沙月霞，黃澤陽(yáng)，馬瑞

寧夏農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所，銀川 750011

0 引言

【研究意義】稻瘟?。╮ice blast）是水稻生產(chǎn)上的重要病害，其病原菌有性態(tài)為子囊菌門間座殼屬灰色大角間座殼 Magnaporthe oryzae（無(wú)性態(tài)為梨孢屬灰梨孢Pyricularia oryzae）[1]。稻瘟病廣泛分布于世界各水稻種植地區(qū)，其造成的年均產(chǎn)量損失約 20%—30%，流行年份約50%以上，重病田甚至顆粒無(wú)收[2]。當(dāng)前，水稻生產(chǎn)上最主要的措施是種植抗病品種和化學(xué)農(nóng)藥防治；但由于品種選育周期較長(zhǎng)、稻瘟病菌生理小種易變異，品種抗性易喪失；長(zhǎng)期大量的化學(xué)農(nóng)藥殘留影響生態(tài)環(huán)境和人類健康，而且導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生抗藥性。因此，研發(fā)安全、有效、綠色的新型生防菌劑對(duì)稻瘟病的綜合治理具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】假單胞菌（Pseudomonas spp.）具有來(lái)源廣泛、與環(huán)境相容性好、產(chǎn)生多種具有廣譜抑菌活性的抗菌物質(zhì)[3-4]、誘導(dǎo)植株抗病性[5]等特點(diǎn)，一直是植物病害生物防治的研究熱點(diǎn)之一。已有的研究報(bào)道表明，對(duì)稻瘟病菌具有較強(qiáng)拮抗作用的假單胞菌種類包括熒光假單胞菌（P.fluorescens）[6-7]、銅綠假單胞菌（P.aeruginosa）[8-9]、惡臭假單胞菌（P.putida）[10]、類產(chǎn)堿假單胞菌（P.pseudoalcaligenes）[11]和綠針假單胞菌（P.chloroaphis）EA105[12]。關(guān)于假單胞菌防治稻瘟病的研究國(guó)內(nèi)外報(bào)道較多，主要集中于拮抗作用和防御酶的誘導(dǎo)，對(duì)嗜堿假單胞菌（P.alcaliphila）預(yù)防稻瘟病的田間應(yīng)用研究尚處于探索階段。NG等[8]分離的銅綠假單胞菌UPMP1對(duì)稻瘟病菌的抑制率為40.65%，能增強(qiáng)水稻幼苗的過(guò)氧化物酶、多酚氧化酶和苯丙氨酸裂解酶活性。植物內(nèi)生菌由于防病殺蟲(chóng)的生物學(xué)活性顯著[13-14]兼具促生增產(chǎn)效果[15-16]、提高植株抵抗逆境能力[17-18]、協(xié)助寄主吸收營(yíng)養(yǎng)元素[19-20]、降解重金屬和農(nóng)藥污染[21]等特點(diǎn)，廣泛用于生物源制劑的研制[22-23]。JHA等[11]研究表明，類產(chǎn)堿假單胞菌GJ17分離于水稻根系組織，對(duì)稻瘟病的防治效果高于根際促生菌?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】嗜堿假單胞菌菌株Ej2為筆者課題組從寧夏回族自治區(qū)水稻葉片內(nèi)生菌中獲得，其對(duì)稻瘟病菌、鐮孢菌（Fusarium spp.）等植物病原菌的抑菌活性以及田間應(yīng)用效果亟需深入研究?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】評(píng)價(jià)嗜堿假單胞菌菌株Ej2防治稻瘟病的效果及對(duì)鐮孢菌等病原菌的抑菌效果，探明其發(fā)酵液對(duì)水稻種子萌發(fā)及植株生長(zhǎng)的促進(jìn)效果、對(duì)水稻植株脅迫激素及生長(zhǎng)激素的影響，為開(kāi)展稻瘟病、西瓜枯萎病、蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病等真菌病害的田間防治打下基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)田概況

田間試驗(yàn)于 2020年在寧夏回族自治區(qū)靈武市梧桐樹(shù)鄉(xiāng)（106.18°E，37.59°N）和吳忠市金雞鎮(zhèn)（106.14°E，37.94°N）水稻主栽地區(qū)進(jìn)行，屬于旱直播種植區(qū)，稻瘟病常年發(fā)生，行距為30 cm，試驗(yàn)期間正常噴施殺蟲(chóng)劑和水肥管理，不噴施其他殺菌劑。土壤類型是灌淤土，弱堿性（pH 7.8—8.7），有機(jī)質(zhì)17.63 g·kg-1，全氮 1.03 g·kg-1，有效磷 34.19 mg·kg-1，速效鉀153.42 mg·kg-1，平均海拔1 133 m，氣壓88 kPa。供試水稻品種為G19、秋優(yōu)88和粳谷8號(hào)，均為寧夏水稻種植地區(qū)主栽品種。

