朱凌霄， 肖 春， 張建華

在全世界范圍內(nèi)，乳腺癌作為女性腫瘤中發(fā)病人數(shù)以及惡性程度較高的疾病之一，其近年來(lái)的死亡率逐步下降，但轉(zhuǎn)移性乳腺癌(metastatic breast cancer，MBC)仍是一種無(wú)法治愈的疾病。根據(jù)2021年的最新數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球范圍內(nèi)的女性惡性腫瘤中乳腺癌發(fā)病率高居首位，很大程度上影響女性的身心健康及生命安全[1]。隨著醫(yī)療的發(fā)展進(jìn)步以及社會(huì)層面對(duì)于乳腺相關(guān)疾病的宣教科普，人們對(duì)于乳腺癌的認(rèn)識(shí)逐漸深入，早期診斷乳腺癌的患者比例逐年增加，但是仍有相當(dāng)一部分患者確診時(shí)已經(jīng)出現(xiàn)局部轉(zhuǎn)移甚至遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。有數(shù)據(jù)顯示，MBC患者的5年生存率只有38%[2]。液體活檢技術(shù)有別于傳統(tǒng)的穿刺活檢技術(shù)，具有創(chuàng)傷小、操作性強(qiáng)以及靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，且可重復(fù)操作，在乳腺癌診療的整個(gè)過(guò)程中都可發(fā)揮指導(dǎo)作用。本文就液體活檢技術(shù)在MBC診療中的應(yīng)用進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 液體活檢技術(shù)概論

液體活檢技術(shù)是一種侵入性較小的、針對(duì)惡性腫瘤的無(wú)創(chuàng)診斷檢查技術(shù)，因?yàn)槠淇梢詼p輕患者在手術(shù)或者穿刺活檢等侵入性檢查中的痛苦而受到了廣泛關(guān)注[3]。液體活檢主要是通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)、高通量測(cè)序、酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)以及生物傳感器等技術(shù)，對(duì)于原發(fā)性腫瘤在發(fā)生發(fā)展過(guò)程中分泌到人體外周體液中的各種組分進(jìn)行測(cè)定和分析，從而完成對(duì)于惡性腫瘤的早期篩查、用藥指導(dǎo)、病情進(jìn)展評(píng)估和治療效果觀察等，可貫穿應(yīng)用于疾病的診療全程[4]。液體活檢大致可分為兩大類：血液來(lái)源的生物標(biāo)志物和其他來(lái)源的有臨床診斷價(jià)值的生物標(biāo)志物(例如：唾液、腦脊液、尿液、胸腹腔引流液等)。血液來(lái)源的標(biāo)志物主要是游離DNA(circulating free DNA,cfDNA)，其中包括循環(huán)腫瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA)、循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cells,CTCs)、微小RNA(microRNA,miRNA)、外泌體、長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)以及腫瘤誘導(dǎo)血小板(tumor-educated platelets,TEPs)等。液體活檢具有動(dòng)態(tài)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)微小殘留病灶，對(duì)腫瘤進(jìn)行基因分型以指導(dǎo)靶向治療，以及跟蹤腫瘤演變的潛力[5]。此外，與單次組織活檢相比，液體活檢可以通過(guò)檢測(cè)原發(fā)性和繼發(fā)性腫瘤釋放的腫瘤細(xì)胞或物質(zhì)來(lái)反映病灶間和病灶內(nèi)的異質(zhì)性，并提供更全面的癌癥分子譜。

