藍(lán)建榮，黃杰豪，黃石連，李錦旋，田 凱，劉 青，吳健雄，鄭 麗

（1.仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院植物健康創(chuàng)新研究院/仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院/廣東省普通高校果蔬病蟲害綠色防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510225；2.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部南亞熱帶果樹生物學(xué)與遺傳資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣東省熱帶亞熱帶果樹研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510640；3.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院廣州實(shí)驗(yàn)站，廣東 廣州 510140）

【研究意義】西瓜是世界十大水果之一，我國是世界上最大的西瓜生產(chǎn)國［1］。然而，為了保持我國西瓜產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益，長期連續(xù)單作使種植西瓜的土壤肥力下降，微生物群落結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，并在全國范圍內(nèi)引起嚴(yán)重的土傳病害［2］。由尖孢鐮刀菌引起的西瓜枯萎?。‵usarium oxysporumf.sp.niveum，F(xiàn)ON）是影響西瓜產(chǎn)量最具破壞性的土傳病害［3］，該病原體在土壤中的長期存在以及變異種的不斷進(jìn)化使枯萎病的防控變得十分困難［4］。與此同時，化肥的過度使用導(dǎo)致農(nóng)藥殘留超標(biāo)、病蟲抗藥性上升［5］；土傳病害發(fā)生嚴(yán)重導(dǎo)致植株早衰、產(chǎn)量降低［6-7］；土壤微生態(tài)系統(tǒng)發(fā)生改變，微生物區(qū)系破壞異常，成為當(dāng)前限制西瓜產(chǎn)業(yè)發(fā)展的最大瓶頸［8］。如何降低土傳病害帶來的經(jīng)濟(jì)損失，減少化肥在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的使用是目前亟需解決的重要難題之一。

【前人研究進(jìn)展】植物病害生物防治是利用有益微生物及其代謝物，對農(nóng)作物病害進(jìn)行有效防控的方法與技術(shù)［9］。通過改變土壤中微生物的營養(yǎng)環(huán)境、優(yōu)化微生物群落結(jié)構(gòu)、提高土壤中微生物多樣性而達(dá)到抑制枯萎病菌侵染植株，達(dá)到降低枯萎病發(fā)生的目的［10］。輪作和間套作、環(huán)境調(diào)控、物理、化學(xué)防治作為目前防治土傳病害的主推方向［11-12］，但隨著社會對抗藥性、環(huán)境安全等問題的重視，使得尋找對環(huán)境、生態(tài)和人類健康安全的西瓜枯萎病防治方法迫切需要，生物防治應(yīng)運(yùn)而生［13］。利用生防菌株的發(fā)酵液及其分泌抗菌物質(zhì)、溶菌作用、誘導(dǎo)植物抗病性，如“多抗霉素”對大蔥紫斑病的防治效果大于化學(xué)農(nóng)藥“百菌清”［14］，生防芽孢桿菌類殺菌劑由于能夠有效控制植物病害，同時具有對人畜安全、環(huán)境相容性好、植物病原菌不易產(chǎn)生抗性、生產(chǎn)成本相對低廉等優(yōu)點(diǎn)，必將在現(xiàn)代農(nóng)業(yè)中有廣闊的應(yīng)用前景，并產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟(jì)、社會和生態(tài)效益［15］。