1.2 生防菌、病原菌及其培養(yǎng)

供試生防菌嗜堿假單胞菌Ej2分離自水稻葉片。供試稻瘟病菌 P131由中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院提供；茄鐮孢（F.solani）N18-1-2和串珠鐮孢（F.moniliforme）N19-2-2由本實(shí)驗(yàn)室分離；西瓜枯萎病菌（F.oxysporum f.sp.niveum）M8、草莓炭疽病菌（Colletotrichum gloeospoioides）ZDP21、鏈格孢蘋(píng)果?；停ˋlternaria alternata f.sp.mali）BJ-A5和草莓黑斑病菌（A.alternata）BJ-ST24由北京市農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)環(huán)境保護(hù)研究所分離。

供試生防菌在金氏King’s B（KB）固體培養(yǎng)基平板上30℃暗培養(yǎng)2 d，供試病原菌在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）平板上暗培養(yǎng)7—9 d。

1.3 嗜堿假單胞菌Ej2對(duì)病原菌的拮抗作用

將直徑1 cm的稻瘟病菌P131菌餅放置在PDA平板中央，28℃暗培養(yǎng)2 d后，測(cè)量菌落半徑。然后在菌落邊緣兩側(cè)相距 2 cm的位置接種嗜堿假單胞菌Ej2，劃線長(zhǎng)度為2 cm，未劃線菌株Ej2的平板作為空白對(duì)照，所有平板在28℃黑暗培養(yǎng)，5 d后測(cè)量不同處理組的病原菌菌落半徑和抑菌帶。通過(guò)菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定抑菌效果，計(jì)算相對(duì)菌絲抑制率。

將直徑1 cm的稻瘟病菌P131菌餅放置在PDA培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中央，相同大小的KB固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿均勻涂布嗜堿假單胞菌 Ej2，前一個(gè)培養(yǎng)皿反扣在后一個(gè)培養(yǎng)皿上面，兩個(gè)皿接觸位置用封口膜密封嚴(yán)實(shí)；未涂布菌株Ej2的處理作為空白對(duì)照，每組處理5皿重復(fù)。所有培養(yǎng)皿28℃暗培養(yǎng)9 d后，測(cè)量?jī)山M處理的稻瘟病菌菌落直徑，計(jì)算嗜堿假單胞菌Ej2產(chǎn)生的揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)稻瘟病菌的抑制率。

將直徑1 cm的鐮孢菌等5種植物病原菌的菌餅放置在PDA平板中央，在菌餅兩側(cè)距離2 cm的位置接種嗜堿假單胞菌Ej2，劃線長(zhǎng)度為2 cm，未劃線菌株Ej2的平板作為空白對(duì)照，所有平板于25℃暗培養(yǎng)，5 d后測(cè)量病原菌菌落直徑和抑菌帶，計(jì)算抑制率。

1.4 嗜堿假單胞菌 Ej2對(duì)稻瘟病的防治作用及對(duì)水稻促生效果評(píng)價(jià)

挑選健康水稻種子 G19，10%次氯酸鈉溶液中浸泡10 min，無(wú)菌水沖洗3次。然后分別在嗜堿假單胞菌Ej2發(fā)酵液和無(wú)菌水中浸泡0.5 h，之后在28℃、相對(duì)濕度70%的人工氣候箱培養(yǎng)（光照12 h/黑暗12 h），48 h后調(diào)查種子露白數(shù)量，計(jì)算對(duì)種子萌發(fā)的促進(jìn)效果。每個(gè)培養(yǎng)皿里100粒水稻種子，每個(gè)處理3皿重復(fù)。

溫室種植水稻，試驗(yàn)設(shè)計(jì)3組處理：嗜堿假單胞菌 Ej2發(fā)酵液；無(wú)菌水；75%三環(huán)唑可濕性粉劑（陶氏益農(nóng)農(nóng)業(yè)科技（中國(guó)）有限公司）。每個(gè)處理設(shè)計(jì)4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)約90株水稻苗。種植20 d的時(shí)候噴施菌劑或無(wú)菌水，嗜堿假單胞菌Ej2發(fā)酵液菌體濃度約1×108CFU/mL（OD600=1.0—1.2），每個(gè)處理噴施50 mL。噴施24 h 后，所有試驗(yàn)水稻植株噴施稻瘟病菌孢子懸浮液20 mL，孢子濃度約1×106CFU/mL，7 d后調(diào)查葉瘟的發(fā)病狀況。