2 液體活檢主要標(biāo)志物研究進(jìn)展

2.1CTCs 外周血CTCs于1869年首先由T.R.Ashworth觀察到并正式提出[6]，但它們的重要性在近20年才逐漸被理解并進(jìn)行應(yīng)用。CTCs從原發(fā)性腫瘤中分離，進(jìn)入人體的循環(huán)系統(tǒng)，最后滲入淋巴結(jié)或遠(yuǎn)處器官。Mohme等[7]研究證實(shí)，CTCs在形成轉(zhuǎn)移性病灶之前首先進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)，可能比臨床影像學(xué)表現(xiàn)及臨床體征更敏感，更有助于臨床盡早采取干預(yù)措施。在脫離原發(fā)灶之前，CTCs改變了自身形態(tài)及表面蛋白，具有不同尋常的特性，主要是指經(jīng)歷上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)后獲得間充質(zhì)樣表型，失去細(xì)胞間相互作用和細(xì)胞極性后分泌多種酶以消化細(xì)胞外基質(zhì)并獲得遷移能力[8]。這些遷移的CTCs滲透至全身并最終定植到合適的位置后進(jìn)行間充質(zhì)-上皮轉(zhuǎn)化(mesenchymal-epithelial transition，MET)，重新獲得上皮特性并完成遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[9]。但是，由于外周血中CTCs的含量很少，所以如何針對(duì)其進(jìn)行篩選、富集成為當(dāng)前技術(shù)的核心問題。關(guān)于CTCs的分離、篩選以及富集方法目前依據(jù)三個(gè)方面，其一是根據(jù)CTCs區(qū)別于正常細(xì)胞的一些物理學(xué)特性，如大小、表面電荷、密度以及抗壓能力等進(jìn)行篩選，包括ISET系統(tǒng)、Screen Cell系統(tǒng)、Oncoquick系統(tǒng)、雙向電泳系統(tǒng)以及流體輔助分離技術(shù)等；其二是基于CTCs的表面免疫相關(guān)的生物標(biāo)志物來(lái)進(jìn)行篩選，如Cellsearch系統(tǒng)[首個(gè)且唯一經(jīng)過(guò)美國(guó)食品和藥物管理局(Food and Drug Administration,FDA)批準(zhǔn)進(jìn)入市場(chǎng)的技術(shù)]、Adnatest系統(tǒng)以及MACS系統(tǒng)等；其三是聯(lián)合前兩者的新型微流控芯片技術(shù)，能夠特異性篩選并捕獲CTCs后完成高效有序的富集過(guò)程[10]。雖然目前檢測(cè)方法越來(lái)越多，但是能夠大范圍應(yīng)用于市場(chǎng)的主流技術(shù)仍較少。

2.2ctDNA和cfDNA 除了CTCs外，ctDNA本身亦攜帶與惡性腫瘤有關(guān)的基因信息，近年來(lái)在臨床上應(yīng)用越來(lái)越廣泛。既往研究顯示，cfDNA在惡性腫瘤的臨床診治中發(fā)揮了重要作用，ctDNA只是cfDNA中的一小部分，二者的比例稱為循環(huán)腫瘤分?jǐn)?shù)(circulating tumor fraction,cTF)。cTF在腫瘤體積較小且局限時(shí)通常很低，但隨著腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移而增高[11]。不同癌癥患者之間的ctDNA水平可能有很大差異。這種差異是由于腫瘤類型的差異造成的，有一些癌癥(如結(jié)直腸癌)與高水平的ctDNA相關(guān)，也有一些癌癥(如神經(jīng)膠質(zhì)瘤)與較低水平的ctDNA相關(guān)[12]。盡管如此，即使在癌癥類型相同的患者中，ctDNA水平也可能有很大差異。在個(gè)體患者中，隨著時(shí)間的推移，ctDNA水平與總體腫瘤負(fù)荷的波動(dòng)仍密切相關(guān)?？紤]到循環(huán)中cfDNA的半衰期很短(大約1 h)，ctDNA已被提議作為整體腫瘤負(fù)荷的潛在替代物，可用于通過(guò)連續(xù)抽血監(jiān)測(cè)治療期間的反應(yīng)[13]。一般來(lái)說(shuō)，使用ctDNA監(jiān)測(cè)治療反應(yīng)和腫瘤負(fù)荷變化的最敏感和最有效的方法是識(shí)別特定個(gè)體腫瘤的基因組改變，并在患者的血液中進(jìn)行追蹤。ctDNA在外周血中濃度極低，且半衰期很短，因此檢測(cè)難度較大。目前主要的檢測(cè)手段包括數(shù)字化PCR(如微滴式數(shù)字PCR、BEAMing技術(shù)等)以及二代測(cè)序技術(shù)(next-generation sequencing，NGS)，旨在評(píng)估單個(gè)DNA分子，可以檢測(cè)cfDNA中突變頻率為0.01%甚至更低的等位基因。值得一提的是，為了避免NGS反應(yīng)中聚合酶發(fā)生錯(cuò)誤，目前已經(jīng)開發(fā)了“分子條形碼”技術(shù)，即每個(gè)原始模板中的DNA分子都帶有個(gè)性化的條形碼，以幫助區(qū)分原始模板分子中存在的真正突變和聚合酶過(guò)程中引入的錯(cuò)誤反應(yīng)[14]。使用這種方法，再加上深度測(cè)序覆蓋和錯(cuò)誤抑制算法，可以進(jìn)一步優(yōu)化檢測(cè)和分析ctDNA的方法，并有助于擴(kuò)大潛在的臨床應(yīng)用。