【本研究切入點(diǎn)】研究表明利用有益微生物進(jìn)行復(fù)配，將不同生防菌作用機(jī)制間的差異實(shí)現(xiàn)優(yōu)勢互補(bǔ)，通過協(xié)同作用形成有益微生物菌群在土壤中的良性循環(huán)，可達(dá)到對作物連作障礙中土傳病害的有效控制［16］。如放線菌混合菌劑［17］，哈茨木霉Tr6 與假單孢桿菌Ps14 復(fù)配菌劑［18］，哈茨木霉和羅氏鏈霉菌［19］，復(fù)合菌劑PB12 與AR99［20］，熒光假單胞菌和根瘤菌的復(fù)合菌劑［21］對不同農(nóng)作物真菌性病害都有較好的防治效果。前期獲得5 株有益微生物，進(jìn)行兩菌、三菌、四菌和五菌復(fù)配，共計獲得31 個生防菌組合。分別分析31 個組合對西瓜枯萎病菌的平板頡頏效果、對西瓜種子萌發(fā)和苗床出苗以及盆栽枯萎病的防效，擬初步確定有效的生防菌組合?！緮M解決的關(guān)鍵問題】明晰生防菌組合的室內(nèi)和盆栽作用效果；找尋2～3 種有效的生防菌組合，為后續(xù)開展生防菌組合的防病機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試菌株來源 生防菌株為分離自荔枝不同生境的Bacillus amyloliquefaciens23（PP19）、Exiguobacterium acetylicum25（SI17）、B.pumilus28（PI26），以及來自南京農(nóng)業(yè)大學(xué)郭堅華教授課題組的菌株B.licheniformis37（分離自黃瓜生境，HS10）和B.cereus156（分離自南京某森林土壤，AR156）；病原菌由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生物源農(nóng)藥實(shí)驗(yàn)室蔣春浩副教授提供的西瓜枯萎病菌。

1.1.2 供試生防菌組合 在-80 ℃冰箱中取出實(shí)驗(yàn)用生防菌株23、25、28、37、156，置于LB 平板上活化，28 ℃培養(yǎng)24 h 轉(zhuǎn)接到LB 培養(yǎng)液試管中，28 ℃、200 r/min 培養(yǎng)20 h 作為種子培養(yǎng)液，以1∶500 比例將種子菌液接到LB 培養(yǎng)液中培養(yǎng)24 h。隨后用酶標(biāo)儀檢測OD600，用無菌水將菌液濃度稀釋檢測至統(tǒng)一值為OD600=1.0。將上述獲得的單菌發(fā)酵液按照表1 方法，獲得31 個生防菌組合。本方法主要參照文獻(xiàn)［22］。

表1 復(fù)合菌劑配置方法Table 1 Configuration method of compound microbial agents

1.1.3 供試病原菌 病原菌使用PDA 平板、置于28 ℃恒溫培養(yǎng)7～10 d。病原菌分生孢子懸浮液制備方法為：取250 mL 三角瓶，加入50 mL PDA液體，滅菌，向三角瓶中接種2～3 個直徑為5 mm的FON 菌餅，28 ℃、180 r/min 振蕩培養(yǎng)7～10 d，將滅菌茶葉漏篩置于150 mL 滅菌的三角瓶上，過濾菌絲，濾液在4 ℃、8 000 r/min 離心15 min，去掉濾液，將孢子用同體積無菌水重懸浮，取1 μL 于載玻片上顯微鏡觀察計數(shù)100 個左右為佳，用無菌水調(diào)整分生孢子懸浮液濃度為1×106孢子/mL 備用。

1.1.4 供試植物 供試西瓜品種為玲瓏（采購于湖南北盟種業(yè)有限責(zé)任公司），西瓜盆栽實(shí)驗(yàn)在廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所龍眼課題組的試驗(yàn)園某露天平臺種植完成，西瓜種子于2021 年3 月20 日播種育苗，于4 月12 日移栽到塑料盆缽；按照常規(guī)方法進(jìn)行管理，主要使用生升控緩釋肥和生升有機(jī)水溶肥（廣州生升農(nóng)業(yè)股份有限公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 生防菌組合的平板頡頏活性測定 采用平板對峙方法，將活化后的西瓜枯萎病菌FON 用滅菌后的打孔器從菌落的外邊緣均勻打成直徑為5 mm 的圓形菌塊。將菌塊接種在PDA 培養(yǎng)基中心，在培養(yǎng)基中心四個方位距離約27 mm 處接種10 μL 生防菌組合，28℃培養(yǎng)10 d，待對照菌長滿整個平板后，十字交叉法記錄病原菌直徑大小。每個處理3 次重復(fù)。

