菌酶處理組（L-rLZM 組）：每只鼠每天灌胃50 mg·kg-1·BW-1重組人溶菌酶；高濃度溶菌酶處理組（H-rLZM 組）：每只鼠每天灌胃100 mg·kg-1·BW-1溶菌酶。連續(xù)灌胃 7 d，最后 1 天灌胃后，禁食12 h，采用頸椎脫臼法宰殺動(dòng)物。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 血清促炎因子（IL-6、lL-1β、TNF-α）和肝臟脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）含量的測(cè)定 取小鼠眼眶靜脈血，4 000 r·min-1分離血清，交由北京華英生物技術(shù)研究所采用酶聯(lián)免疫法進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.2 臟器指數(shù)、結(jié)腸長(zhǎng)度的測(cè)定 解剖小鼠，稱取脾臟質(zhì)量，將肝臟取部分放液氮凍存，截取結(jié)腸并測(cè)量長(zhǎng)度。

1.3.3 病理切片的觀察 收集動(dòng)物末端結(jié)腸，在預(yù)冷的PBS 中沖洗，取部分進(jìn)行蘇木精-伊紅染色，觀察結(jié)腸形態(tài)學(xué)的改變。

1.3.4 腸道菌群分析 收集盲腸內(nèi)容物-80 ℃凍存，提取盲腸內(nèi)容物的DNA，進(jìn)行16S RNA 擴(kuò)增，構(gòu)建DNA 文庫(kù)并測(cè)序，以樣品中數(shù)據(jù)量最少的為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行歸一化處理。采用PAST3 軟件計(jì)算Alpha多樣性指數(shù)[11]。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2010 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示。采用Student’st-test計(jì)算組間顯著性差異，以P＜0.05 為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 給藥對(duì)結(jié)腸炎DAI評(píng)分的影響

為判斷給藥對(duì)DAI 評(píng)分的影響，每天對(duì)小鼠進(jìn)行稱重，觀察糞便狀態(tài)及DAI 評(píng)分。結(jié)腸炎造模過(guò)程中體質(zhì)量變化如圖1 所示，空白對(duì)照組小鼠活動(dòng)正常，體質(zhì)量在前兩天稍有下降，推測(cè)可能與灌胃操作有關(guān)，第3 天后體質(zhì)量恢復(fù)正常且稍有增加，大便正常，DAI 評(píng)分始終穩(wěn)定在0～1 分的低水平。模型組小鼠精神萎靡，體質(zhì)量在灌胃的第2 天開始明顯下降，且均出現(xiàn)稀便、血便等癥狀，DAI 評(píng)分呈逐漸上升趨勢(shì)，最終達(dá)到4 分左右（圖2），說(shuō)明結(jié)腸炎造模成功。

圖1 造模體質(zhì)量變化率Fig.1 Change rate of body weight in modeling

圖2 造模階段DAI評(píng)分Fig.2 DAI score in modeling

給予重組人乳鐵蛋白和重組人溶菌酶處理后，各組體質(zhì)量均有所回升，其中H-rLF 組小鼠體質(zhì)量回升最快，提高約40%（圖3）。由試驗(yàn)階段的DAI 評(píng)分及其曲線下面積（area under curve，AUC）可知（圖4），給予受試物處理后，除L-rLZM組DAI 評(píng)分高于DSS 組外，其余處理組的DAI 評(píng)分均低于 DSS 組，其中，H-rLF 組 DAI 評(píng)分的曲線下面積顯著降低（P＜0.05）。說(shuō)明重組人乳鐵蛋白和重組人溶菌酶均可以在一定程度上降低結(jié)腸炎的DAI 評(píng)分，對(duì)小鼠的潰瘍性結(jié)腸炎具有一定的改善作用，其中高劑量組的重組人乳鐵蛋白效果更佳。

圖3 試驗(yàn)階段體質(zhì)量變化率Fig.3 Change rate of body weight at treatment stage

圖4 試驗(yàn)期間DAI評(píng)分及曲線下AUC面積Fig.4 DAI score and AUC area at treatment stage

2.2 給藥對(duì)脾臟系數(shù)的影響

脾臟是機(jī)體重要的外周免疫器官，脾臟的相對(duì)質(zhì)量（脾臟質(zhì)量與體質(zhì)量的比值）可以反映機(jī)體的免疫狀況。由圖5 可知，DSS 組脾臟系數(shù)與CON 組相比明顯升高，而 L-rlF 組、H-rLF 組、L-rLZM 組與DSS 組相比脾臟系數(shù)顯著降低（P＜0.05），且與CON 組比較無(wú)顯著差異（P＞0.05）；而H-rLZM 組脾臟指數(shù)與DSS 組相比顯著升高（P＜0.05）。表明低、高劑量的重組人乳鐵蛋白和低劑量的重組人溶菌酶能有效降低小鼠的脾臟系數(shù)，提示其可能改善了機(jī)體的免疫狀況。