2.3外泌體 外泌體是源自細(xì)胞的納米級(jí)膜包裹囊泡，通過(guò)質(zhì)膜的連續(xù)內(nèi)陷最終形成多囊泡體，并在各種機(jī)制的協(xié)同作用下與細(xì)胞質(zhì)膜融合，最終被分泌出去[15]。由于多囊泡體可以與其他細(xì)胞內(nèi)囊泡和細(xì)胞器相互作用，導(dǎo)致外泌體成分的多樣性，它們性質(zhì)非常穩(wěn)定并能穿梭于體液中[16]。外泌體中轉(zhuǎn)運(yùn)的成分包括蛋白質(zhì)、各種類型的RNA(miRNA、lncRNA、mRNA)和各種DNA。這些生物標(biāo)志物通過(guò)遞送信息至受體細(xì)胞來(lái)影響基質(zhì)修飾和血管生成的進(jìn)程[17]。此外，外泌體通過(guò)改變免疫細(xì)胞的表型來(lái)重新激活機(jī)體抑制腫瘤細(xì)胞的活性，從而促進(jìn)腫瘤微環(huán)境中的免疫抑制[18]。與前文所述的CTCs、ctDNA不同的是，外泌體還具有自我調(diào)節(jié)功能，可以通過(guò)自分泌或旁分泌機(jī)制調(diào)節(jié)鄰近細(xì)胞和遠(yuǎn)處靶細(xì)胞，介導(dǎo)機(jī)體的生理和病理活動(dòng)?？偠灾?，外泌體參與腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的血管生成、EMT、侵襲轉(zhuǎn)移、免疫逃逸、耐藥等方面，具有良好的臨床應(yīng)用前景[19]。外泌體的分離方法主要取決于其組成成分以及物理性質(zhì)[20]。目前用于外泌體分離的常用技術(shù)包括超速離心、過(guò)濾、聚合物共沉淀、尺寸排除色譜法、磁性相關(guān)細(xì)胞無(wú)接觸分選以及微流體過(guò)濾等。其中超速離心法廣泛用于外泌體的分離，但由于純度低，難以在臨床上應(yīng)用[21]。雖然循環(huán)外泌體的分析很方便，但外泌體的最終臨床應(yīng)用仍處于初步階段，需要更多研究來(lái)驗(yàn)證。

