趙孟陽 高天慧 王怡君

化療作為肺癌的綜合性治療中的首選，雖然近年來有所進展，但由于其毒性大，當患者對化療藥物的敏感性下降時，易出現(xiàn)不良反應，患者也易出現(xiàn)耐藥反應[1-2]，因此，患者 5年內的生存率極低，僅為7%～14%[3]。近年來，關于腫瘤對化療藥物的敏感性試驗已成為研究熱點。前列腺癌過度表達1(PTOV1)在多種癌癥中出現(xiàn)過度表達現(xiàn)象，包括前列腺癌，乳腺癌和肝癌[4-5]。還有研究發(fā)現(xiàn)PTOV1可通過激活乳腺癌的Wnt/β-catenin途徑來促進癌癥干細胞(CSC)的增殖，而CSC與腫瘤對化療藥物的敏感性有關[6-7]。因此本文通過研究肺癌患者外周血中PTOV1的表達情況與腫瘤對化療藥物順鉑和多西紫杉醇的敏感性的關系，進一步探討肺癌對化療藥物的敏感性機制，為化療藥物的選擇提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2019年8月至2020年8月于本院接受的56例肺癌患者作為研究對象，其中男性43例，女性13例，年齡42～73歲，平均年齡(60.34±8.14)歲。納入標準：①符合《CSCO原發(fā)性肺癌診療指南(2016)》[8]肺癌的診斷標準，經(jīng)細胞學檢查、病理診斷確診為肺癌；②患者可耐受放化療治療；③患者已行胸外科手術治療，且就診前未經(jīng)過藥物或放射性治療。排除標準：①合并其他惡性腫瘤患者，②無重要臟器的嚴重損傷；③臨床資料不全患者。研究對象及家屬均簽署研究知情同意書，本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審核通過。

1.2 化療方法

化療藥物為多西紫杉醇注射液及順鉑注射液。肺癌患者化療前1天及第1天口服地塞米松片5 mg；第1天，多西紫杉醇75 mg/m2靜脈滴注1 h；順鉑75 mg/m2，每日2次，共3天，第2～4天，給予阿扎司瓊針以及水化、利尿。

1.3 ECIA法檢測化療藥物敏感性

在患者手術后適當修剪癌組織標本，于含青霉素、鏈霉素的生理鹽水中浸泡，然后用生理鹽水沖洗；切成1 mm×1 mm的組織塊，將其放在細胞培養(yǎng)液浸泡的濾紙上，CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，分為研究組和對照組。24 h后在計算機圖像分析系統(tǒng)中測定組織塊的初始點陣數(shù)(ILN)。然后加入藥物或等量注射用水培養(yǎng)4天。加入MTT培養(yǎng)4 h后測定組織塊被藍染部分的終末點陣數(shù)(FLN)。抑制率=FLN/ILN=[(對照組存活率-實驗組存活率)/對照組存活率]×100%存活率。標準為抑制率≥30%為敏感，<30%為不敏感。

1.4 RT-PCR檢測PTOV1表達水平

使用Trizol法提取患者外周血中總RNA。使用Takara逆轉錄試劑盒(大連寶生物公司)合成cDNA模板，使用BIO-RAD熒光定量PCR儀檢測PTOV1表達水平，以GAPDH為對照，通過2-ΔΔCt方法分析其相對mRNA水平。反應條件為94 ℃預變性5 min，94 ℃30 s、55 ℃30 s、72 ℃60 s，共35個循環(huán)，引物送上海生工生物公司合成。引物如下：PTOV1-F：5'-CCCAGTCCAGATCGT CAACA-3'；PTOV1-R：5'-GCCACCTCTTGGACCGACT-3'。

1.5 統(tǒng)計分析

2 結果

2.1 肺癌體外對不同藥物敏感情況分析

根據(jù)藥敏結果可知，肺癌對多西紫杉醇的體外敏感率為46.43%(26/56)，對順鉑的體外敏感率為25.00%(14/56)，其中肺癌對多西紫杉醇的敏感性顯著高于順鉑(χ2=5.600,P=0.018)。