1.2.2 生防菌組合的VOCs 平板頡頏活性測定采用分隔平板培養(yǎng)法，制備PDA 分隔平板（直徑9 cm），每皿培養(yǎng)基用量為15 mL，每分隔7.5mL。分隔板一邊均勻涂布各組合50 μL，另一邊中心接種病原菌菌塊，28 ℃培養(yǎng)10 d，待對照菌長滿整個平板后，記錄病原菌直徑大小。每個處理3 次重復(fù)。

1.2.3 生防菌組合互作類型分析 取10 mL 離心管，加入PDA 培養(yǎng)液，如表2 所示。設(shè)置A、B 兩種處理方式，分別將31 個組合生防菌劑按以下處理方式加入離心管中，處理A：0.4 mL 生防菌組合；處理B：0.4 mL 生防菌組合和0.4 mL病原菌分生孢子液懸浮液（終濃度1×105CFU/mL），對照則加入0.4 mL 病原菌分生孢子液懸浮液和PDA 培養(yǎng)液；置于28 ℃、180 r/min 振蕩培養(yǎng)48 h，采用酶標(biāo)儀測定其OD600并記錄數(shù)據(jù)。每個處理6 個生物學(xué)重復(fù)，2 個技術(shù)重復(fù)。

表2 菌-菌互作的培養(yǎng)方法Table 2 Culture method for the interaction of different bacteria

參照文獻(xiàn)［22］，設(shè)復(fù)合菌劑的平均促進(jìn)作用強(qiáng)度MIF=lg（CPi/MPi），其中CPi為復(fù)合菌劑液體培養(yǎng)48 h 后的OD600，MPi為組成該復(fù)合菌劑的各菌劑單獨(dú)培養(yǎng)48 h 后OD600的平均值。當(dāng)MIF＞0 時，表示該菌劑交互表現(xiàn)為便利型；當(dāng)MIF=0 時，表示該菌劑交互表現(xiàn)為中立型；當(dāng)MIF＜0 時，表示該菌劑交互表現(xiàn)為頡頏型。

1.2.4 生防菌組合對西瓜種子萌發(fā)的影響測定西瓜玲瓏種子40 ℃烘20 min，放入55 ℃溫水，輕輕攪拌15 min，水溫自然降至30 ℃，浸種3～4 h。撈出種子，用1%次氯酸鈉浸泡10 min，無菌水沖洗3 次。隨后31 個生防菌組合分別菌懸液浸泡30 min，放在9 cm 的無菌玻璃培養(yǎng)皿（底下墊上滅菌濾紙，加上15 mL 滅菌水濕潤濾紙）催芽。每個處理3 次重復(fù)，每個重復(fù)10 粒種子。36～72 h 分別記錄種子發(fā)芽率。試驗(yàn)設(shè)3 個處理：A 為31 個組合的菌懸液（OD600=0.1），B 為百菌清（1∶500），C 為無菌水。A 處理的方法為：將5 個單菌的發(fā)酵液在4 ℃、8 000 r/min 離心15 min，去掉上清液，滅菌水重懸浮菌體（滅菌水體積一般先加入發(fā)酵液體積的一半，保證菌體濃度），酶標(biāo)儀檢測菌懸液的OD600，用滅菌水調(diào)整到OD600=1.0，各個組合菌懸液制備方法同1.1.3，使用時將各個組合的菌懸液稀釋10 倍（即OD600=0.1）。

1.2.5 生防菌組合對西瓜子葉出土的影響測定將1.2.4 中已催芽的西瓜種子播種到90 孔育苗穴盤，1 個組合1 個穴盤，3 個重復(fù)小區(qū)，每小區(qū)24～30 株苗（根據(jù)種子萌發(fā)決定）。將西瓜的胚根朝下播種在育苗盤中育苗盤打孔深度1.5 cm 左右，播種完成后用育苗基質(zhì)覆蓋，隨后將各個處理進(jìn)行噴霧處理。5 d 記錄子葉出土率。設(shè)3 個處理：A 為31 個組合的菌懸液（OD600=0.1）；B 為百菌清（1∶500）；C 為無菌水。菌懸液制備方法同1.1.3。

