張艷霞 吳慧珍 韓瑩 張蕊霞 劉艷霞 牟曉玲

摘要：為給新型生物農(nóng)藥的研發(fā)提出依據(jù)，用黃連、黃芩、大蒜、金銀花、柴胡和連翹6種植物的浸提液?jiǎn)蝿┘捌鋸?fù)合劑對(duì)尖孢鐮刀菌進(jìn)行處理，探索浸提液?jiǎn)蝿┘皬?fù)合劑對(duì)尖孢鐮刀菌的影響。綜合對(duì)尖孢鐮刀菌菌落生長(zhǎng)和產(chǎn)孢量?jī)煞矫娴挠绊懀参锝嵋簡(jiǎn)蝿┑囊志Ч鄬?duì)較好的處理分別是50%黃連、30%黃芩、20%金銀花、60%柴胡、50%連翹、60%連翹以及10%大蒜、30%大蒜、60%大蒜。6種植物浸提液對(duì)尖孢鐮刀菌均有抑菌作用，以黃連的抑菌效果最好，平均抑菌率為52.95%，平均抑產(chǎn)孢率為59.46%。

關(guān)鍵詞：植物浸提液；尖孢鐮刀菌；抑菌

中圖分類(lèi)號(hào)：S436.8? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? ? ? ? ? ? ? 文章編號(hào)：2097-2172（2022）03-0267-04

doi：10.3969/j.issn.2097-2172.2022.03.017

Preliminary Study on the Antibacterial Effect of Different Chinese Herbal Medicine Extracts on Fusarium oxysporum

ZHANG Yanxia， WU Huizhen， HAN Ying， ZHANG Ruixia， LIU Yanxia， MOU Xiaoling

（College of Applied Technology， Gansu Agricultural University， Lintao Gansu 730500， China）

Abstract： The single agent and compound agent of six plant extracts of Coptis chinensis， Scutellaria baicalensis， Allium sativum， Lonicera japonica， Bupleurum chinense and Forsythia suspensa were used to treat Fusarium oxysporum， and the effects of single agent and compound agent of extract liquid on F. oxysporum were explored. The results showed that the fungal inhibition rates of 50% Coptis chinensis， 30% Scutellaria baicalensis， 20% Lonicera japonica， 60% Bupleurum chinense， 50% Forsythia suspensa， 60% Forsythia suspensa， 10% Allium sativum， 30% Allium sativum and 60% Allium sativum were ideal. Among them， the average antibacterial rate of Coptis chinensis was 52.95%， the average sporulation inhibition rate was 59.46%.

Key words： Plant extract; Fusarium spp.; Antibacterial

植物病原真菌對(duì)植物會(huì)造成嚴(yán)重的危害［1 ］，由于大多數(shù)病原真菌變異能力強(qiáng)，致病力分化明顯。傳統(tǒng)的化學(xué)農(nóng)藥防治方法容易誘導(dǎo)病菌產(chǎn)生抗藥性，不但導(dǎo)致防治效果降低，加大了防治難度，而且造成嚴(yán)重的環(huán)境污染，因此開(kāi)發(fā)新型環(huán)保的化學(xué)農(nóng)藥替代品勢(shì)在必行。尖孢鐮刀菌百合專(zhuān)化型（Fusarium oxysporum f. sp. lilii）是導(dǎo)致蘭州百合（Lanzhou Lily）枯萎病的主要病原菌之一，也是造成蘭州百合產(chǎn)區(qū)連作障礙和產(chǎn)量降低的主要原因之一［2 ］。我們選取生活常見(jiàn)的、具有消炎作用的毛茛科黃連（Coptis chinensis）、唇形科黃芩（Scutellaria baicalensis）、百合科大蒜（Allium sativum）、忍冬科金銀花（Lonicera japonica）、傘形科柴胡（Bupleurum chinense）和木犀科連翹（Forsythia suspensa）6種植物，分別制備不同濃度的水浸提液以及復(fù)合劑，以尖孢鐮刀菌（F. oxysporum）為測(cè)試對(duì)象，通過(guò)測(cè)定其菌落生長(zhǎng)量和產(chǎn)孢量，研究6種植物的抑菌活性，旨在為新型生物農(nóng)藥開(kāi)發(fā)提供依據(jù)，為中草藥利用提供新思路，也為蘭州百合連作障礙的研究提供理論依據(jù)。