3 液體活檢在MBC診療中的臨床應(yīng)用及研究進(jìn)展

3.1CTCs在MBC診療中的應(yīng)用及研究進(jìn)展 在早期乳腺癌中，CTCs可以在大部分患者中被檢測(cè)到，并且被認(rèn)為是微小殘留癌灶的標(biāo)志物以及遠(yuǎn)期MBC的潛在發(fā)生前兆[22]。近幾十年來(lái)，基于CTCs能夠?qū)崟r(shí)反映腫瘤負(fù)荷和轉(zhuǎn)移部位的特性，CTCs已被確定為MBC的一個(gè)強(qiáng)有力的預(yù)后因素，多項(xiàng)研究表明其具有指導(dǎo)治療決策的潛力[23]。除了基于腫瘤細(xì)胞的分析之外，還可以在外周血中常規(guī)檢測(cè)循環(huán)核酸，例如DNA和RNA片段[24]。基于CTCs診斷的主要優(yōu)勢(shì)之一是能夠以非侵入性方式進(jìn)行連續(xù)測(cè)量，提供對(duì)疾病生物學(xué)的實(shí)時(shí)觀察，并可能因此改變治療方案。由于預(yù)測(cè)標(biāo)志物[例如激素和人表皮生長(zhǎng)因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)]狀態(tài)以及新的治療相關(guān)靶點(diǎn)可能會(huì)在疾病過(guò)程中發(fā)生變化，因此液體活檢有可能成為乳腺癌轉(zhuǎn)移情況下侵入性組織檢查的替代方法[25]。在Cellsearch系統(tǒng)中，每7.5 ml血液中檢測(cè)出5個(gè)CTCs作為臨界水平以區(qū)分MBC預(yù)后良好和不良的患者，CTCs>5個(gè)的患者臨床無(wú)進(jìn)展生存期(progression-free survival,PFS)以及總生存期(overall survival,OS)均顯著降低，而且通過(guò)進(jìn)一步治療后復(fù)查CTCs數(shù)值仍較高者的生存期更短，說(shuō)明液體活檢在某種程度上靈敏度是高于常規(guī)影像學(xué)檢查的，而且可以更連續(xù)地對(duì)疾病的發(fā)展及預(yù)后進(jìn)行評(píng)估[26]。最近發(fā)表了2項(xiàng)關(guān)于CTCs在MBC中預(yù)后價(jià)值的大型分析。一項(xiàng)是Cristofanilli等[27]進(jìn)行的匯總分析，對(duì)來(lái)自18個(gè)中心的近2 500例MBC患者的血液樣本進(jìn)行了評(píng)估，其中533例女性患有新發(fā)轉(zhuǎn)移性癌癥，Cellsearch系統(tǒng)用于CTCs檢測(cè)結(jié)果顯示，CTCs升高的患者往往顯示更差的預(yù)后(OS：CTChighvs CTClow為16個(gè)月 vs 36.3個(gè)月)，而且轉(zhuǎn)移部位與乳腺癌分型無(wú)明顯關(guān)聯(lián)。在患有新發(fā)轉(zhuǎn)移性疾病的MBC患者中，升高的CTCs計(jì)數(shù)也與較短的OS相關(guān)(18.7個(gè)月 vs 41.4個(gè)月)。而且CTCs是MBC多變量分析中最強(qiáng)的OS預(yù)測(cè)因子(HR=2.71，95%CI：2.35～3.12)。另一項(xiàng)是由Müller等[28]建立的DETECT研究小組對(duì)1 933例MBC患者的血液樣本進(jìn)行了分析，這項(xiàng)試驗(yàn)是全球最大的基于CTCs的治療干預(yù)的研究項(xiàng)目，旨在指導(dǎo)CTCs在MBC靶向治療中的臨床應(yīng)用。在DETECT Ⅲ期試驗(yàn)中，HER2陰性和HER2陽(yáng)性的患者被隨機(jī)分配接受標(biāo)準(zhǔn)治療加用或不加用拉帕替尼抗HER2治療；HER2陰性患者參加DETECT Ⅳa期和Ⅳb期研究，證實(shí)了CTCs計(jì)數(shù)在MBC中的高度預(yù)后相關(guān)性。