●高子陽 姜 鵬 詹常森（上海和黃藥業(yè)有限公司 上海 201499）

中華大蟾蜍（Bufo gargarizans gargarizans）俗稱癩蛤蟆，隸屬于兩棲綱（Amphibia）無尾目（Anura）蟾蜍科（Bufonidae）蟾蜍屬（Bufo）。在我國東北、華北、華東、華中、西北、西南等省區(qū)均有分布，國外分布在俄羅斯、朝鮮[1]。蟾蜍不但是農(nóng)作物、牧草和森林害蟲的天敵，而且是動物藥蟾酥的藥源[2-3]。蟾酥是我國傳統(tǒng)名貴中藥材，是中華大蟾蜍耳后腺分泌漿液經(jīng)干燥加工后制成。蟾酥所含成分復(fù)雜，通過對蟾酥的分離鑒定，已確定的化學(xué)成分主要包含蟾蜍毒素類、甾醇類、蟾毒色胺類、氨基酸、有機酸等[4]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，蟾酥具有抑制腫瘤細胞、強心、抗心肌缺血、升壓、局部麻醉、鎮(zhèn)痛、抗炎等作用，且在臨床上應(yīng)用廣泛[5]。由于環(huán)境破壞和不合理利用，中華大蟾蜍的野生資源日益枯竭，開展規(guī)范化人工養(yǎng)殖才能滿足日益增長的市場需求[6]。

當前，蟾酥市場缺口大，經(jīng)濟價值高，而中華大蟾蜍的人工養(yǎng)殖技術(shù)仍未成熟，現(xiàn)有的蟾蜍養(yǎng)殖戶多以探索性為主，養(yǎng)殖效益較低、規(guī)模小。研究學(xué)者已經(jīng)對中華大蟾蜍及其蝌蚪的食性[7]、變態(tài)與發(fā)育[8]、養(yǎng)殖密度[9]、蟾蜍耳后腺分子生物學(xué)、組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)[10]及蟾蜍適宜的生態(tài)環(huán)境[11]等方面進行了大量的基礎(chǔ)性研究。而對中華大蟾蜍養(yǎng)殖模式、養(yǎng)殖病害防治、人工育種、人工配合飼料和投喂模式等研究較少。

攝食節(jié)律是動物不同時間內(nèi)攝食強度變化的規(guī)律，是動物在長期進化過程中對光周期、溫度、餌料豐度等周期性變化主動適應(yīng)的結(jié)果?？茖W(xué)投喂模式的建立要以養(yǎng)殖動物自身的攝食節(jié)律為基礎(chǔ)[12]。中華大蟾蜍的攝食節(jié)律研究有利于調(diào)整養(yǎng)殖蟾蜍投喂時間和投喂量，減少飼料浪費，提高餌料利用率。龔雙姣等[13]研究了中華大蟾蜍蝌蚪階段（孵出后54日齡）的攝食節(jié)律，而中華大蟾蜍幼蟾階段攝食節(jié)律的研究尚未見報道。本研究觀察中華大蟾蜍幼蟾在不同投喂頻率下的攝食情況，總結(jié)其攝食節(jié)律，為中華大蟾蜍幼蟾養(yǎng)殖最佳投喂模式的確定提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗條件

試驗在塑料養(yǎng)殖盒中進行，塑料養(yǎng)殖箱規(guī)格為長、寬、高70 cm×40 cm×20 cm，將養(yǎng)殖箱傾斜放于地面，箱底與地面呈15°夾角，養(yǎng)殖箱內(nèi)注入曝氣自來水，水面占箱底面積的1/3，水深5 cm。在水中鋪設(shè)空心蓮子草和瓦片，便于幼蟾棲息隱蔽。試驗期間，每天更換一次水體，每次更換水體的1/2左右。水溫維持在23.2～24.1℃，環(huán)境濕度保持在60%～80%，氨氮濃度低于0.1 mg/L，pH 7.0～7.6。試驗在12 h白天、12 h夜晚的自然光周期下進行。塑料養(yǎng)殖箱放置于光照良好、通風(fēng)和安靜的室內(nèi)實驗室中。

1.2 蟾蜍

所用幼蟾為山東中華大蟾蜍蝌蚪經(jīng)人工飼養(yǎng)變態(tài)得到的個體。試驗前7 d選取規(guī)格基本一致，體重為0.6～1.0 g的健康幼蟾，每個養(yǎng)殖箱隨機放10只幼蟾，在相同環(huán)境下飼養(yǎng)馴化7 d后，開始試驗。