1? ?材料與方法

1.1? ?試驗(yàn)材料

供試植物有黃連、黃芩、大蒜、金銀花、柴胡、連翹，均為市售。

1.2? ?試驗(yàn)方法

1.2.1? ? 植物水浸提液的制備與稀釋? ? 分別稱(chēng)取供試植物100 g，加1 000 mL蒸餾水浸泡20 min。浸泡結(jié)束后將蒸餾水與植物一起加熱至沸騰，進(jìn)而轉(zhuǎn)小火煮30 min，紗布過(guò)濾，濾液備用。在過(guò)濾后的濾渣中加500 mL蒸餾水，重新煮30 min左右，過(guò)濾。將前后2次的濾液混合，用蒸餾水定容至1 000 mL，即為植物水浸提液。分別取水浸提液50、100、150、250、300 mL，用蒸餾水各自定容到500 mL，即得到濃度為10%、20%、30%、50%、60%的浸提液，密封，冷藏備用。

將6種植物的浸提液按體積比等量混合，制成浸提液復(fù)合劑，再用蒸餾水稀釋成濃度10%、30%、60%的復(fù)合劑，密封，冷藏備用。

1.2.2? ? 含浸提液培養(yǎng)基的制備? ? 分別用浸提液?jiǎn)蝿?fù)合劑代替PDA培養(yǎng)基中等量的水，配制含浸提液PDA培養(yǎng)基。

1.2.3? ? 含浸提液培養(yǎng)基抑菌效果的測(cè)定? ? 將直徑為5 mm的菌餅接入含浸提液的PDA培養(yǎng)基，以PDA為空白對(duì)照，每處理重復(fù)3次，置于28 ℃條件下培養(yǎng)7 d。培養(yǎng)第5天采用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，培養(yǎng)第7天測(cè)定產(chǎn)孢量。根據(jù)測(cè)定的結(jié)果，計(jì)算菌落純生長(zhǎng)量、菌落生長(zhǎng)抑制率、產(chǎn)孢量、產(chǎn)孢抑制率。

菌落純生長(zhǎng)量=2次所測(cè)菌落直徑平均值-菌餅的直徑

菌落生長(zhǎng)抑制率=［（對(duì)照菌落生長(zhǎng)量-處理菌落生長(zhǎng)量）/對(duì)照菌落生長(zhǎng)量］×100%

產(chǎn)孢量=［孢子總數(shù)/（16×5）］×400×10 000×稀釋倍數(shù)

產(chǎn)孢抑制率=［（對(duì)照產(chǎn)孢量-處理產(chǎn)孢量）/對(duì)照產(chǎn)孢量］×100%

1.3? ?數(shù)據(jù)分析

采用Excel 2010，并采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，處理間的差異顯著性用Duncan′s Multiple Range Test法，差異顯著性水平為0.05。

2? ?結(jié)果與分析

2.1? ?培養(yǎng)第5天植物浸提液對(duì)鐮刀菌生長(zhǎng)的影響

從表1可以看出，用6種植物浸提液處理鐮刀菌，除大蒜外，其余5種植物浸提液均對(duì)鐮刀菌菌落的生長(zhǎng)具有一定的抑制作用。經(jīng)不同植物浸提液?jiǎn)蝿┨幚淼溺牭毒?，隨著處理濃度的不斷增大，總體表現(xiàn)出菌落生長(zhǎng)受抑制作用增強(qiáng)的趨勢(shì)。黃連浸提液總體抑菌效果最好，處理后鐮刀菌菌落直徑均與CK差異顯著，其中50%黃連抑菌效果最好，抑菌率為77.08%；其次為60%黃連，抑菌率為73.86%。黃芩浸提液總體抑菌效果較好，處理后鐮刀菌菌落直徑均與CK差異顯著，其中50%黃芩抑菌效果最好，抑菌率為60.04%；其次為30%黃芩，抑菌率為57.95%。50%柴胡、50%連翹、60%連翹處理后的鐮刀菌菌落直徑均與CK差異顯著，抑菌率分別為10.61%、28.98%、23.30%；其余處理的抑菌率為-14.58%～53.79%。用不同濃度浸提液的復(fù)合劑處理尖孢鐮刀菌，也均有一定的抑菌效果，以濃度60%處理的效果顯著，抑菌率為20.27%。

