王片片，康樺華，劉振興，王 芳，劉 春

（1.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物衛(wèi)生研究所/廣東省畜禽疫病防治研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部獸用藥物與診斷技術(shù)廣東科學(xué)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)站，廣東 廣州 510640；2.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所，廣東 廣州 510380；3.仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，廣東 廣州 510225）

【研究意義】免疫系統(tǒng)是機(jī)體執(zhí)行免疫應(yīng)答及免疫功能的重要系統(tǒng)。機(jī)體受到抗原刺激后，淋巴細(xì)胞發(fā)生分化增殖，在B 淋巴細(xì)胞的介導(dǎo)下產(chǎn)生免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）。根據(jù)Ig重鏈恒定區(qū)（Constant region，C 區(qū)）肽鏈氨基酸組成的不同，免疫球蛋白被劃分為多種類型，哺乳動(dòng)物中的Ig 類型主要有IgM、IgD、IgG、IgE和IgA［1］。相比于哺乳動(dòng)物，魚類Ig 研究起步較晚，目前在硬骨魚類中已發(fā)現(xiàn)的Ig 主要有IgM、IgD、IgZ、IgT、IgM-Z 等［2］。其中，IgD在人類免疫系統(tǒng)中兼具受體和配體的雙重身份，可以在B 細(xì)胞發(fā)育早期替代IgM的作用，同時(shí)在調(diào)劑免疫應(yīng)答和維持免疫系統(tǒng)的平衡中也發(fā)揮重要作用［3］。目前對(duì)魚類IgD的研究較少，探究魚類IgD的功能與作用，對(duì)于完善魚類免疫蛋白功能研究具有重要意義。嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）是一種嚴(yán)重影響水產(chǎn)動(dòng)物健康生長(zhǎng)的病原菌，對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成很大威脅，疫苗免疫是動(dòng)物疫病有效防控的手段之一，也是魚病防治中的首選方式［4-5］。研究嗜水氣單胞菌疫苗免疫魚類后IgD的表達(dá)變化，對(duì)于進(jìn)一步認(rèn)識(shí)魚類免疫應(yīng)答機(jī)制具有重要意義。

【前人研究進(jìn)展】Wilson 等［6］在斑點(diǎn)叉尾鮰（Ictalurus punctatus）中第一次報(bào)道了一種類似于哺乳動(dòng)物IgD重鏈的嵌合基因，隨后在牙鲆（Paralichthys olivaceus）［7］、鱖（Siniperca chuatsi）［8］、斜 帶石斑魚（Epinephelus coioides）［9］、大菱鲆（Scophthalmus maximus）［10］等魚類中均發(fā)現(xiàn)了IgD的存在。目前IgD 在除鳥類外的其他脊索動(dòng)物中均有報(bào)道，但對(duì)于IgD 免疫學(xué)功能方面的研究較少。有研究顯示，IgD 可能在魚類系統(tǒng)免疫監(jiān)視以及免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)中起重要作用，且其免疫應(yīng)答表現(xiàn)一定的組織特異性［4］。

【本研究切入點(diǎn)】劍尾魚（Xiphophorus helleri）屬鳉形目（Cyprinodontiformes）花鳉科（Cyprinodontidae）劍尾魚屬，是我國首個(gè)通過審定的魚類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，多年來被應(yīng)用于動(dòng)物疾病檢驗(yàn)?zāi)Ｐ?、水環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域［11］。作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，劍尾魚具備均質(zhì)化和標(biāo)準(zhǔn)化的優(yōu)勢(shì)，從而保證實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性、結(jié)果的精確度和可比性。目前在劍尾魚免疫球蛋白研究方面，IgM 和IgZ 均已得到克隆并進(jìn)行免疫相關(guān)研究，但I(xiàn)gD 還未有相關(guān)研究報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】本研究擬對(duì)劍尾魚IgD 進(jìn)行基因克隆，并研究其在劍尾魚中的組織表達(dá)分布以及在嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）疫苗免疫后的表達(dá)變化，初步探討IgD 在劍尾魚免疫系統(tǒng)中的功能作用，豐富其在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物領(lǐng)域中對(duì)免疫球蛋白基因的研究，進(jìn)一步認(rèn)識(shí)魚類免疫應(yīng)答分子機(jī)制，為劍尾魚作為魚類疾病研究的模式動(dòng)物和疫苗免疫評(píng)價(jià)模型奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 供試魚為5～6 月齡劍尾魚（RR-B 系），體長(zhǎng)5～8 cm，體重3.5～4.8 g，由中國水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所培育，已通過全國水產(chǎn)原種和良種審定委員會(huì)審定。本試驗(yàn)于2015 年在珠江水產(chǎn)研究所開展。試驗(yàn)開始前，劍尾魚暫養(yǎng)水產(chǎn)動(dòng)物房，14 d 后免疫，免疫后取11 d 內(nèi)各時(shí)期樣品。養(yǎng)殖玻璃缸體積為100 L，水溫28（± 2）℃，每天用經(jīng)24 h 曝氣的自來水換水1/4，實(shí)驗(yàn)魚房間上午8：00 開啟照明，以14 h/10 h 進(jìn)行晝夜明暗交替。