圖5 脾臟系數(shù)Fig.5 Spleen coefficient

2.3 給藥對(duì)結(jié)腸長(zhǎng)度與結(jié)腸病理切片的影響

腸道炎癥會(huì)引起機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)，從而使結(jié)腸縮短[7],如圖 6 所示，H-rLF 組、H-rLZM 組與 DSS 組相比結(jié)腸長(zhǎng)度顯著增加（P＜0.05）。在顯微鏡下觀察蘇木精-伊紅染色后的組織病理切片，如圖7 所示，CON 組結(jié)腸黏膜結(jié)構(gòu)保持完整，腺體排列整齊，無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。DSS組腸黏膜廣泛缺失，腺體多數(shù)不完整，固有層和黏膜下層有嚴(yán)重炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，H-rLF 組、L-rLF 組、L-rLZM 組與模型組相比固有層、黏膜下層有少量噬中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，隱窩結(jié)構(gòu)基本完整；而H-rLZM 組與其他3 個(gè)處理組相比，其固有層、黏膜下層有較多噬中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。表明H-rLF 組和L-rLF 組及L-rLZM 組改善小鼠潰瘍性結(jié)腸炎的效果優(yōu)于H-rLZM 組。推測(cè)溶菌酶處理劑量過(guò)高反而不利于動(dòng)物的腸道健康。

圖6 結(jié)腸平均長(zhǎng)度Fig.6 Average length of colon

圖7 結(jié)腸病理切片F(xiàn)ig.7 Pathological section of colon

2.4 給藥對(duì)炎癥指標(biāo)的影響

2.4.1 給藥對(duì)血清中促炎因子（IL-1β、IL-6 和TNF-α）含量的影響 血清中促炎因子IL-1β、IL-6與TNF-α 在體內(nèi)的表達(dá)與炎癥水平一致，即表達(dá)過(guò)度會(huì)導(dǎo)致腸黏膜的炎癥和病變[12]。這3 種促炎因子的表達(dá)水平如圖8 所示，DSS 組IL-6 與TNF-α 的表達(dá)較空白對(duì)照組顯著升高（P＜0.05）；L-rLF組與 L-rLZM 組的 IL-1β、IL-6 與 TNF-α 的含量相較于DSS 組顯著降低（P＜0.05）。H-rLF 組與H-rL-ZM 組的 IL-1β、TNF-α 與 DSS 組相比差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果表明，低劑量的重組人乳鐵蛋白與低劑量的重組人溶菌酶可以顯著抑制促炎因子的表達(dá)。

圖8 血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量Fig.8 Serum IL-1β 、IL-6、TNF-α content

2.4.2 給藥對(duì)血清和肝臟中LPS 含量的影響LPS 是絕大多數(shù)革蘭氏陰性細(xì)菌壁上的類脂多糖物質(zhì)，能引起哺乳動(dòng)物細(xì)胞發(fā)生免疫反應(yīng)，促發(fā)炎癥[12]。由圖 9 可知，DSS 組血清中 LPS 的濃度比空白對(duì)照組略有升高但差異不顯著（P＞0.05）；L-rLF組和L-rLZM 組與DSS 組相比，血清中的LPS 含量均顯著降低（P＜0.05）；而H-rLF 組和H-rLZM 組與DSS 組相比，均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。結(jié)果表明，低劑量重組人乳鐵蛋白和低劑量重組人溶菌酶降低血清中LPS的效果顯著優(yōu)于各自的高劑量組。4 個(gè)處理組與DSS 組相比肝臟中LPS 含量均顯著降低（P＜0.05）；兩種受試物高低劑量組間均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。表明重組人乳鐵蛋白和重組人溶菌酶均有改善腸道屏障、降低肝臟中LPS的效果，劑量差異對(duì)效果影響不顯著。

圖9 血清和肝臟LPS 含量Fig.9 Serum and liver LPS content

2.5 給藥對(duì)腸道菌群的影響

通過(guò)腸道菌群的多樣性分析（α 多樣性）可以反映出微生物群落的物種豐度和多樣性[13]，其中Simpson 指數(shù)反映群落多樣性，Shannon 指數(shù)主要反映群落均勻度，Chao 指數(shù)主要反映群落豐富度。由圖10 可知，處理前后，L-rLF 組和L-rLZM組的豐富度與對(duì)照組相比顯著增加。