2.2 肺癌患者的體外藥敏結果與臨床資料的關系

結果顯示多西紫杉醇和順鉑藥物敏感率與患者性別、淋巴結轉移情況、病理類型、分化程度無關(P>0.05)，而與患者年齡、PTOV1表達水平相關(P<0.05)，<6歲組的敏感率顯著高于≤60歲組，敏感組的PTOV1表達水平顯著低于耐藥組，見表1。

表1 肺癌對化學藥物的體外敏感結果與臨床資料的關系/例

2.3 肺癌對化療藥物敏感性的多因素分析

根據(jù)Logistic多因素回歸分析結果顯示，年齡、PTOV1表達水平均是影響肺癌對化療藥物敏感性的獨立危險因素(P<0.05)，見表2。

表2 肺癌對化療藥物敏感性的多因素回歸分析

3 討論

化療是目前肺癌治療的重要手段，鉑類聯(lián)合多西紫杉醇化療可以有效改善術后患者的預后，通過與DNA結合，從而影響腫瘤細胞的DNA復制、轉錄等過程，達到殺傷腫瘤細胞的效果[9-10]，其中DNA損傷修復功能就是肺癌患者對化療藥物產(chǎn)生耐藥性的關鍵[11]。目前，臨床上由于缺少針對個體化的化療方案，患者的治療效果不佳，化療緩解率偏低[12]。因此通過研究肺癌對化療藥物的敏感性，尋求最佳的個體化方案至關重要。根據(jù)本研究藥敏結果可知，肺癌對多西紫杉醇的體外敏感率為46.43%，對順鉑的體外敏感率為25.00%，肺癌對多西紫杉醇的體外敏感率顯著高于順鉑，說明在選擇針對肺癌的化療藥物時可優(yōu)先選擇多西紫杉醇。

本研究結果發(fā)現(xiàn)藥物敏感性與患者性別、淋巴結轉移情況、病理類型、分化程度無關，而與患者年齡表達水平相關，其中<60歲組的敏感率顯著高于≤60歲組，這與目前的研究結果不一致[13]，有研究證實藥物敏感性與病理類型相關，但本研究中鱗癌和腺癌對藥物的敏感性高于其他類型，但差異不顯著，可能與樣本量偏少有關系，可以在以后的研究中加大樣本量來進一步驗證結果。

PTOV1是一種大小為46 KDa的蛋白，由位于19號染色體(19q13)上的12外顯子基因編碼[14]。PTOV1也與多種癌癥的預后不良相關，包括前列腺癌、乳腺癌等[15]。另外有研究指出PTOV1在肺癌患者中高水平表達[16-17]。CSC作為能夠自我更新、自我繁殖的細胞，有助于腫瘤的復發(fā)以及轉移。CSC存在在多數(shù)癌癥包括肺癌中，與化療藥物的耐藥性有關，靶向CSCs可以增加肺癌對化學藥物的敏感性[18-19]。這說明PTOV1可能與患者化療敏感性相關。本研究發(fā)現(xiàn)敏感組的PTOV1表達水平顯著低于耐藥組，以及多因素分析結果顯示PTOV1表達水平是影響肺癌對化療藥物敏感性的獨立危險因素。該研究進一步驗證了PTOV1表達水平與化療敏感性有關，可能可以通過靶向PTOV1來增加肺癌對化療藥物的敏感性。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)肺癌患者外周血中PTOV1的表達情況與腫瘤對化療藥物順鉑和多西紫杉醇的敏感性存在相關性，為今后針對患者選擇合適的化療藥物提供新的思路。但本研究存在一定的局限性，由于樣本量較少以及中心單一等問題導致結果受到影響，需要在后續(xù)的研究中進一步完善。