1.1.2 主要試劑與儀器 DNA 提取試劑盒Tissue DNA Kit Ⅱ、總RNA 提取試劑盒Total RNA Kit Ⅱ和膠回收試劑盒Gel Extraction Kit 為OMEGA 公司（美國）產(chǎn)品，M-MLV Reverse Transcriptase購自Promega 公司（美國），pMD-18T vector、PrimeScriptTMRT Reagent Kit（Prefect Real Time）和熒光定量試劑盒SYBR?Premix EX TapTM Ⅱ（Tli RNaseH plus）、DNA 消化酶DNase I 均購自TaKaRa 公司（日本），大腸桿菌DH5α 感受態(tài)細(xì)胞為北京天根生化科技有限公司產(chǎn)品，PCR 引物由上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。嗜水氣單胞菌株（GYK1）由魚病實(shí)驗(yàn)室保存，嗜水氣單胞菌疫苗來自廣州普麟生物制品有限公司。

主要儀器：ABI 7500 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)儀（Applied Biosystems，美國）、GelDoc 凝膠成像系統(tǒng)（Bio-RAd，美國）、DYY-7C 電泳儀器（北京六一儀器廠）、BPH-9052 電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒科技有限公司）、I-4 離心機(jī)（Sigma，德國）等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 脾臟總DNA 和RNA的提取 選取6 尾健康劍尾魚腹腔注射嗜水氣單胞菌株（GYK1）60～80 μL（菌懸液濃度104cfu/mL），2 d 后取脾臟提取DNA 和RNA。于冰上剪開腹腔取出脾臟放入EP 管，液氮凍存，按照OMEGA 公司試劑盒說明書提取DNA 與RNA 用于IgD基因DNA及cDNA的克隆。取5 μL 總RNA 樣品用1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其質(zhì)量和完整性，用核酸蛋白測(cè)定儀測(cè)定RNA 樣品的濃度和純度。

1.2.2 IgD 基因DNA 及cDNA 克隆 將提取的總RNA 按照逆轉(zhuǎn)錄M-MLV 說明書合成cDNA 第一鏈。參照實(shí)驗(yàn)室已建立的劍尾魚EST 庫的基因序列和已知魚類IgD基因序列，設(shè)計(jì)DNA 擴(kuò)增引物（表1），以劍尾魚DNA 為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)過1.0%瓊脂糖凝膠電泳后，將目的條帶切下用膠回收試劑盒純化，純化產(chǎn)物連接pMD18-T 載體后轉(zhuǎn)化進(jìn)大腸桿菌DH5a 感受態(tài)細(xì)胞，37 ℃倒置培養(yǎng)過夜（12 h），挑取陽性克隆測(cè)序。對(duì)獲得的片段進(jìn)行拼接得到基因全長(zhǎng)，對(duì)拼接的全長(zhǎng)DNA 序列分析，預(yù)測(cè)其cDNA 序列。根據(jù)預(yù)測(cè)序列設(shè)計(jì)引物（表1），以cDNA 第一鏈為模板進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，經(jīng)測(cè)序和拼接后獲得其全長(zhǎng)cDNA 序列。

表1 供試引物信息及用途Table 1 Information and application of tested primers

1.2.3 生物信息學(xué)分析 利用DNAstar 分析軟件對(duì)獲得的片段進(jìn)行全長(zhǎng)拼接。用DNAman 5.1分析劍尾魚IgD基因DNA 序列以及開放閱讀框（Open Reading Frame，ORF），通過與其他種類的核苷酸和氨基酸序列比對(duì)，最終確定ORF。應(yīng)用Clustalx 進(jìn)行多序列比對(duì)，根據(jù)氨基酸序列，用MEGA4.0 中的鄰位相聯(lián)法（Neighborjoining，NJ）構(gòu)建進(jìn)化樹。

