陳云清 王柯尹 鄧敏 陸許貞 鄒卓林

[摘要] 目的 探討槐杞黃顆粒治療肝癌的臨床療效及對MMPs/TIMPs的影響。 方法 選取浙江省嘉興市第一醫(yī)院2018年11月至2020年11月肝癌患者90例，隨機(jī)分為肝癌組、槐杞黃低劑量組、槐杞黃高劑量組，每組各30例，另選取15名健康者設(shè)為對照組。全自動生化儀檢測研究對象ALT、AST、AFP水平，ELISA法檢測血清MMP-2、MMP-9及TIMP-2和TIMP-1含量，觀察各組癥狀改善、生活質(zhì)量評分情況。 結(jié)果 肝癌組、槐杞黃低劑量組、高劑量組ALT、AST、AFP水平逐漸下降，但高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）。肝癌組、槐杞黃低、高劑量組血清MMP-2、MMP-9逐漸降低（P<0.05），但高于對照組（P<0.05），血清TIMP-2和TIMP-1含量逐漸升高（P<0.05），但低于對照組（P<0.05）。高劑量組臨床癥狀改善率為80.00%，明顯高于低劑量組和肝癌組（P<0.05）。槐杞黃高劑量組KPS評分較低劑量組和肝癌組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 槐杞黃顆粒治療肝癌能夠有效改善肝功能，提高臨床療效，可能通過降低MMPs及TIMPs水平相關(guān)，值得臨床廣泛應(yīng)用。

[關(guān)鍵詞] 槐杞黃顆粒;肝癌;療效;MMPs/TIMPs

[中圖分類號] R735.7? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2022）02-0112-04

Observation on the therapeutic efficacy of Huaiqihuang granules on patients with liver cancer and its impacts on MMPs/TIMPs level

CHEN Yunqing? ?WANG Keyin? ?DENG Min? ?LU Xuzhen? ?ZOU Zhuolin

Department of Infectious Disease， the First Hospital of Jiaxing in Zhejiang Province， Jiaxing? ?314000， China

[Abstract] Objective To investigate the clinical efficacy of Huaiqihuang granules on liver cancer and its impacts on matrix metalloproteinases （MMPs）/tissue inhibitors of metalloproteinases （TIMPs）. Methods A total of 90 patients with liver cancer admitted to the First Hospital of Jiaxing in Zhejiang Province from November 2018 to November 2020 were selected. They were randomly divided into the liver cancer group （n=30）， the low-dose Huaiqihuang group （n=30） and the high-dose Huaiqihuang group （n=30）， and another 15 healthy people were selected and set as the control group （n=15）. The levels of alanine transaminase （ALT）， aspartate transaminase （AST） and alpha-fetoprotein （AFP） of the subjects were detected by fully automatic biochemical analyzer， and the contents of MMP-2， MMP-9， TIMP-2 and TIMP-1 in serum were detected by the enzyme linked immunosorbent assay （ELISA） method. The improvement of symptoms and KPS score of quality of life in each group were observed. Results The levels of ALT， AST and AFP in the liver cancer group， the low-dose Huaiqihuang group and the high-dose Huaiqihuang group decreased gradually， which were relatively lower than those in the control group， with statistically significant differences （P<0.001）. Serum MMP-2 and MMP-9 in the liver cancer group， the low-dose Huaiqihuang group and the high-dose Huaiqihuang group decreased gradually （P<0.05）， but increased compared with the control group （P<0.05）. Contents of the serum TIMP-2 and TIMP-1 increased gradually （P<0.05）， but decreased compared with the control group （P<0.05）. The improvement rate of clinical symptoms in the high-dose group was 80.00%， which was significantly higher than that in the low-dose group and the liver cancer group （P<0.05）. The KPS score of the high-dose Huaiqihuang group was higher than those of the low-dose Huaiqihuang group and the liver cancer group， with statistically significant difference （P<0.05）. Conclusion Huaiqihuang granules can effectively improve liver function and clinical efficacy in the treatment of liver cancer， which may be related to decreasing the levels of MMPs and TIMPs. Therefore， it is worthy of wide clinical application.