田間試驗(yàn)地點(diǎn)在靈武市梧桐樹(shù)鄉(xiāng)和吳忠市金雞鎮(zhèn)，試驗(yàn)設(shè)計(jì)4組處理：CK為清水對(duì)照；嗜堿假單胞菌Ej2發(fā)酵液（1×108CFU/mL）；20%稻瘟酰胺懸浮劑，制劑用量為600—750 g·hm-2；芽孢桿菌菌劑（解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）S170和貝萊斯芽孢桿菌（B.velezensis）E69的混合液，本實(shí)驗(yàn)室分離獲得的稻瘟病生防菌），藥液量7.50 L·hm-2（有效活菌數(shù)≥1×109CFU/mL）。每組處理設(shè)計(jì)4個(gè)重復(fù)大區(qū)，隨機(jī)排列，每個(gè)大區(qū)試驗(yàn)面積約600 m2。分別在水稻旱直播種植100 d（分蘗期）、120 d（孕穗期）和140 d（破口期）葉面噴施。旱直播種植110 d（分蘗盛期）調(diào)查葉瘟的危害，直播后160 d（成熟期）調(diào)查穗頸瘟的危害，調(diào)查分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)采用中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T15970—1995）。水稻收獲期采集稻穗，每組處理采集4個(gè)小區(qū)，每個(gè)小區(qū)1 m2，測(cè)量株高、穗長(zhǎng)、穗重和千粒重，評(píng)價(jià)促生效果。

1.5 嗜堿假單胞菌Ej2對(duì)水稻內(nèi)源激素的影響

1.5.1 樣本采集 嗜堿假單胞菌Ej2施藥時(shí)間、次數(shù)與田間試驗(yàn)相同，于收獲期采集水稻植株，取中部莖稈，剪成1 cm，無(wú)菌水沖洗3次，裝入2 mL離心管中，每個(gè)離心管0.5 g樣本，每個(gè)處理7個(gè)重復(fù)，液氮冷凍后采用干冰郵寄至中科新生命科技有限公司。

1.5.2 待測(cè)樣本前處理 待測(cè)樣本采用液氮研磨，然后（80±5）mg樣本中加入50 μL內(nèi)標(biāo)溶液和1 mL乙腈水溶液（1% FA），振蕩2 min混合均勻；4℃黑暗條件下抽提12 h，14 000×g離心10 min，取800 μL上清液用氮?dú)獯蹈?，加?00 μL乙腈水溶液（1∶1，v/v），混合均勻后，再次14 000×g離心10 min，去上清液進(jìn)行色譜-質(zhì)譜分析。

1.6 色譜-質(zhì)譜分析

1.6.1 高效液相色譜條件 代謝上清液分離采用超高效液相色譜系統(tǒng)（Agilent 1290 Infinity LC）。流動(dòng)相組成包括A相（乙腈水溶液，1% FA）和B相（乙腈）。液相系統(tǒng)條件：柱溫40℃，流速為 0.4 mL·min-1，進(jìn)樣量為 5 μL。液相梯度條件：0—20 min，B相從0—90%；20—25 min，B相保持90%；25—27 min，B相從90%—0；27—30 min，B相保持在0。

1.6.2 質(zhì)譜分析 質(zhì)譜分析條件：Thermo Scientific TSQ Quantiva，屏蔽氣流，30 Arb；輔助氣體流，10 Arb；尾氣流，8 Arb；碰撞氣體，1.5 m Torr；離子連接管溫度，350℃；汽化器溫度，300℃；噴霧電壓，3.0 kV。MRM模式下測(cè)試陰陽(yáng)離子對(duì)。

1.7 數(shù)據(jù)處理

供試生防菌對(duì)病原菌的拮抗作用、對(duì)水稻生長(zhǎng)及稻瘟病預(yù)防效果的調(diào)查數(shù)據(jù)在Excel 2016中處理，顯著性分析采用DPS15.0統(tǒng)計(jì)軟件，方差分析選用單因素分析中的最小顯著差數(shù)法（LSD）計(jì)算（P＜0.05）。