圖10 小鼠腸道菌群指數(shù)Fig.10 The index of intestinal flora of mice

2.6 腸道菌群物種注釋及差異分析

對(duì)每個(gè)樣品在門水平和屬水平上的序列數(shù)目占總序列數(shù)目的比例進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，得到腸道菌群的門水平堆積圖（圖11A）和屬水平堆積圖（圖11B），以及厚壁菌門和變形菌門的比值（圖12A），擬桿菌屬、普氏菌屬、變形桿菌屬豐度（圖12B、C、D），以確定各組在門水平和屬水平上的物種組成差異?？瞻讓?duì)照組反映正常小鼠腸道菌群的構(gòu)成，主要是厚壁菌門、擬桿菌門、變形菌門和疣微菌門。艾克曼菌、螺桿菌屬、脫硫弧菌屬、瘤胃球菌屬、顫螺菌屬、普氏菌屬、S24-7菌、變形桿菌屬、擬桿菌屬及糞球菌屬為空白對(duì)照組小鼠腸道菌群在屬水平上的主要構(gòu)成，主要菌屬對(duì)腸道菌群屏障的建立起關(guān)鍵作用[13]。DSS 組小鼠體內(nèi)厚壁菌門菌群數(shù)量與空白對(duì)照組相比明顯減少，厚壁菌門與變形菌門菌群數(shù)量比值顯著降低。S24-7 菌、脫硫弧菌屬菌群數(shù)量顯著減少，擬桿菌屬、變形桿菌屬、羅氏弧菌和普氏菌屬菌群數(shù)量顯著增加。

圖11 腸道菌群門水平的影響Fig.11 The influence on intestinal flora at phylum

圖12 腸道菌群屬水平的影響Fig.12 Influence on intestinal flora at genus

小鼠經(jīng)低劑量重組人乳鐵蛋白灌胃處理7 d后，與DSS 組相比，厚壁菌門與變形菌門比值降低。顫螺菌屬、瘤胃球菌屬和羅氏弧菌減少，擬桿菌屬和S24-7 菌增加。小鼠經(jīng)高劑量重組人乳鐵蛋白灌胃處理7 d 后，與DSS 組相比，厚壁菌門與變形菌門比例增加。擬桿菌屬、S24-7菌和普氏菌屬減少，艾克曼菌和糞球菌屬增加。小鼠經(jīng)低劑量重組人溶菌酶灌胃處理7 d 后，與DSS 組相比，厚壁菌門與變形菌門比值減小。S24-7菌、顫螺菌屬、瘤胃球菌屬、羅氏弧菌及普氏菌屬減少，擬桿菌屬和艾克曼菌屬增加。小鼠經(jīng)高劑量重組人溶菌酶灌胃處理7 d 后，與DSS 組相比，厚壁菌門與變形菌門比值降低但差異不顯著。羅氏弧菌和S24-7 菌減少，擬桿菌屬和螺桿菌屬增加。經(jīng)過(guò)不同劑量的重組人乳鐵蛋白和重組人溶菌酶灌胃處理，結(jié)果表明僅高劑量重組人乳鐵蛋白組的厚壁菌門與變形菌門比值顯著回升（P＜0.05），擬桿菌屬、普氏菌屬和變形桿菌屬均顯著回落（P＜0.05），表明高劑量重組人乳鐵蛋白可以顯著調(diào)節(jié)小鼠腸道菌群，從而改善小鼠的潰瘍性結(jié)腸炎。

3 討論

潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)制比較復(fù)雜，現(xiàn)有研究表明該病與免疫、遺傳、感染及環(huán)境等因素相關(guān)。本試驗(yàn)中C57BL/6N 小鼠自由飲用3% DSS 溶液7 d，模型組小鼠出現(xiàn)潰瘍性結(jié)腸炎的典型特征，如腹瀉、大便潛血、便血等癥狀，說(shuō)明造模成功。用重組人乳鐵蛋白和重組人溶菌酶灌胃處理7 d的小鼠，雖然也出現(xiàn)潰瘍性結(jié)腸炎的典型癥狀，但與模型組相比，腹瀉、隱血、便血等癥狀得到不同程度的緩解，DAI分值均低于模型組，結(jié)腸縮短程度降低，脾臟系數(shù)減小，炎癥水平和腸道菌群也得到了明顯改善。

厚壁菌門的細(xì)菌具有抗炎作用[14]，有研究表明，潰瘍性結(jié)腸炎小鼠腸道中厚壁菌門和擬桿菌門顯著減少[15]，而擬桿菌屬、普氏菌屬和變形桿菌屬等革蘭氏陰性菌數(shù)量，顯著增加[16-18]。本研究中，DSS造模后，厚壁菌門與變形菌門比值顯著減小（P＜0.05），擬桿菌屬、普氏菌屬和變形桿菌屬顯著增加（P＜0.05），與前人結(jié)果一致。