1.3 試驗設(shè)計

試驗設(shè)計了每日不同時間點8次投喂（組1）和每日不同時間點1次投喂（組2）2個組別，組1是 每 天 在05:00、08:00、11:00、14:00、17:00、20:00、23:00、02:00 8個時間點對幼蟾定量投喂適口的黃粉蟲，2.5 h后收集殘餌稱重，每個養(yǎng)殖箱每天投喂8次，設(shè)3個重復(fù)組，共3個養(yǎng)殖箱；組2是在與組1相同的8個時間點對幼蟾投喂適口的黃粉蟲，2.5 h后收集殘餌稱重，每個養(yǎng)殖箱每天投喂1次，設(shè)3個重復(fù)組，每個重復(fù)組8個養(yǎng)殖箱，共24個養(yǎng)殖箱。試驗開始前停食1 d并稱量每個重復(fù)組幼蟾的初始總體重，每次投喂各重復(fù)組幼蟾總體重10%的黃粉蟲。試驗連續(xù)進行7 d，試驗結(jié)束后停食1 d并稱取每個重復(fù)組幼蟾終末總體重。取后5 d數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

使用攝食率作為評估攝食節(jié)律的指標，其計算公式按照楊瑞斌等[14]所提供的方法進行處理。

運用Excel 2019進行數(shù)據(jù)處理，利用SPSS 22軟件進行統(tǒng)計分析。不同時間點的攝食率經(jīng)單因素方差分析（ANOVA），進行多重比較，評估各時間點攝食率的差異顯著性情況。使用t檢驗比較分析2種投喂處理下相同時段攝食率的差異性。

2 結(jié)果與分析

2.1 日投喂 8 次條件下的攝食節(jié)律

攝食率是指攝食的餌料占動物體重的百分比，在生產(chǎn)中，通常使用攝食率來衡量動物的攝食情況。試驗過程中，幼蟾的活動正常，沒有死亡發(fā)生。如圖1所示，一日8次組幼蟾全天在不同時段均有攝食，并且在一天的攝食中呈現(xiàn)出明顯的節(jié)律性。日投喂8次條件下的試驗結(jié)果表明，08:00幼蟾攝食率比其他各時段攝食率高，與除17:00、20:00時段外的其他時段存在顯著差異性（P＜0.05），17:00時段幼蟾攝食率比除08:00時段以外的其他組高，且與各時段差異均不顯著（P＞0.05），幼蟾在08:00和17:00出現(xiàn)攝食高峰，其余時間點攝食量較少；經(jīng)多重比較發(fā)現(xiàn)，幼蟾在夜晚投喂時段攝食率之和與白天投喂時段攝食率之和相比明顯較高。日投喂8次條件下，中華大蟾蜍幼蟾的單次攝食率為0.65%～5.75%，日平均攝食率為（15.22±0.56）%。本研究結(jié)果表明，在餌料豐盈時中華大蟾蜍幼蟾的攝食強度高，在餌料豐盈的條件下更趨向于早晨和傍晚攝食，這與其自然狀況下的生活習(xí)性是密不可分的，屬于比較典型的晨昏攝食型。

2.2 日投喂 1次條件下的攝食節(jié)律

圖1 所示一日1次組，中華大蟾蜍幼蟾在一天中的不同時間點均有攝食活動，02:00和23:00投喂時段幼蟾攝食率比其他時段組攝食率低，與05:00、08:00、11:00、17:00時間段存在顯著差異（P＜0.05），08:00時段幼蟾攝食率比20:00攝食率高，但差異不顯著（P＞0.05），幼蟾在05:00、08:00、17:00出現(xiàn)攝食高峰，其他時間點攝食率較低，但在02：00攝食率最低。日（次）攝食率為3.24%～8.83%，日平均攝食率為（6.09±0.26）%，與一日8次投喂頻率時的日平均攝食率相比較低。本試驗結(jié)果說明，餌料豐富程度對中華大蟾蜍幼蟾的攝食節(jié)律產(chǎn)生了影響，同時腸胃容量、腸胃排空時間、腸胃消化率等因素會對幼蟾攝食量產(chǎn)生影響。