計(jì)算公式：相對(duì)菌絲抑制率（%）=[（空白對(duì)照菌絲生長(zhǎng)量-處理組菌絲生長(zhǎng)量）/ 空白對(duì)照菌絲生長(zhǎng)量]×100；病情指數(shù)＝[∑各級(jí)病葉（穗）數(shù)×相對(duì)級(jí)數(shù)值]/[調(diào)查總?cè)~（穗）數(shù)×9]×100；防治效果（%）＝[（CK病情指數(shù)-處理病情指數(shù)）/CK病情指數(shù)]×100。

供試生防菌對(duì)水稻內(nèi)源激素影響的數(shù)據(jù)采用Thermo Scientific Xcalibur 2.1軟件進(jìn)行分析，依據(jù)植物激素標(biāo)準(zhǔn)曲線中的激素含量計(jì)算植物內(nèi)源激素含量。

2 結(jié)果

2.1 嗜堿假單胞菌Ej2對(duì)稻瘟病菌的拮抗作用

嗜堿假單胞菌Ej2對(duì)稻瘟病菌具有顯著的拮抗作用，能夠明顯的抑制菌絲生長(zhǎng)，相對(duì)菌絲抑制率達(dá)到78.57%，其產(chǎn)生的揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)稻瘟病菌的菌絲生長(zhǎng)抑制效果也較為明顯（圖1）。

圖1 嗜堿假單胞菌Ej2對(duì)稻瘟病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制效果Fig.1 The hypha growth rate of M.oryzae P131 inhibited by P.alcaliphila Ej2

2.2 嗜堿假單胞菌Ej2對(duì)稻瘟病的防治效果

嗜堿假單胞菌Ej2在溫室盆栽條件下對(duì)稻瘟病的防治效果較為明顯（表 1），對(duì)葉瘟的防治效果達(dá)到78.26%，與75%三環(huán)唑可濕性粉劑的防治效果無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表1 嗜堿假單胞菌Ej2在溫室條件下對(duì)稻瘟病的防治效果Table 1 The control efficacy of P.alcaliphila Ej2 against rice blast under greenhouse condition

靈武市的田間防治效果試驗(yàn)表明，嗜堿假單胞菌Ej2菌劑對(duì)葉瘟的田間防治效果為75.07%，與芽孢桿菌菌劑的田間防治效果 78.04%無(wú)顯著差異（P＞0.05），與稻瘟酰胺的田間防治效果64.05%有顯著差異（P＜0.05）；嗜堿假單胞菌Ej2菌劑對(duì)穗頸瘟的田間防治效果為75.09%，與稻瘟酰胺（74.60%）、芽孢桿菌菌劑（72.76%）的田間防治效果均無(wú)顯著差異（P＞0.05）（表2）。

表2 嗜堿假單胞菌Ej2防治稻瘟病的田間效果（靈武市）Table 2 The control efficacy of P.alcaliphila Ej2 against rice blast in the field (in Lingwu City)

吳忠市的田間防治效果試驗(yàn)表明，嗜堿假單胞菌Ej2菌劑對(duì)葉瘟的田間防治效果為83.67%，與芽孢桿菌菌劑（82.88%）、稻瘟酰胺（81.28%）的田間防治效果均無(wú)顯著差異（P＞0.05）；嗜堿假單胞菌Ej2菌劑對(duì)穗頸瘟的田間防治效果為62.79%，與芽孢桿菌菌劑的田間防治效果 65.46%無(wú)顯著差異（P＞0.05），與稻瘟酰胺田間防治效果 58.87%有較明顯差異（表3）。

表3 嗜堿假單胞菌Ej2防治稻瘟病的田間效果（吳忠市）Table 3 The control efficacy of P.alcaliphila Ej2 against rice blast in the field (in Wuzhong City)

2.3 嗜堿假單胞菌 Ej2對(duì)鐮孢菌等病原菌的拮抗作用

嗜堿假單胞菌Ej2對(duì)鐮孢菌等多種植物病原菌具有拮抗作用（表 4），對(duì)草莓炭疽病菌、鏈格孢蘋(píng)果?；秃臀鞴峡菸【囊志Ч橛?0%—60%，對(duì)串珠鐮孢和茄鐮孢的抑菌效果在41%—50%，對(duì)草莓黑斑病菌的抑菌效果＜20%。這表明菌株 Ej2具有對(duì)稻瘟病、土傳病害、草莓炭疽病、蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病等真菌病害的應(yīng)用潛力。