1.2.6 生防菌組合對盆栽西瓜枯萎病的效果測定將1.2.5 培育的西瓜苗（30 d）進(jìn)行移栽。將基質(zhì)土（廣州生升農(nóng)業(yè)股份有限公司）澆水保持濕潤，裝入塑料種植袋，挑選健康壯苗進(jìn)行移栽，露天條件下進(jìn)行培育。每個處理3 次重復(fù)，每個重復(fù)4 株西瓜苗。移栽1 d 和10 d 后，分別將各個處理進(jìn)行灌根25 mL。試驗(yàn)設(shè)3 個處理：A 為31 個組合的菌懸液（OD600=0.1），制備方法同1.1.3，使用時將各個組合的菌懸液稀釋10 倍；B 為百菌清（1∶500）；C 為無菌水。西瓜苗移栽20 d 和30 d 后，分別灌根接種西瓜枯萎病菌的分生孢子懸浮液（1×105CFU/mL）50 mL；接種病原菌后18 d 調(diào)查西瓜植株枯萎病的發(fā)病率。

抑菌率（%）=〔（對照病原菌直徑－處理病原菌直徑）/對照病原菌直徑〕×100

發(fā)病率（%）=〔（病株數(shù)）/總株數(shù)〕×100

防治效果（%）=〔（對照發(fā)病率－處理發(fā)病率）/對照發(fā)病率〕×100

利用DPS 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)對抑菌率、種子萌發(fā)率、子葉出土率和病害防效等數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA），并用LSD Text 比較不同處理間各項指標(biāo)的差異，相關(guān)繪圖采用GraphPad Prism 8.0 進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 生防菌組合對西瓜枯萎病菌的頡頏效果分析

在平板對峙實(shí)驗(yàn)中，31 個組合的抑菌率范圍為-1.04%～68.06%，其中30 個組合能顯著抑制枯萎病菌的生長，抑菌效果較好的為組合28（23+28+37+156）、19（23+28+27）、26（23+25+28+37）、27（23+25+28+156）、31（23+25+28+37+156），對西瓜枯萎病菌的抑菌率分別為68.1%、65.3%、61.1%、61.1%；組合25（28+37+156）不影響西瓜枯萎病菌菌絲生長（圖1A、C）。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，單菌、雙菌組合、三菌組合、四菌組合和五菌組合的抑菌率范圍分別為10.88%～59.26%、3.70%～59.49%、-1.04%～65.05%、22.92%～68.06%、60.88%（圖1B）。隨著組合的單菌數(shù)量增多，呈現(xiàn)組合菌抑菌效果增強(qiáng)的趨勢。

圖1 31 個組合菌對西瓜枯萎病菌生長的頡頏作用（處理后10 d）Fig.1 Antagonistic effects of 31 combinations on the growth of the pathogen FON in vitro（10 d after treatment）

2.2 生防菌組合的菌源VOCs 對西瓜枯萎病菌的頡頏效果分析

分隔平板對峙實(shí)驗(yàn)顯示，31 個組合的抑菌范圍為-7.86%～41.6%，其中25 個組合均顯著抑制病原菌生長。抑菌效果較好的為組合13（28+37）、8（23+37）、13（28+37）、19（23+28+37），抑菌率均大于10%；組合16（23+25+28）、18（23+25+156）、25（28+37+156）、26（23+25+28+37）、30（25+28+37+156）、31（23+25+28+37+156）不影響西瓜枯萎病菌的菌絲生長（圖2A、C）。單菌、雙菌組合、三菌組合、四菌組合和五菌組合的抑菌率范圍分別為5.03%～7.86%、1.57%～41.6%、-5.66%～10.06%、-1.57%～6.09%、-7.86%。隨著單菌數(shù)量的增多，組合的抑菌效果減弱?？傮w而言，菌源VOCs 的平板頡頏效果表現(xiàn)不顯著（圖2B）。