[Key words] Huaiqihuang granules; Liver cancer; Therapeutic efficacy; Matrix metalloproteinases/tissue inhibitors of metalloproteinases

原發(fā)性肝癌（primary liver cancer，PLC，簡稱肝癌）是常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率呈逐年上升的趨勢[1]，其發(fā)生是一個復(fù)雜的慢性病理過程，肝炎-肝硬化-肝癌被稱為肝癌發(fā)展三部曲，細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）合成與降解失衡，纖維組織大量積聚是肝硬化發(fā)展為肝癌的必經(jīng)階段[2]?；|(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）與其組織抑制劑（tissue inhibitors of matrix metalloproteinases，TIMPs）不僅介導(dǎo)ECM的降解，而且控制腫瘤新生血管形成，影響腫瘤細(xì)胞生長，是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中重要的調(diào)控分子之一[3-4]?；辫近S顆粒的主要成分為槐耳菌質(zhì)，具有抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫平衡等功效，目前已被應(yīng)用于肺癌、胃腸癌等多種腫瘤性疾病中[5-6]。本研究旨在通過觀察不同劑量槐杞黃顆粒治療肝癌患者的臨床療效及MMPS/TIMPS含量變化，探討槐杞黃顆粒在對肝癌防治中發(fā)揮的作用及其相關(guān)機(jī)制，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇嘉興市第一醫(yī)院2018年11月至2020年11月90例肝癌患者，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為肝癌組、槐杞黃低劑量組、槐杞黃高劑量組，每組各30例，其中肝癌組男14例，女16例，年齡40～69歲，平均（53.9±6.9）歲，肝細(xì)胞肝癌24例，膽管細(xì)胞肝癌6例;槐杞黃低劑量組男12例，女18例，年齡39～69歲，平均（54.0±7.2）歲，肝細(xì)胞肝癌25例，膽管細(xì)胞肝癌5例;槐杞黃高劑量組，男14例，女16例，年齡40～71歲，平均（54.4±7.8）歲，肝細(xì)胞肝癌26例，膽管細(xì)胞肝癌4例，參照中國抗癌協(xié)會肝癌專業(yè)委員會2001年修訂的分期標(biāo)準(zhǔn)[7]：Ⅰa期4例，Ⅰb期12例，Ⅱa期10例，Ⅱb期20例，Ⅲa期36例，Ⅲb期8例。另選取嘉興市第一醫(yī)院體檢中心經(jīng)體檢合格的健康者（無心、肺、腎等主要臟器疾患，肝腎功能正常）15名，設(shè)為對照組。各組患者在年齡、性別、分型等方面比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。所有患者簽署知情同意書，本研究獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會許可。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)臨床兩種以上影像學(xué)檢查（上腹部B超、CT或MRI）或肝組織穿刺符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范》[8]診斷標(biāo)準(zhǔn)者;②未接受手術(shù)、放化療治療者;③同意參加本研究者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并心臟、肺、腦血管等重大臟器疾病者;②合并其他臟器腫瘤者;③應(yīng)用激素、免疫抑制劑者。

1.2 方法

肝癌組：每天予還原型谷胱甘肽針（山東綠葉制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H20030001，規(guī)格：0.3 g）1.2 g靜滴護(hù)肝，療程15 d;槐杞黃低劑量組：在對癥治療上加用槐杞黃顆粒（啟東蓋天力藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字B2002007），每日2次，每次1袋，口服15 d;槐杞黃高劑量組：對癥治療的基礎(chǔ)上加用槐杞黃顆粒，每日2次，每次2袋，口服15 d。15 d為1個療程，共2個療程。

1.3 觀察指標(biāo)及評價標(biāo)準(zhǔn)