表4 嗜堿假單胞菌Ej2對(duì)多種植物病原菌的拮抗作用Table 4 The antagonist activity of P.alcaliphila Ej2 against various plant pathogens in vitro

2.4 嗜堿假單胞菌Ej2對(duì)水稻的促生效果評(píng)價(jià)

嗜堿假單胞菌Ej2能夠顯著提高種子萌發(fā)率，浸種后的水稻種子萌發(fā)率提高了41.67%。嗜堿假單胞菌Ej2對(duì)水稻生長(zhǎng)具有明顯的促生效果（表5）。噴施3次嗜堿假單胞菌Ej2發(fā)酵液會(huì)增加水稻株高、穗重和千粒重；對(duì)株高和穗重的促進(jìn)效果與芽孢桿菌菌劑無(wú)顯著差異（P＞0.05），與稻瘟酰胺具有顯著差異（P＜0.05）；對(duì)穗長(zhǎng)的促進(jìn)效果與芽孢桿菌菌劑、稻瘟酰胺處理之間無(wú)顯著差異（P＞0.05）；對(duì)千粒重的促進(jìn)效果與稻瘟酰胺無(wú)顯著差異（P＞0.05），但與芽孢桿菌菌劑有較明顯的差異。

表5 嗜堿假單胞菌Ej2對(duì)水稻生長(zhǎng)的促生效果Table 5 Effect of P.alcaliphila Ej2 on promoting the growth of rice plant

2.5 嗜堿假單胞菌Ej2對(duì)植物內(nèi)源激素的影響

嗜堿假單胞菌Ej2發(fā)酵液噴施3次后，水稻植株中的內(nèi)源激素水平發(fā)生變化（表 6）。乙烯和脫落酸含量顯著增加；玉米素核苷、反式玉米素核苷和異戊烯基腺嘌呤核苷激素含量顯著下降；植物生長(zhǎng)素、茉莉酸、順?lè)窜岳蛩犷惣に?、茉莉?異亮氨酸、順式玉米素、反式玉米素、異戊烯基腺嘌呤、水楊酸等激素含量無(wú)顯著變化。

表6 嗜堿假單胞菌Ej2對(duì)水稻內(nèi)源激素的影響Table 6 Effect of P.alcaliphila Ej2 on the endogenous hormones in rice plant

3 討論

3.1 嗜堿假單胞菌 Ej2對(duì)稻瘟病具有較明顯的防治作用并對(duì)水稻具有促生效果

假單胞菌防治病害的機(jī)制主要包括拮抗作用、營(yíng)養(yǎng)與生態(tài)位點(diǎn)的競(jìng)爭(zhēng)、有效的根際定殖以及誘導(dǎo)植物系統(tǒng)抗病性[5,10]。假單胞菌具有較明顯的防病、促生效果，與環(huán)境兼容性好，通常被研制成商品化的生防菌劑[24-25]。但是假單胞菌在生防技術(shù)領(lǐng)域應(yīng)用的菌株種類較少，篩選新的生防資源一直是植物病害生物防治研究的熱點(diǎn)之一。

目前，熒光假單胞菌在稻瘟病防治中應(yīng)用較廣，國(guó)內(nèi)外學(xué)者關(guān)于嗜堿假單胞菌的研究主要集中于脫氮特性及機(jī)理研究，國(guó)內(nèi)還未有學(xué)者研究過(guò)該菌株對(duì)稻瘟病菌的拮抗作用，本文研究結(jié)果證實(shí)了嗜堿假單胞菌Ej2對(duì)稻瘟病的防治效果及對(duì)水稻的促生效果均較為明顯，為稻瘟病新型殺菌劑的研發(fā)提供了生防種質(zhì)資源，也拓展了嗜堿假單胞菌的應(yīng)用領(lǐng)域。已有的研究表明，植物內(nèi)生菌受環(huán)境因素影響較小，生防效果一般較穩(wěn)定[13,16]。嗜堿假單胞菌Ej2來(lái)源于水稻葉片，研究結(jié)果驗(yàn)證了其作為植物內(nèi)生菌的田間應(yīng)用效果，具有預(yù)防多種真菌病害的應(yīng)用潛力。