圖2 31 個組合的菌源VOCs 對西瓜枯萎病菌菌素菌絲生長的效果（處理后10 d）Fig.2 Antagonistic effects of 31 combinations on the growth of FON by VOCs in vitro（10 d after treatment）

2.3 生防菌組合互作類型分析

在生防菌互作分析結(jié)果（圖3A）中，26 個組合中有21 個組合交互類型表現(xiàn)為便利型，5 個組合交互類型表現(xiàn)為頡頏型。平均促進(jìn)作用強(qiáng)度最強(qiáng)的5 個組合依次為組合22（25+28+37）、組合10（25+28）、組合8（23+37）、組合17（23+25+37）和組合31（23+25+28+37+156），對應(yīng)的MIF 值分別為0.176、0.157、0.153、0.15和0.119。5 個頡頏型組合分別為組合9（23+156）、組合12（25+156）、組合13（28+37）、組 合14（28+156）和組合18（23+25+156），對應(yīng)的MIF 值為-0.02、-0.006、-0.02、-0.081 和-0.029。

在生防菌組合與病原菌的互作分析結(jié)果（圖3B）中，31 個組合中有21 個組合與病原菌的交互類型表現(xiàn)為頡頏型，10 個組合交互類型表現(xiàn)為便利型。其中，對病原菌平均拮抗強(qiáng)度最強(qiáng)的5 個組合依次為組合1（23）、組合6（23+25）、組合9（23+156）、組合18（23+25+156）和組合19（23+28+37），對應(yīng)的MIF 值為-0.164、-0.137、-0.096、-0.054、-0.047；對病原菌平均促進(jìn)強(qiáng)度最強(qiáng)的5 個組合依次為組合3（28）、組合12（25+156）、組合10（25+28）、組合20（23+28+156）和組合27（23+25+28+156），對應(yīng)的MIF 值為0.029、0.018、0.018、0.014 和0.13。

圖3 生防菌-生防菌與生防菌組合-病原菌互作類型分析（處理后48 h）Fig.3 Analysis of interaction types between biocontrol agent-biocontrol agent and biocontrol agent combination-the pathogen（48 h after treatment）

綜上可知，絕大部分生防菌之間互作類型多為便利型（如菌株25、28），它們的MIF 多為正值，且強(qiáng)度高于多數(shù)組合（如組合9、11、12）的拮抗作用。在復(fù)合菌劑與病原菌的互作類型分析中，絕大多數(shù)組合（如組合1、6、9）與病原菌的交互類型表現(xiàn)為頡頏型，且其拮抗作用強(qiáng)度高于多數(shù)便利型組合（如組合3、10、12）的促進(jìn)作用。

2.4 生防菌組合對西瓜種子萌發(fā)的影響

31個組合預(yù)浸泡處理西瓜種子，影響種子萌發(fā)速率。處理后3 d，種子萌發(fā)率為80%～90%，萌發(fā)率達(dá)9 0%的有組合1 5（3 7+1 5 6）、2 3（25+28+156）、28（23+28+37+156）、29（23+25+37+156）、33（無菌水）。萌發(fā)率小于80%的有組合11（25+37）、19（23+28+37）、21（23+37+156）、25（28+37+156）。其中組合29（23+25+37+156）的萌發(fā)率最高，萌發(fā)率最低的為組合21（23+37+156）、25（28+37+156）。組合11（2 5+3 7）、1 9（23+28+37）、21（23+37+156）、25（28+37+156）種子萌發(fā)率顯著低于對照，且組合11（25+37）發(fā)芽數(shù)最少；其余生防菌組合與對照差異不顯著（圖4A）。我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，單菌、雙菌組合、三菌組合、四菌組合和五菌組合的種子萌發(fā)率范圍分別為80.0%～85.56%、77.78%～90.00%、76.67%～91.11%、86.67%～96.67%、84.44%（圖4B）?？梢婋S著單菌數(shù)量增加，種子萌發(fā)率無顯著差異，單菌組合、四菌組合的萌發(fā)率相對比較集中，兩菌組合分布比較分散，四菌組合催芽的情況比較好。