應(yīng)用全自動生化儀（羅氏cobas8000）及其配套試劑檢測研究對象ALT、AST、AFP水平。ELISA法檢測血清MMP-2、MMP-9及TIMP-2和TIMP-1水平，按試劑盒說明書操作，ELISA試劑盒購自杭州聯(lián)科生物公司。采用生活質(zhì)量（KPS）評分法比較各組治療前后體力狀態(tài)，滿分為100 分，分值越高，提示體力狀態(tài)越好，增加>10分定為提高，減少>10分為降低，變化≤10 分穩(wěn)定，研究者均通過一致性檢驗(yàn)，結(jié)果符合要示者?？偺岣呗?（提高+穩(wěn)定例數(shù)）/總例數(shù)×100%[9]。15 d后觀察臨床癥狀改善情況：食欲顯著好轉(zhuǎn)，腹脹基本消失，惡心、嘔吐消失為顯效;食欲有所好轉(zhuǎn)，腹脹好轉(zhuǎn)，惡心嘔吐改善為有效;食欲無好轉(zhuǎn)或下降，腹脹無好轉(zhuǎn)，惡心嘔吐無改善為無效，總有效率=（顯效+有效）例數(shù)/總例數(shù)×100%[10]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0 統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，計量資料以（x±s）表示，計數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，組間比較采用t檢驗(yàn)或單因素方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組ALT、AST、AFP水平比較

肝癌組、槐杞黃低劑量組、高劑量組ALT、AST、AFP水平逐漸下降，但均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）。見表1。

2.2 各組血清MMP-2、MMP-9、TIMP-2和TIMP-1水平比較

肝癌組、槐杞黃低、高劑量組血清MMP-2含量分別為（382.67±10.15）ng/ml，（376.17±8.05）ng/ml、（370.60±6.76）ng/ml，MMP-9含量分別為（277.30±8.61）ng/ml、（251.40±9.78）ng/ml、（244.30±7.63）ng/ml，兩者均逐漸降低（P<0.05），但均高于對照組（P<0.05），肝癌組、槐杞黃低、高劑量組血清TIMP-2和TIMP-1含量逐漸升高（P<0.05），但低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

2.3 各組臨床療效比較

槐杞黃高劑量組臨床癥狀改善總有效率為80.00%，明顯高于低劑量組的53.33%（χ2=4.800，P<0.05），且高于肝癌組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=24.267，P<0.05）。見表3。

2.4 各組生活質(zhì)量（KPS）評分比較

槐杞黃高劑量組用藥前后KPS評分總提高率76.67%，低劑量組總提高率50.00%，肝癌組總提高率為16.67%，槐杞黃高劑量組較低劑量組升高（χ2=4.593，P<0.05），均較肝癌組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=13.157，P<0.05）。見表4。

3 討論

肝癌在生物學(xué)特征上具備腫瘤局部浸潤和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的能力，一方面，在腫瘤生長的過程中，腫瘤細(xì)胞能夠分泌大量血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移，增加毛細(xì)血管數(shù)量，為腫瘤生長提供豐富的營養(yǎng)和血供，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞向周圍組織浸潤，另一方面，腫瘤微環(huán)境中ECM被降解，組織屏障破壞，形成腫瘤細(xì)胞運(yùn)行通道，腫瘤細(xì)胞有效逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視，形成轉(zhuǎn)移灶。MMPs是一類依賴Ca2+、Zn2+等離子作為輔助因子的內(nèi)肽酶，包括膠原酶（collagenases）、明膠酶（gelatinases）、基質(zhì)溶解酶（matrilysins）等6類酶蛋白分子，不僅能降解ECM中的多種膠原蛋白、纖維連接蛋白、彈性蛋白和蛋白聚糖等各種重要組成成分，影響膠原的正常沉積和結(jié)構(gòu)的重塑，促進(jìn)纖維化進(jìn)程，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞沿基底膜缺損向周圍浸潤[11]，還能通過調(diào)節(jié)VEGF受體等影響內(nèi)皮細(xì)胞，刺激腫瘤血管迅速生成，是肝纖維化和各種腫瘤發(fā)生發(fā)展中重要的調(diào)控分子之一[12]。Antonio等[13]的研究顯示，MMP-9的表達(dá)水平在結(jié)直腸癌患者中顯著升高，也有研究提示MMP-2的表達(dá)與胰腺癌、胃癌的侵襲浸潤有密切關(guān)系[14-16]。TIMPs是可抑制MMPs的天然活性制劑，其中TIMP-2和TIMP-1主要對MMP-2、MMP-9進(jìn)行嚴(yán)格調(diào)控，正常情況下，兩者相互作用共同維持機(jī)體內(nèi)ECM穩(wěn)態(tài)，一旦這種平衡被打破，則會影響腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移。