2.2? ?培養(yǎng)第7天植物浸提液對(duì)鐮刀菌產(chǎn)孢的影響

從表1可知，用不同植物浸提液?jiǎn)蝿┨幚礴牭毒?，浸提液?jiǎn)蝿?duì)鐮刀菌產(chǎn)孢均具有顯著的抑制作用。黃連浸提液中對(duì)鐮刀菌產(chǎn)孢抑制效果最好的是50%黃連，產(chǎn)孢量為0.56×104個(gè)/mL，抑產(chǎn)孢率為67.64%；黃芩浸提液中對(duì)鐮刀菌產(chǎn)孢抑制效果最好的是10%黃芩，產(chǎn)孢量為0.47×104個(gè)/ mL，抑產(chǎn)孢率為72.99%；大蒜浸提液中對(duì)鐮刀菌產(chǎn)孢抑制效果最好的是60%大蒜，產(chǎn)孢量為0.47×104個(gè)/mL，抑產(chǎn)孢率為73.10%；金銀花浸提液中對(duì)鐮刀菌產(chǎn)孢抑制效果最好的是20%金銀花，產(chǎn)孢量為0.52×104個(gè)/mL，抑產(chǎn)孢率為70.17%；柴胡浸提液中對(duì)鐮刀菌產(chǎn)孢抑制效果最好的是60%柴胡，產(chǎn)孢量為0.47×104個(gè)/mL，抑產(chǎn)孢率為73.16%；連翹浸提液中對(duì)鐮刀菌產(chǎn)孢抑制效果最好的是10%連翹，產(chǎn)孢量為0.32×104個(gè)/mL，抑產(chǎn)孢率為81.55%；用復(fù)合劑處理尖孢鐮刀菌，產(chǎn)孢抑制效果最好的是30%復(fù)合劑，產(chǎn)孢量為0.54×104個(gè)/mL，抑產(chǎn)孢率為68.74%。

用不同植物浸提液?jiǎn)蝿┨幚砑怄哏牭毒?50%黃連抑菌率77.08%、抑產(chǎn)孢率67.64%，30%黃芩抑菌率57.95%、抑產(chǎn)孢率62.07%，10%黃芩抑菌率36.93%、抑產(chǎn)孢率79.22%，20%金銀花抑菌率9.47%、抑產(chǎn)孢率70.17%， 60%柴胡抑菌率1.89%、抑產(chǎn)孢率73.16%，50%連翹抑菌率28.98%、抑產(chǎn)孢率60.92%，60%連翹抑菌率23.30%、抑產(chǎn)孢率64.37%，10%大蒜抑菌率2.08%、抑產(chǎn)孢率59.08%，30%大蒜抑菌率-3.22%、抑產(chǎn)孢率64.43%，60%大蒜抑菌率-3.60%、抑產(chǎn)孢率73.10%。綜合其對(duì)菌落生長(zhǎng)和產(chǎn)孢量?jī)煞矫娴挠绊?，植物浸提液?jiǎn)蝿┮志Ч鄬?duì)最佳的處理分別是50%黃連，30%黃芩，10%黃芩，20%金銀花，60%柴胡，50%連翹、60%連翹以及10%大蒜、30%大蒜、60%大蒜，其中黃連抑菌效果最好，平均抑菌率為52.95%，平均抑產(chǎn)孢菌為59.46%。

用不同浸提液復(fù)合劑處理尖孢鐮刀菌，60%復(fù)合劑抑菌率為20.27%，抑產(chǎn)孢率40.23%。綜合復(fù)合劑對(duì)菌落生長(zhǎng)和產(chǎn)孢量?jī)煞矫娴挠绊?，抑菌效果最佳的處理?0%復(fù)合劑。