1.2.4 IgD 基因組織表達(dá)分析 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)檢測(cè)IgD基因在不同組織中的相對(duì)表達(dá)量。根據(jù)已知?jiǎng)ξ掺~β-actin序列（登錄號(hào)：DQ060278）和獲得的IgD基因cDNA 序列設(shè)計(jì)內(nèi)參引物β-actinF、β-actinR 和檢測(cè)引物IgD-F、IgD-R（表1）。選取3 尾健康的劍尾魚，分別取其鰓、腦、心臟、肝、脾、頭腎、腸、肌肉和表皮組織，按照1.2.2 中方法提取RNA，用SYBR PrimeScript RT-PCR Kit 進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，合成cDNA 第一鏈。以合成的cDNA 第一鏈為模板，按照熒光定量試劑盒步驟在ABI 7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀進(jìn)行熒光定量PCR 檢測(cè)。反應(yīng)體系為：SYBR?Premix ExTaq ? Ⅱ（2×）10 μL，ROX Reference Dye Ⅱ（50×）0.4 μL，10 μmol/L 上下游引物各0.4 μL，cDNA 2 μL，加去離子水補(bǔ)足反應(yīng)總體積至20 μL。反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃ 5 s、60 ℃ 34 s，40 個(gè)循環(huán)；60 ℃延伸時(shí)采集熒光信號(hào)。反應(yīng)結(jié)束后對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行溶解曲線分析，以確保特異性擴(kuò)增。采用2?ΔΔCt法計(jì)算樣品中IgD基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

1.2.5 嗜水氣單胞菌疫苗免疫 選取120 尾健康的劍尾魚，分為3 個(gè)平行試驗(yàn)組和1 個(gè)對(duì)照組，每組30 尾（水溫保持在28 ℃±2 ℃）。試驗(yàn)組每尾劍尾魚按說明書腹腔注射嗜水氣單胞菌疫苗進(jìn)行免疫，對(duì)照組注射等量0.65%生理鹽水。免疫后分別在6 h、12 h、1 d、2 d、4 d、7 d、11 d，每組各取3 尾魚的脾、頭腎和腸組織，采用qRTPCR 檢測(cè)各組織不同時(shí)間IgD基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

采用SPSS 26 軟件單因素方差分析對(duì)IgD相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行差異顯著性比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 劍尾魚IgD 基因擴(kuò)增結(jié)果

本研究對(duì)劍尾魚IgD基因進(jìn)行擴(kuò)增，測(cè)序獲得的DNA 片段用DNAstar 進(jìn)行拼接后獲得長(zhǎng)為6 970 bp的序列。通過RT-PCR，得到IgD基因的完整ORF，長(zhǎng)為3 897 bp的cDNA 序列，該序列編碼1 298 個(gè)氨基酸（圖1），預(yù)測(cè)其編碼蛋白質(zhì)分子量為145.5 ku，等電點(diǎn)pI 為7.23。氨基酸序列分析結(jié)果（圖1）顯示，劍尾魚IgD基因結(jié)構(gòu)由可變區(qū)和恒定區(qū)組成，恒定區(qū)由CH1-CH2-CH3-CH4-CH5-CH6-CH7 和1 個(gè)跨膜區(qū)（TM）組成。

圖1 劍尾魚IgD 基因ORF 序列及推導(dǎo)的氨基酸序列Fig.1 ORF sequence and deduced amino acid sequence of IgD from Xiphophorus helleri

2.2 劍尾魚與不同魚類IgD 基因的進(jìn)化關(guān)系

將劍尾魚與其他魚類IgD基因ORF 核苷酸序列及其編碼的氨基酸序列進(jìn)行一致性比較，結(jié)果（表2）顯示，劍尾魚與鱖、紅笛鯛、牙鲆、斜帶石斑魚、紅旗東方鲀和虹鱒的IgD核苷酸序列和氨基酸序列相似性稍高，核苷酸序列一致性為65～70%，氨基酸序列一致性為43～49%；與大西洋鱈和斑點(diǎn)叉尾鮰的一致性較低，核苷酸序列一致性分別為49%和50%，氨基酸序列一致性為30%和33%。構(gòu)建劍尾魚IgD 氨基酸序列與其他魚類IgD 氨基酸序列系統(tǒng)進(jìn)化樹（圖2）發(fā)現(xiàn)，劍尾魚與鱖、紅笛鯛、斜帶石斑魚、牙鲆、紅旗東方鲀聚為一支，然后與虹鱒和大西洋鱈魚聚為一大支，與斑點(diǎn)叉尾鮰分屬兩支，其中劍尾魚與鲀形目的紅旗東方鲀親緣關(guān)系最近，其分子分類地位與生物學(xué)分類一致。