2.3 2種投喂處理下同一時段的攝食率比較

如圖1所示，一日1次投喂頻率時，幼蟾每一時段的攝食率與一日8次投喂頻率條件下，同一時段的攝食率相比，日投喂1次幼蟾攝食率明顯較高，經(jīng)過t檢驗后，結(jié)果表明，2種不同投喂處理下相同時段的攝食率差異顯著（P＜0.05），攝食率能夠反映幼蟾的攝食情況，說明中華大蟾蜍幼蟾的攝食是受餌料豐度和腸胃容量雙重因素的影響。

圖1 不同投喂條件下中華大蟾蜍幼蟾的攝食節(jié)律

3 結(jié)論與討論

3.1 中華大蟾蜍幼蟾的攝食節(jié)律分析

本研究采用日攝食率法，探討了中華大蟾蜍幼蟾在一日1次投喂頻率和一日8次投喂頻率下的攝食節(jié)律。結(jié)果表明，幼蟾全天不同時段都有攝食，并且表現(xiàn)出明顯的節(jié)律性。攝食主要集中在05:00～08:00以及17:00左右，而在11:00～14:00和23:00～02:00，攝食處于低迷狀態(tài)，這與中華大蟾蜍蝌蚪攝食節(jié)律有相似趨勢[13]。在泰國虎紋蛙的規(guī)?；B(yǎng)殖中，飼料的投喂主要在06:00～07:00時和17:00～18:00[15]。在自然界內(nèi)，野生蟾蜍的攝食活動主要集中在傍晚和清晨[16]，與本試驗結(jié)論相似。多數(shù)動物的攝食活動都有明顯的日周期變化規(guī)律，根據(jù)動物的攝食規(guī)律，可以將動物攝食節(jié)律分為白天攝食、晚上攝食、晨昏攝食和無明顯節(jié)律型[17]。本試驗結(jié)果表明，中華大蟾蜍幼蟾的攝食節(jié)律屬于晨昏攝食型。

結(jié)果表明，中華大蟾蜍幼蟾的攝食受餌料豐度和胃充塞度的影響，在相同的攝食時間，一日1次組的單次攝食率都顯著高于一日8次組的單次攝食率，而一日8次組的日攝食率顯著高于一日1次組的日攝食率。動物的攝食節(jié)律是長期進化而來的內(nèi)源性節(jié)律，受光照、溫度、餌料豐度及不同發(fā)育時期等因素的影響[18-20]。李鵠鳴等[21]報道了水溫升高時棘胸蛙蝌蚪和牛蛙蝌蚪食量增加。蟾蜍在秋季時攝食量增大，為冬眠補足營養(yǎng)[16]。本試驗2種投喂模式下，相同時間段幼蟾的攝食率差異顯著，但是總體仍然呈現(xiàn)出晨昏攝食的規(guī)律。

3.2 中華大蟾蜍幼蟾投喂模式分析

投喂模式是由投飼量、投飼時間、投飼頻率、投飼模型等環(huán)節(jié)相互關(guān)聯(lián)組成的有機整體，是集約化養(yǎng)殖管理的核心之一，以獲得最優(yōu)生長速率、最小飼料浪費和最低水質(zhì)污染為目標[18]。以養(yǎng)殖動物內(nèi)源性攝食節(jié)律為生物學(xué)基礎(chǔ)，確定最佳投喂時間、最適投喂量，有利于提高動物的飼料利用率，適宜的投喂時間應(yīng)該避免攝食低谷，選擇在動物攝食高峰階段[22]。根據(jù)本研究結(jié)果，幼蟾在早晨和黃昏時段攝食率要顯著高于其他時段，因此每天可以分別在早晨和傍晚對幼蟾進行投喂，投喂頻率2次/d。根據(jù)本試驗結(jié)果，幼蟾的日平均攝食率約為15%，根據(jù)之前的養(yǎng)殖經(jīng)驗來看，每天對幼蟾投喂幼蟾體重10%的黃粉蟲即可獲得較好的養(yǎng)殖效果，幼蟾對黃粉蟲的消化較好，而按15%投喂時，糞便中存在較多未完全消化的黃粉蟲，因此每天早晚各投喂1次，每次的投喂量應(yīng)在5%左右。蟾蜍的攝食受溫度、季節(jié)、生長階段的影響[16]。投喂量能顯著影響?zhàn)B殖動物的生長，需要根據(jù)蟾蜍的最高生長率和最低飼料系數(shù)來綜合評定最適投喂量[12]，因此，養(yǎng)殖蟾蜍各階段的最適投喂量需要進一步的研究探討。