3? ?討論與結(jié)論

自然界中的植物，有很多表現(xiàn)出一定的化感作用和抑菌作用。楊棟林等［3 ］的研究表明，海菜花（Ottelia acuminata）浸提液對(duì)密刺苦草（Vallisneria denseserrulata）、 菹草（Potamogeton crispus） 2種沉水植物有化感作用，表現(xiàn)出脅迫作用；南方紅豆杉（Taxus wallichiana var. mairei）對(duì)喜樹(shù)（Camptotheca acuminate）具有正向化感作用［4 ］；紫穗槐（Amorpha fruticosa）葉片浸提液對(duì)長(zhǎng)柄扁桃（Amygdalus pcdunculata Pall）有化感作用［5 ］；蔣晶晶等［6 ］的研究發(fā)現(xiàn)，60%黃連、黃芩和大黃浸提液對(duì)辣椒疫霉病菌（Phytophthora capsicum）和西瓜蔓枯病菌［Didymella bryoniae（Auessw.）Rehm.］2種病原菌有較好的抑制效果；大蒜鱗莖浸提液對(duì)導(dǎo)致花生根腐病的3種鐮孢菌有抑制作用［7 ］；黃連浸提液對(duì)腐皮鐮孢菌（Fusarium solani）的菌落生長(zhǎng)有抑制作用［8 ］。李紀(jì)潮等［9 ］發(fā)現(xiàn)，野艾蒿（Artemisia lavandulifolia）對(duì)三七根腐病病原菌有抑制作用，其毒力效應(yīng)高于多菌靈（P < 0.05）。也有研究顯示，韭菜（Allium tuberosum）對(duì)苦瓜病菌（Amara cucurbita pathogen）有抑制作用，表現(xiàn)出化感作用［10 ］；紫洋蔥（Allium cepa）浸提液對(duì)丹參根腐病菌（Fusariumequiseti Sacc.）可產(chǎn)生抑制作用［11 ］；姜桂俠等［12 ］的研究得出，黃連對(duì)金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大腸桿菌（Escherichia coli）的抑菌效果顯著高于金銀花和板藍(lán)根（Isatis tinctoria）。

本試驗(yàn)中，6種植物的浸提液對(duì)鐮刀菌均有抑制作用，其中，黃連的抑菌效果最好。不同復(fù)合劑處理中，60%復(fù)合劑的抑菌效果最強(qiáng)。以上結(jié)果與蔣晶晶等［6 ］、姜桂俠等［12 ］的研究一致。可見(jiàn)黃連具有很強(qiáng)的抑菌效果。這一結(jié)果可為篩選具有抑制尖孢鐮刀菌作用的植物提供了理論依據(jù)，可為百合枯萎病的生物防治提供新方法。

本次試驗(yàn)結(jié)果表明，用不同植物浸提液?jiǎn)蝿┨幚砑怄哏牭毒?，綜合其對(duì)菌落生長(zhǎng)和產(chǎn)孢量?jī)煞矫娴挠绊?，植物浸提液?jiǎn)蝿┮志Ч鄬?duì)最佳的處理分別是50%黃連，30%黃芩，10%黃芩，20%金銀花，60%柴胡，50%連翹、60%連翹以及10%大蒜、30%大蒜、60%大蒜，復(fù)合劑相對(duì)抑菌效果最佳的處理是60%復(fù)合劑。綜合比較6種植物浸提液?jiǎn)蝿┘皬?fù)合劑對(duì)菌落生長(zhǎng)和產(chǎn)孢量的影響，黃連的效果最好，平均抑菌率為52.95%，平均抑產(chǎn)孢率為59.46%；其余依次是連翹、柴胡、黃芩、金銀花、大蒜及復(fù)合劑。

在浸提液?jiǎn)蝿┖蛷?fù)合劑的抑菌效果比較中，復(fù)合劑的平均抑菌率為11.43%，平均抑產(chǎn)孢率為38.46%，其綜合抑菌排名僅為第6位，復(fù)合劑的抑菌效果沒(méi)有單劑的好。出現(xiàn)以上結(jié)果的原因比較多。諸如，各種浸提液混合為復(fù)合劑之后發(fā)生的物理變化、相互作用、化學(xué)反應(yīng)等都會(huì)影響到抑菌效果。要搞清楚其中的機(jī)理，還進(jìn)一步研究。

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收稿日期：2022 - 03 - 29

基金項(xiàng)目：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)2021年SIETP項(xiàng)目（202118002）。

作者簡(jiǎn)介：張艷霞（2000 — ），女，甘肅秦安人，本科在讀，研究方向?yàn)橹参锛爸参锷?。Email： 1276388056@qq.com。

通信作者：牟曉玲（1973 — ），女，甘肅臨洮人，高級(jí)講師，主要從事植物學(xué)、植物生理學(xué)教學(xué)及蔬菜栽培生理研究工作。Email： 1282363911@qq.com。