結(jié)果顯示1個(gè)CTC和5個(gè)CTCs作為臨界值時(shí)均與患者中位OS顯著相關(guān)(≥1個(gè)CTCs患者的中位OS 15.5個(gè)月 vs CTCs陰性患者的中位OS 37.2個(gè)月；≥5個(gè)CTCs患者的中位OS 12.0個(gè)月 vs <5個(gè)CTCs患者的中位OS 28.6個(gè)月)。還有試驗(yàn)表明CTCs可以作為指導(dǎo)雌激素受體(estrogen receptor，ER)陽(yáng)性乳腺癌患者一線治療的生物標(biāo)志物[29]。在激素受體陽(yáng)性MBC患者中也觀察到不同的臨床癥狀，這取決于存在的CTCs數(shù)量[30]。此外，即使在乳房手術(shù)后5年內(nèi)，在沒有活動(dòng)性疾病證據(jù)的患者中CTCs水平較高者5年內(nèi)復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)也較高[31]。由于大多數(shù)患者在全身治療期間CTCs計(jì)數(shù)均減少，因此對(duì)CTCs計(jì)數(shù)水平進(jìn)行持續(xù)性檢測(cè)有助于識(shí)別并篩選出對(duì)于當(dāng)前治療反應(yīng)不佳的患者，可以幫助患者規(guī)避低效且有副作用可能較大的藥物，或者改用其他有效的治療方案。SWOG S0500試驗(yàn)[32]對(duì)此進(jìn)行了論證。在這項(xiàng)研究中，在開始一線化療治療之前，取595例MBC患者的血樣測(cè)量了CTCs指標(biāo)并記錄，在進(jìn)行了第1個(gè)周期治療后取得了第2份血樣。持續(xù)高CTCs計(jì)數(shù)的患者被隨機(jī)分配至繼續(xù)治療，直至臨床進(jìn)展期(標(biāo)準(zhǔn)組)或切換到另一種化療方案(對(duì)照組)。結(jié)果顯示CTCs數(shù)量較低的患者具有更好的臨床結(jié)果(中位OS為35個(gè)月)，但兩組CTCs數(shù)量持續(xù)較高的患者的預(yù)后相似。因此，一線化療1個(gè)周期后CTCs未減少的MBC患者改用替代化療方案既沒有改善OS，也沒有改善PFS。但是值得注意的是，在此研究中CTCs數(shù)量較低的患者預(yù)后良好，激素受體陽(yáng)性和HER2陽(yáng)性患者的中位OS超過(guò)3年。即使是三陰性乳腺癌患者，其中位生存期也接近2年[33]。考慮到患者更有可能從免疫、靶向或試驗(yàn)性治療中受益，筆者建議在1個(gè)化療周期后發(fā)現(xiàn)CTCs增加的患者，應(yīng)在疾病進(jìn)展期間積極考慮參加新型治療藥物的試驗(yàn)，而不是繼續(xù)進(jìn)行第2周期或者替代的化療。近期亦有一項(xiàng)研究(CirCe01試驗(yàn))旨在評(píng)估基于CTCs的監(jiān)測(cè)在MBC中的臨床效用[34]，雖然此研究規(guī)避了SWOG S0500試驗(yàn)的不足以及局限性，并在這項(xiàng)隨機(jī)Ⅲ期研究中探索了三線方案，以避免重新選擇化療方案。但是該研究最終亦未能得到理想的結(jié)果，可能是因?yàn)榛贑TCs的監(jiān)測(cè)組中的患者沒有獲得更長(zhǎng)的OS，還有患者對(duì)于基于CTCs的治療轉(zhuǎn)換方案的接受度較低以及招募人數(shù)不足等。最近的一項(xiàng)研究證明了CTCs數(shù)據(jù)在臨床決策中的效用，不僅考慮了CTCs的數(shù)量，而且還考慮了CTCs的表型[9]。但是關(guān)于臨床上MBC患者如何從CTCs監(jiān)測(cè)中獲益，仍然需要進(jìn)一步的研究證實(shí)。