圖4 生防菌組合預(yù)處理對西瓜種子萌發(fā)的影響（處理后3 d）Fig.4 Effects of 31 combinations on watermelon seed germination（3 d after treatment）

2.5 生防菌組合對西瓜子葉出土的影響

隨著時間推移，子葉出土越來越多。處理后5 d 子葉出土率為：組合1（23）全部出土，且有17 個組合每處理平均出土在19 株以上、16 個處理的種子出土平均數(shù)量在19 株。其中組合26（23+25+28+37）較差，每處理僅10 株西瓜苗出土（圖5A）。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，單菌、雙菌組合、三菌組合、四菌組合和五菌組合的子葉出土率范圍分別為87.50%～97.23%、66.67%～95.83%、45.80%～94.43%、44.43%～75.00%、72.20%（圖5B）。隨著單菌數(shù)量增加，子葉出土率有所下降。不同數(shù)量生防菌組合的子葉出土情況不同，單菌組合子葉出土率較高且集中，四菌組合子葉出土率最低，分散程度較大的為三菌組合。

圖5 生防菌組合對西瓜子葉出土率的影響（處理后5 d）Fig.5 Effects of 31 combinations on the germination rates of watermelon cotyledons（5 d after treatment）

2.6 復(fù)合生防菌劑對西瓜枯萎病的防效

盆栽試驗(yàn)結(jié)果顯示，接種西瓜枯萎病菌18 d，各個生防菌組合處理的瓜苗發(fā)病率存在差異，組合22、13、26 的發(fā)病率最低，分別為25%、27.8%和27.8%（圖6A）；單菌組合平均發(fā)病率較高，以三菌組合的分布相對均勻（圖6B）。與對照相比，發(fā)現(xiàn)31 個生防菌組合對盆栽西瓜枯萎病的防效范圍為-25.0%～62.5%，化學(xué)藥劑百菌清的防效為31.47%，14 個組合的防效均大于化學(xué)農(nóng)藥，但處理后23 d 發(fā)現(xiàn)百菌清和對照的瓜苗基本全部發(fā)病（數(shù)據(jù)未呈現(xiàn)）。生防效果最好的為組合22；防效大于50%的有組合22、13、26、17、19，分別為61.13%、61.10%、57.43%、57.40%、53.67%（圖6C）。進(jìn)一步分析31 個組合按單菌組合、雙菌組合、三菌組合、四菌組合、五菌組合的數(shù)據(jù)分布，發(fā)現(xiàn)防效分別分布在0.0%～37.5%、18.75%～40.63%、29.17%～47.92%、25.0%～37.5%、12.5%，其中三菌組合復(fù)配的效果最好（圖6D）。

圖6 復(fù)合生防菌處理對西瓜枯萎病的防治效果（處理后18 d）Fig.6 Control effects of compound biocontrol agents on watermelon Fusarium wilt（18 d after treatment）