槐杞黃顆粒是由槐耳菌質(zhì)、枸杞子、黃精為主制成的顆粒劑，其中作為主要成分的槐耳菌質(zhì)具有抑制腫瘤細(xì)胞生長和新生血管形成、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能等功效[17]。在通過槐杞黃清膏低、中、高劑量對抑制大鼠腎間質(zhì)纖維化的研究中顯示槐杞黃清膏可通過抑制間質(zhì)肌成纖維細(xì)胞增殖和遷移減少肌成纖維細(xì)胞聚集發(fā)揮抗纖維化作用，且高劑量槐杞黃組對纖維化進(jìn)程影響更為顯著[18]。Li等[19]指出槐杞黃能通過調(diào)節(jié)p-ERK/CHOP信號通路促進(jìn)足細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡，保護(hù)足細(xì)胞免受損傷，在腎纖維化中發(fā)揮重要作用。也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，槐耳能通過抑制MMP-9使乳腺癌患者M(jìn)CF-7細(xì)胞的遷移和侵襲力明顯下降，將槐耳顆粒輔助化療聯(lián)合治療，患者總生存率明顯提高，預(yù)后顯著改善[20-21]。另枸杞子含多糖，能促進(jìn)脾臟T細(xì)胞增殖，調(diào)節(jié)免疫功能，補(bǔ)肝明目，可促進(jìn)肝損傷的修復(fù)和肝細(xì)胞再生[22-23];黃精補(bǔ)氣而兼潤養(yǎng)，抗疲勞抗氧化，發(fā)揮益氣滋陰之功效。

本研究分劑量對臨床上治療肝癌需要多大劑量才能達(dá)到最佳治療效果進(jìn)行探討，結(jié)果顯示，槐杞黃低、高劑量組患者肝功能指標(biāo)、AFP逐漸下降，槐杞黃高劑量組臨床癥狀改善率明顯高于低劑量組，KPS評分槐杞黃高劑量組較低劑量組及肝癌組均有所升高，提示槐杞黃顆?？稍谝欢ǔ潭壬蠝p少肝損傷，改善肝功能，減輕臨床癥狀，肝癌組、槐杞黃低、高劑量組血清中MMP-2、MMP-9逐漸下降，但較對照組均有所升高，血清TIMP-2和TIMP-1含量逐漸升高，但較對照組均降低，提示肝癌患者體內(nèi)存在MMPS/TIMPs失衡，槐杞黃顆?？赡芡ㄟ^調(diào)控MMPS/TIMPs影響細(xì)胞外基質(zhì)降解延緩肝纖維化發(fā)展以及阻斷腫瘤細(xì)胞增殖和遷移，成為控制肝癌浸潤、轉(zhuǎn)移的一個理想途徑。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Duran R，Shanna K，Dreher MR，et al.A novel inherently radio-paque bead for transarterial embolization to treat liver cancer-A pre-clinical study[J].Theranostics，2016，6（1）：28-39.

[2] 中國抗癌協(xié)會肝癌專業(yè)委員會，中國抗癌協(xié)會臨床腫瘤學(xué)協(xié)作專業(yè)委員會，中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會肝癌學(xué)組.原發(fā)性肝癌規(guī)范化診治的專家共識[J].中華肝臟病雜志，2009，17（6）：403-410.

[3] Ning C，Min H，Raouf AK.Chapter one-biochemical and biological attributes of matrix metalloproteinases[J].Prog Mol Biol Transl Sci，2017，147（3）：1-73.

[4] Andrei VC，Nor ES，Albert GR，et al.Epige-netic control of the invasion-promoting MT1-MMP/MMP-2/TIMP-2 axis in cancer cells[J].J Biol Chem，2009，284（19）：12 727-12 734.

[5] Salem AM，Bamosa AO，Qutub HO，et al.Effect of nigella sativa supplementation on lung function and inflammatory mediatorsin partly controlled asthma：a randomized controlled trial[J]. Ann Saudi Med，2017，37（1）：514-521.

[6] 單昌友，刁巖，黃珊，等.槐耳顆粒聯(lián)合新輔助化療對乳腺癌的療效及對P53 Ki-67 MMP-2 MMP-9水平的影響[J].河北醫(yī)學(xué)，2018，24（4）：579-583.