腸道免疫在潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮重要的作用。促炎因子IL-6、IL-1β 和TNF-α 是免疫應(yīng)答中的重要媒介。在DSS誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎中，大量的炎癥浸潤(rùn)細(xì)胞會(huì)分泌高水平的促炎因子[19]。IL-6、IL-1β 和 TNF-α 等促炎因子通過(guò)在結(jié)腸組織中募集多核細(xì)胞來(lái)引發(fā)炎癥，是結(jié)腸炎的直接發(fā)病機(jī)制[20]。Togawa 等[9]研究發(fā)現(xiàn)抑制IL-6、IL-1β 和 TNF-α 的表達(dá)是牛乳鐵蛋白在 DSS 誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠中發(fā)揮抗炎作用的機(jī)制之一。本研究中小鼠經(jīng)灌胃重組人乳鐵蛋白后，小鼠血清中 IL-6、IL-1β 和 TNF-α 的含量均顯著下降，證明重組人乳鐵蛋白具有同樣的抗炎功效。這可能與乳鐵蛋白與腸道黏膜上的乳鐵蛋白受體結(jié)合、調(diào)節(jié)腸道免疫應(yīng)答有關(guān)[21]。

變形菌門細(xì)菌的增多會(huì)導(dǎo)致機(jī)體中革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的主要成分脂多糖增加。有研究證實(shí)乳鐵蛋白對(duì)革蘭氏陰性菌具有顯著的抑制作用[22]。 Haversen 等[11]通 過(guò) 給 DSS 誘 導(dǎo) 結(jié) 腸 炎 小 鼠灌胃乳鐵蛋白及具有抑菌活性的肽段發(fā)現(xiàn)乳鐵蛋白及肽段對(duì)結(jié)腸炎均有治療作用。還有研究發(fā)現(xiàn)乳鐵蛋白與抗生素在降低DAI評(píng)分和結(jié)腸組織中炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)方面有相似的作用[23]。表明乳鐵蛋白對(duì)DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎的改善作用與其抑菌活性有關(guān)。同時(shí)乳鐵蛋白也具有促進(jìn)腸道細(xì)胞增殖和分化的作用，從而修復(fù)腸黏膜的病變，改善黏膜通透性，減少血清和肝臟中滲入的LPS 含量等作用[8]。本研究也證實(shí)重組人乳鐵蛋白具有相同的功效。已有研究表明，溶菌酶可以改善小鼠腸道機(jī)械屏障，加速黏膜修復(fù)，改善腸黏膜通透性，從而減少腸道細(xì)菌內(nèi)毒素的移位，進(jìn)而減少血清和肝臟中的LPS 含量[24]。本研究中低劑量的重組人溶菌酶可以顯著降低血清和肝臟中的LPS 含量，與前人結(jié)果一致。

腸道內(nèi)菌群比例失調(diào)被認(rèn)為是觸發(fā)結(jié)腸炎發(fā)病的關(guān)鍵因素[25]。通過(guò)腸道菌群分析可知，經(jīng)重組人乳鐵蛋白和重組人溶菌酶灌胃處理后，潰瘍性結(jié)腸炎小鼠的腸道菌群組成發(fā)生改變。其中，與DSS 組相比，高劑量乳鐵蛋白組的厚壁菌門與變形菌門比值增加，革蘭氏陰性菌減少，表明高劑量重組人乳鐵蛋白能夠調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)，改善潰瘍性結(jié)腸炎。而溶菌酶主要抑菌機(jī)理是水解革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁的肽聚糖，由于革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁肽聚糖含量較少，且被一層較厚的脂多糖類物質(zhì)包裹[26]，所以溶菌酶對(duì)革蘭氏陰性菌的作用效果不顯著，這可能是本研究中溶菌酶對(duì)結(jié)腸炎治療效果不明顯的原因之一。

綜上所述，本研究證實(shí)重組人乳鐵蛋白和重組人溶菌酶對(duì)于潰瘍性結(jié)腸炎有一定的改善作用，為今后借助生物技術(shù)開發(fā)安全有效、適合潰瘍性結(jié)腸炎患者的功能性食品提供了新的思路和理論依據(jù)，具有廣闊的發(fā)展前景。同時(shí)本研究也存在一定的局限性，后續(xù)還需要通過(guò)更多的實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探究劑量問(wèn)題及相關(guān)機(jī)制。