嗜堿假單胞菌Ej2對(duì)稻瘟病菌菌落生長(zhǎng)具有明顯的拮抗作用，產(chǎn)生的揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)菌落生長(zhǎng)的抑菌效果達(dá)到了 57.78%，研究結(jié)果表明揮發(fā)性物質(zhì)是菌株Ej2的抗菌活性物質(zhì)之一。篩選和利用具有多種拮抗機(jī)制的假單胞菌作為生防菌劑一直是植物病害生物防治的途徑之一[26]。從胡椒根部組織中篩選的惡臭假單胞菌 BP25產(chǎn)生的揮發(fā)性物質(zhì)和非揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)稻瘟病菌菌落生長(zhǎng)的抑制率分別達(dá)到 71.30%和 37.90%，在水稻幼苗根部具有較強(qiáng)的定殖能力，并增強(qiáng)植株抗病相關(guān)防御酶活性[10]。熒光假單胞菌pfr1對(duì)稻瘟病菌菌絲抑制率達(dá)到76.30%，促生和增產(chǎn)效果顯著[25]。本文研究證實(shí)了嗜堿假單胞菌Ej2具有廣譜抗菌活性，能夠有效防治稻瘟病，為應(yīng)用于稻瘟病的防治提供了科學(xué)依據(jù)。田間大區(qū)試驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)，Ej2可以提高種子萌發(fā)并促進(jìn)植株生長(zhǎng)，顯示了該菌株具有良好的田間應(yīng)用價(jià)值。菌株Ej2防治草莓炭疽病和西瓜枯萎病等真菌病害的應(yīng)用效果需要進(jìn)一步深入驗(yàn)證，但平板拮抗的研究結(jié)果表明，該菌株可能具有防治草莓炭疽病和西瓜枯萎病等病害的生防潛力。

3.2 嗜堿假單胞菌Ej2可以調(diào)控水稻內(nèi)源激素表達(dá)

植物內(nèi)源激素對(duì)于植株的生長(zhǎng)發(fā)育至關(guān)重要[27-28]，其不僅參與生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程[29-30]，而且調(diào)控植株應(yīng)對(duì)生物和非生物等環(huán)境脅迫[31-33]。在逆境脅迫下，脫落酸、生長(zhǎng)素、水楊酸、茉莉酸、細(xì)胞分裂素等植物內(nèi)源激素往往發(fā)生變化，部分激素自身合成的能力會(huì)受到抑制[34-35]。脫落酸、水楊酸、茉莉酸是常見(jiàn)的脅迫激素，其中脫落酸在逆境脅迫下含量會(huì)增加，氣孔開(kāi)閉被調(diào)節(jié)以減少植株內(nèi)的水蒸騰量[36-37]。本研究檢測(cè)了嗜堿假單胞菌Ej2發(fā)酵液噴施3次后水稻植株中的激素含量變化，結(jié)果表明噴施Ej2顯著增加了脫落酸和乙烯的含量，降低了玉米素核苷、反式玉米素核苷和異戊烯基腺嘌呤核苷激素含量。植物脅迫激素含量與植株抗逆性密切相關(guān)，隨著脫落酸和乙烯的含量增加，植株抗逆性也提高。研究結(jié)果間接說(shuō)明Ej2發(fā)酵液噴施3次能夠提高水稻植株抗逆性。玉米素核苷、反式玉米素核苷和異戊烯基腺嘌呤核苷等細(xì)胞分裂素負(fù)調(diào)控植物根與莖的生長(zhǎng)，本研究中3種激素含量下降，說(shuō)明Ej2噴施3次后能促進(jìn)水稻根系和莖的生長(zhǎng)?；贛RM方法的靶向代謝組學(xué)技術(shù)具有高靈敏度、高分辨率、高準(zhǔn)確性等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用于植物激素的定量檢測(cè)。本研究結(jié)果表明，可以采用MRM方法的靶向代謝組學(xué)技術(shù)研究嗜堿假單胞菌對(duì)植物生長(zhǎng)激素的影響。

4 結(jié)論

嗜堿假單胞菌 Ej2對(duì)稻瘟病具有較好的防治作用，對(duì)多種植物病原真菌兼具抑菌活性，可以明顯促進(jìn)水稻種子萌發(fā)和植株生長(zhǎng)，在水稻產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展中具有推廣應(yīng)用潛力。菌株Ej2發(fā)酵液連續(xù)噴施3次后，能夠顯著增加植株內(nèi)的脅迫激素脫落酸和乙烯水平，降低玉米素核苷、反式玉米素核苷和異戊烯基腺嘌呤核苷水平。因此，嗜堿假單胞菌Ej2是一種潛在的、有效的生防菌株，兼具防治稻瘟病、炭疽病、蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病、草莓黑斑病和鐮孢菌引起的土傳病害的潛力。