高 偉，賈有春，聶紅艷，段新勇，呂俊美，蔣艷瓊

(云南潤(rùn)玉生物技術(shù)有限公司，云南 玉溪 653100)

硒(Se)是人體一種必需微量元素，機(jī)體缺硒會(huì)導(dǎo)致克山病、大骨節(jié)病、肝硬化、慢性類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等多種疾病的發(fā)生, 還會(huì)增加罹患皮膚癌、肺癌、前列腺癌和結(jié)腸癌的風(fēng)險(xiǎn)[1-2]。硒的分布很不均勻，世界上大部分地區(qū)都缺硒， 特別是我國(guó)，超過(guò)70%的地區(qū)硒缺乏[3-4]。天然食品中硒營(yíng)養(yǎng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足我國(guó)居民的需求，通過(guò)富硒食品補(bǔ)充硒營(yíng)養(yǎng)成為最有效的途徑。利用食用菌作為生物載體實(shí)現(xiàn)無(wú)機(jī)硒到有機(jī)硒的生物富硒技術(shù)，將富硒食用菌作有機(jī)硒資源開(kāi)發(fā)富硒食品已成為當(dāng)前的研究熱點(diǎn)[3-4]。研究表明，秀珍菇[4]、平菇[5]、虎掌菌[6]、美味牛肝菌[7]、羊肚菌[7-10]均能有效富集硒元素。

硒元素含量測(cè)定一般采用氫化物原子吸收法[11]、氫化物原子熒光法[12-14]、電感耦合等離子體發(fā)射光譜法[15]，電感耦合等離子體質(zhì)譜法則少有報(bào)道。云南擁有豐富的野生菌資源，也有研究報(bào)道了云南部分野生菌中的硒元素含量[13，16-18]。本文建立了電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)測(cè)定云南幾種野生菌中硒元素含量的方法，并發(fā)現(xiàn)云南野生黃虎掌菌富含硒元素，作為富硒野生菌具有較大的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料與試劑

1.1.1 野生菌樣品

野生菌干品購(gòu)于昆明市野生菌交易市場(chǎng)，經(jīng)有關(guān)專(zhuān)家鑒定確定名稱(chēng)。用旋風(fēng)磨粉碎后過(guò)40目篩備用。

1.1.2 主要試劑

過(guò)氧化氫和濃硝酸，電子級(jí)，購(gòu)自德國(guó)Merck公司；硒元素標(biāo)準(zhǔn)溶液硒(Se，濃度為100 μg/mL)，內(nèi)標(biāo)鍺(Ge，濃度為10 μg/mL)，均購(gòu)自美國(guó)PE公司；去離子水(電阻率≥18.2 MΩ·cm)，實(shí)驗(yàn)室自制。

1.1.3 主要儀器

ELAN DRC電感耦合等離子體質(zhì)譜儀，美國(guó)PerkinElmer；Milli-Q超純水系統(tǒng)，法國(guó)Merck Millipore公司；Multiwave微波消解系統(tǒng)，奧地利Anton Paar公司。

1.2 方 法

1.2.1 樣品前處理

準(zhǔn)確稱(chēng)取樣品0.2000 g到洗凈的聚四氟乙烯消解罐中，加入濃硝酸5.0 mL，25 ℃預(yù)消解8 h，再加入過(guò)氧化氫2.0 mL；反應(yīng)緩和后蓋上消解罐蓋，放入微波消解系統(tǒng)消解；消解結(jié)束后自然冷卻，然后后轉(zhuǎn)移到50 mL聚四氟乙烯容量瓶中，用去離子水定容，即得待測(cè)溶液。以等量濃硝酸和過(guò)氧化氫為空白對(duì)照組，采用同樣方式消解，每種樣品和試劑空白各平行 3次。

1.2.2 儀器條件

采用調(diào)諧液調(diào)諧電感耦合等離子體質(zhì)譜儀至最佳工作狀態(tài)。射頻功率為1250 W，載氣流速為1.0 L/min，進(jìn)樣速率為0.1 r/s；采用“定量分析”模式。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液及內(nèi)標(biāo)溶液的配制

用5%的稀硝酸稀釋Se標(biāo)準(zhǔn)溶液，所得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的混標(biāo)濃度為0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、30.0 μg/L，以5%硝酸為標(biāo)準(zhǔn)空白溶液。用去離子水稀釋內(nèi)標(biāo)至1.0 μg/L，即得內(nèi)標(biāo)溶液。

1.2.4 方法學(xué)考察

按儀器優(yōu)化后的工作條件對(duì)系列標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算硒元素的線(xiàn)性方程和決定系數(shù)；并連續(xù)平行測(cè)定10次試劑空白，分別以10倍信噪比計(jì)算方法的定量限。

精確稱(chēng)取0.2000 g樣品，加入Se的標(biāo)準(zhǔn)溶液，制備樣品溶液，并按儀器優(yōu)化后的工作條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算平均回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。

1.2.5 樣品測(cè)定取不同野生菌樣品，制備樣品測(cè)試溶液，每份樣品平行測(cè)定3次。

2 結(jié)果與討論

2.1 方法學(xué)考察

按照前述測(cè)定條件，分別測(cè)定系列濃度Se標(biāo)準(zhǔn)溶液，以濃度為橫坐標(biāo)，響應(yīng)強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，得到Se校準(zhǔn)方程為Y=296.380x-52.345，決定系數(shù)為0.9997(如圖1所示)，線(xiàn)性范圍為0.2～30 μg/L，定量限為0.20 μg/L。

圖1 硒含量測(cè)定工作曲線(xiàn)Fig.1 The Calibration Curve for Determination Se Content

選用野生菌樣品，分別按0.5 mg/kg、1.0 mg/kg和2.0 mg/kg添加Se元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行回收實(shí)驗(yàn)。在3個(gè)加標(biāo)水平上，回收率在98.1%～103.6%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.9%～2.7%之間，表明方法的精密度與準(zhǔn)確度均符合要求，可以用于野生菌中硒元素含量測(cè)定。

表1 方法的回收率與精密度Table 1 Recovery and RSD of the method

2.2 樣品中硒元素含量測(cè)定

7種野生菌中硒元素含量如表2所示，除了黃虎掌菌硒含量高達(dá)251.29 mg/kg外，其他幾種野生菌硒含量在0.10～ 9.32 mg/kg之間，這與文獻(xiàn)[12]報(bào)道的大部分野生菌硒含量相符，菌蓋硒含量高于菌柄。黃虎掌菌硒含量接近文獻(xiàn)[12]報(bào)道的專(zhuān)門(mén)培養(yǎng)的富硒食用菌。

表2 7種野生菌種硒元素含量Table 2 Selenium content in seven wild mushrooms

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)建立了微波消解電感耦合等離子體質(zhì)譜法測(cè)定云南野生菌中硒元素含量的方法。方法線(xiàn)性范圍在0.2～30 μg/L，定量限為0.20 μg/L，加標(biāo)回收率在98.1%～103.6%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.9%～2.7%之間，表明方法的精密度與準(zhǔn)確度均符合要求。該方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，可用于野生菌中硒元素的含量測(cè)定。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)云南野生黃虎掌菌富含硒元素，作為富硒野生菌具有較大的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。