[7] 中國抗癌協(xié)會肝癌專業(yè)委員會.原發(fā)性肝癌的臨床診斷與分期標(biāo)準(zhǔn)（2001年版）[J].中華肝臟病雜志，2001，9（6）：324.

[8] 中華人民共和國衛(wèi)生部.原發(fā)性肝癌診療規(guī)范（2011年版）[J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2011，16（10）：929-946.

[9] Maltoni M，Travaglini C，Santi M，et al.Evaluationg of the cost of home care for terminally ill cancer patients[J].Support Care Cancer，1997，5（5）：396-401.

[10] 石貴榮，王秀珍，郝建功.疏肝健脾湯治療肝癌化療栓塞術(shù)后胃腸反應(yīng)療效觀察[J].中國急救醫(yī)學(xué)，2016，36（11）：106-107.

[11] Thomas CV，Coker ML，Zellner JL，et al.Increa sed ma-trix metalloproteinase activity and selective upregulation in LV myocardium from patients with end-stage dilated car-diomyopathy[J].Circulation，1998，97（17）：1708-1715.

[12] Adnan N，Qiu WP，Mirza A，et al.Matrix metalloproteinases （MMPs） in liver diseases[J].Journal of Clinical and Experimental Hepatology，2017，7（4）：367-372.

[13] Antonio Z，Gimeno G，Javier T，et al.Plasma matrix metalloproteinase 9 as an early surrogate biomarker of advanced colorectal neoplasia Metaloproteinasa 9 como biomarcador plasmático de neoplasia colorrectal avanzada[J]. Gastroenterologiay Hepatologia，2016，39（7）：433-441.

[14] Ting X，Xiu LX，Wen YY.Expression of matrix metalloproteinases-2/-9 is associated with microvessel density in pancreatic cancer[J].Am J Ther，2017，24（4）：431-434.

[15] Ajjan R，Storey RF，Grant PJ.Aspirin resistance and diabetes mellitus[J].Dia Betologia，2008，51（3）：385-390.

[16] Donizy P，Rudno RJ，Kaczorowski M，et al.Disrupted balance of MMPs/TIMPs in gastric carcinogenesis-paradoxical low MMP-2 expression in tumor and stromal compartments as a potential marker of unfavorable outcome[J].Cancer Investig，2015，33（7）：286-293.

[17] Duan SB，Pan P，Xu Q，et al.Preliminary study of Huai Qi Huang granules delay the development of primary glomerular diseases in human[J]. Ren Fail，2014，36（9）：1407-1410.

[18] 蔣金赟，周建華.槐杞黃清膏抑制UU0大鼠腎間質(zhì)纖維化的初步研究[J].中華醫(yī)院藥學(xué)雜志，2015，35（13）：1199-1204.

[19] Li T.Huaiqihuang may protect from proteinuria by resisting mpc5 podocyte damage via targeting P-Erk/Chop Pathway[J].Bosn J Basic Med Sci，2016，16（3）：193-200.

[20] 熊英，朱玉琳，徐旭東.槐耳顆粒聯(lián)合TAC方案化療對三陰性乳腺癌患者術(shù)后免疫功能及預(yù)后的影響[J].國際外科學(xué)雜志，2015，42（9）：608-611.

[21] 周蓉蓉，高鵬飛，張文意，等.槐耳板藍(lán)根雙向發(fā)酵提取物抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞遷移/侵襲及相關(guān)因子的研究[J].中國中醫(yī)藥信息，2016，23（5）：64-68.

[22] 楊玉瑤，韓娟，林鳴，等.槐杞黃顆粒聯(lián)合經(jīng)典方案治療兒童免疫性血小板減少癥的療效觀察[J].中國小兒血液與腫瘤雜志，2016，21（3）：122-126.

[23] 何諧，郝思雨，張宇，等.槐杞黃顆粒治療慢性濕疹的療效及對干擾素-γ、白細(xì)胞介素-4水平的影響[J].中國醫(yī)藥科學(xué)，2021，11（8）：1-5.

（收稿日期：2021-06-02）