3.2ctDNA在MBC診療中的應(yīng)用及研究進(jìn)展

2019年，在中國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)《乳腺癌診療指南》中首次指出CTCs和ctDNA可以作為循環(huán)腫瘤標(biāo)志物預(yù)測(cè)早期和晚期乳腺癌預(yù)后的價(jià)值[35]。正如前文所述，多項(xiàng)大型研究及后期的薈萃分析均證實(shí)了CTCs在MBC中的預(yù)后意義，但是涉及到ctDNA在MBC中的診療價(jià)值尚需大量臨床數(shù)據(jù)支持。迄今為止，只有少數(shù)研究評(píng)估了ctDNA在MBC中的預(yù)后意義。Shaw等[36]比較了112例MBC患者的CTCs和ctDNA的突變譜，通過(guò)檢測(cè)磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸3-激酶催化亞基α(phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinasecatalytic subunit alpha,PIK3CA)、鼠類肉瘤病毒癌基因(kirsten rat sarcoma viral oncogene,KRAS)、腫瘤蛋白53(tumor protein 53,TP53)和雌激素受體1(estrogen receptor 1,ESR1)基因的突變與升高的ctDNA水平，發(fā)現(xiàn)二者均與MBC明顯縮短的OS相關(guān)，并且ctDNA和CTCs中的突變譜是一致的。Tan等[37]對(duì)10項(xiàng)試驗(yàn)的薈萃分析僅包括1 127例患者，高水平的cfDNA和外周血中存在ctDNA與乳腺癌患者的不良預(yù)后顯著相關(guān)。而且與高水平的cfDNA相比，ctDNA的檢測(cè)可以更有效地預(yù)測(cè)生存結(jié)果。按樣本來(lái)源分類的進(jìn)一步亞組分析表明，cfDNA可以作為乳腺癌患者的預(yù)測(cè)和預(yù)后標(biāo)志物。按腫瘤分期分類的亞組分析表明，cfDNA適用于乳腺癌患者的早期和轉(zhuǎn)移期。在Fernandez-Garcia等[38]的研究中，對(duì)來(lái)自194例MBC患者的血液樣本進(jìn)行了CTCs計(jì)數(shù)、cfDNA水平和腫瘤標(biāo)志物癌胚抗原153(carcino-embryonic antigen 153,CA153)的分析。結(jié)果顯示高水平的cfDNA與較短的OS顯著相關(guān)，總體cfDNA水平與CTCs計(jì)數(shù)相關(guān)。有研究表明ctDNA水平實(shí)際上可能在治療開始后的最初幾天短暫增加，這可能是由于腫瘤細(xì)胞死亡增加導(dǎo)致ctDNA脫落增加。然而，在對(duì)治療有反應(yīng)的患者中，ctDNA水平通常在1～2周后急劇下降[39]。還有研究證實(shí)，ctDNA水平的最終上升可能出現(xiàn)在影像學(xué)進(jìn)展之前數(shù)周至數(shù)月，這表明ctDNA跟蹤可以作為一種潛在的臨床工具，用于評(píng)估患者發(fā)生耐藥的可能性，并且可以結(jié)合當(dāng)前臨床監(jiān)測(cè)方法，為后續(xù)治療贏取更多的準(zhǔn)備時(shí)間。2020年P(guān)ierga等[40]報(bào)道了前瞻性UCBG COMET試驗(yàn)的結(jié)果，對(duì)196例HER2陰性MBC患者在化療前和第1周期結(jié)束后的ctDNA水平進(jìn)行分析，并通過(guò)靶向重測(cè)序檢測(cè)了幾種體細(xì)胞突變，即TP53、PIK3CA、ESR1和HER2。結(jié)果顯示，血漿中的TP53突變會(huì)影響MBC患者的PFS和OS，而PIK3CA和ESR1突變對(duì)患者的生存預(yù)后沒有影響。此外，在第2周期化療前可檢測(cè)到ctDNA的患者OS顯著縮短?？傊?，越來(lái)越多的證據(jù)表明ctDNA在MBC中具有預(yù)后影響。然而，由于各試驗(yàn)的設(shè)計(jì)思路以及驗(yàn)證方法不同，所以目前直接進(jìn)行各試驗(yàn)之間的比較和匯總還是有一定難度的。

4 小結(jié)及展望

近年來(lái)，液體活檢作為精準(zhǔn)醫(yī)療的一種新方法，重視基于個(gè)人基因組、環(huán)境和生活習(xí)慣的個(gè)體化治療，尤其是當(dāng)實(shí)體組織活檢不足或無(wú)法獲得時(shí)，液體活檢可以為惡性腫瘤的診療提供強(qiáng)有力的輔助。除了預(yù)測(cè)作用之外，液體活檢可能是全面的腫瘤基因分型、識(shí)別緊急耐藥機(jī)制、監(jiān)測(cè)微小殘留病灶、早期檢測(cè)和癌癥攔截的有用工具。隨著臨床上精準(zhǔn)治療理念的深入，乳腺癌的治療方案亦逐年優(yōu)化。對(duì)于外科醫(yī)師來(lái)說(shuō)，圍手術(shù)期循環(huán)腫瘤標(biāo)志物的變動(dòng)分析可以早于常規(guī)影像學(xué)診斷去指導(dǎo)臨床更快速地完善現(xiàn)行的乳腺癌治療方案，最終幫助患者得到更好的治療結(jié)果[41]。目前新循環(huán)生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)和驗(yàn)證仍處于起步階段，雖然多種生物標(biāo)志物整合分析可以為臨床醫(yī)師提供更全面的診療思路，但是仍需要大量的循證醫(yī)學(xué)研究證據(jù)來(lái)支持。相信在不久的將來(lái)，隨著越來(lái)越多的相關(guān)研究結(jié)果的公開，液體活檢技術(shù)在MBC以及其他惡性腫瘤的診治中定能發(fā)揮出更大的作用。