3 討論

西瓜的連年種植打破了根際微生物群落原有的平衡，使得細(xì)菌群落多樣性下降而真菌群落多樣性上升，病原真菌相對豐富度增加最終導(dǎo)致西瓜枯萎病暴發(fā)，產(chǎn)量降低［23］。故如何減少土壤中病原菌數(shù)量顯得尤為重要。有報道放線菌［24］、芽孢桿菌［25］等生防菌對多種植物病害表現(xiàn)生防效果，但大多單一菌株的生防效果持效性差、作用譜窄，且對環(huán)境的依賴性較強(qiáng)［26］，在防治植物病害上效果較不理想。本試驗(yàn)的組合2（Exiguobacterium acetylicum25）在平板頡頏中，其菌和菌源VOCs 對枯萎病菌的抑菌率分別為59.72%和4.72%，但在盆栽試驗(yàn)中無防效，推測單一菌株發(fā)揮的生防效果可能更易受到外界因素干擾，即當(dāng)土壤溫度、濕度和養(yǎng)分等環(huán)境因素不利于生防菌定殖擴(kuò)增時，其對抗病原菌的能力也會大幅降低，這與上述報道［23］一致。

通常情況下，物種多樣性高，微生物群落功能增強(qiáng)，抗病能力也增強(qiáng)?？梢酝ㄟ^單菌進(jìn)行復(fù)配增強(qiáng)生防特性，優(yōu)勢互補(bǔ)，抵御病原菌入侵。故通過合理設(shè)計可預(yù)測抗病能力的合成群落（Synthetic Community，SynComs）對于提高植物抗病能力非常關(guān)鍵［27］。在自然土壤中引入不同多樣性的假單胞菌合成菌群，發(fā)現(xiàn)多樣性高的假單胞菌群落通過加劇資源競爭和干擾性競爭來抑制病原青枯菌入侵［28］。BBS（B.cereusAR156，B.subtilisSM21，andSerratiasp.XY21）處理后甜椒疫病顯著降低［29］，Niu 等［30］采用兩種策略獲得7 株玉米棲居型的簡化菌群，明顯抑制病原菌Fusarium verticillioides在玉米根系的定殖。鄭豆豆等［31］發(fā)現(xiàn)，復(fù)配菌株的各個單菌通過協(xié)同作用，擴(kuò)大抑菌譜。本研究也發(fā)現(xiàn)類似結(jié)果，如三菌組合22（25+28+37）和組合13（28+37）對西瓜枯萎病的防治效果高達(dá)61.1%，其中前者表現(xiàn)正交互作用（便利型組合），后者則為負(fù)交互作用（頡頏型組合）；還發(fā)現(xiàn)防效在30%的組合有16 個，其中11 個組合為頡頏型組合，該數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［22］的研究較為一致，認(rèn)為頡頏型組合更利于防病，可能是這些組合對病原菌具有較好的抑菌效果。但也存在一個問題，當(dāng)單菌數(shù)量較多，生防效果呈現(xiàn)下降趨勢，如組合30，推測菌株間可能存在營養(yǎng)、空間競爭導(dǎo)致防效下降，但具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。因此，篩選防效西瓜枯萎病的最優(yōu)組合，對于后續(xù)深入研究復(fù)配菌劑防控西瓜病害和連作障礙提供理論基礎(chǔ)。

4 結(jié)論

31 個生防菌組合，四菌組合對FON 表現(xiàn)較好的平板抑菌率分布在22.92%～68.06%范圍，其中組合28（23+28+37+156）的抑菌效果最佳，抑菌率達(dá)68.06%；生防菌組合的菌源VOCs 對FON的頡頏效果差異不顯著，只有組合13（28+37）的菌源VOCs 抑菌效果明顯，抑菌率達(dá)41.6%；多數(shù)生防菌在生長上存在協(xié)同作用，26 個組合中有21 個組合互作類型表現(xiàn)為便利型；生防菌組合與病原菌的生長上存在拮抗作用，31 個組合中有21 個組合與病原菌的交互類型表現(xiàn)為頡頏型；生防菌組合影響西瓜種子萌發(fā)和幼苗出土以及盆栽枯萎病發(fā)生，其中以三菌組合的防效較好，達(dá)到60%左右，并且頡頏型組合更利于發(fā)揮防病效果。選擇合適的單菌數(shù)量組成合成菌群，對于植物病害的防控顯得尤為重要。關(guān)于生防菌組合的防病機(jī)制有待進(jìn)一步研究。