圖2 劍尾魚與其他魚類IgD 氨基酸序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig.2 Phylogenic tree of IgD amino acid sequence from Xiphophorus helleri and other species of fishes

表2 劍尾魚與其他魚類IgD 基因ORF的一致性比較Table 2 Identity comparison of IgD ORFfrom Xiphophorus helleriand those of other species of fishes

2.3 劍尾魚IgD 基因的組織表達(dá)分析

應(yīng)用RT-PCR 技術(shù)，以β-actin 為內(nèi)參基因，用設(shè)計(jì)的熒光定量檢測(cè)引物檢測(cè)劍尾魚鰓、腦、心臟、肝、脾、頭腎、腸、肌肉和表皮9 個(gè)組織中IgD基因的組織表達(dá)分布特征。結(jié)果（圖3）表明，IgD 在脾中分布最高，其次是頭腎、腸和肌肉，在肝臟、皮膚、心、鰓和腦中表達(dá)較低。

圖3 劍尾魚不同組織中IgD 基因的組織特異性表達(dá)Fig.3 Tissue-specific expression of IgD gene in different tissues of Xiphophorus helleri

2.4 嗜水氣單胞菌疫苗免疫后IgD 基因的表達(dá)規(guī)律

通過RT-PCR 檢測(cè)嗜水氣單胞菌疫苗免疫劍尾魚6 h、12 h、1 d、2 d、4 d、7 d 和11 d 后IgD在其脾臟、頭腎和腸中的表達(dá)變化。結(jié)果（圖4）顯示，劍尾魚頭腎、脾臟和腸中的IgDmRNA 表達(dá)量在嗜水氣單胞菌疫苗免疫后均發(fā)生明顯變化，其中頭腎中IgD在免疫后6 h 時(shí)表達(dá)量顯著上調(diào)后開始下調(diào)，并在免疫后2 d 時(shí)達(dá)到最低值；脾臟中IgD在免疫后12 h 表達(dá)量顯著下調(diào)，并一直持續(xù)至第2 天，至免疫后11 d 表達(dá)量仍然顯著低于對(duì)照；與脾臟IgD不同的是，腸道中IgD在免疫后12 h 顯著上調(diào)，為對(duì)照的4 倍，并在第2天達(dá)到峰值，為對(duì)照的5.2 倍，隨后表達(dá)量下調(diào)，至第11 天時(shí)逐漸恢復(fù)至正常水平。

圖4 嗜水氣單胞菌疫苗免疫后IgD 在各器官中的表達(dá)變化Fig.4 Expression of IgD mRNA in different organs after vaccination with Aeromonas hydrophilavaccine

3 討論

本研究通過基因克隆獲得劍尾魚IgDcDNA，其ORF 序列3 897 bp，編碼1 298 個(gè)氨基酸。該序列具有魚類IgD的經(jīng)典結(jié)構(gòu)域，包含可變區(qū)和恒定區(qū)域，恒定區(qū)包含魚類IgD典型的CH1-CH2-CH3-CH4-CH5-CH6-CH7 和1 個(gè)跨膜區(qū)，其ORF 與斜帶石斑魚、牙鲆紅笛鯛和鱖的一致性為67%～70%，表明本試驗(yàn)成功克隆到劍尾魚IgDcDNA 序列。

本研究發(fā)現(xiàn)，劍尾魚IgD基因主要在頭腎、脾臟中高表達(dá)。這種現(xiàn)象在牙鲆［7］、鱖魚［8］、斜帶石斑魚［9］、大菱鲆［10］、團(tuán)頭魴［12］等魚類中也有類似報(bào)道。頭腎和脾臟是魚類重要的免疫器官，是免疫應(yīng)答的主要場(chǎng)所。IgD 在劍尾魚頭腎和脾臟中大量分布，表明其作為魚類重要的免疫球蛋白，在魚類的免疫應(yīng)答過程中發(fā)揮重要作用。魚類IgD表達(dá)具有一定的組織特異性，不同魚體之間也有一定差異。牙鲆IgD基因在心臟和肝臟內(nèi)未檢測(cè)到表達(dá)［7］，鱖IgD基因在心臟、腸、肝臟、鰓和腦中未檢測(cè)到表達(dá)［8］，大菱鲆IgD基因在鰓、腸道和心臟中有檢測(cè)到表達(dá)［10］，歐洲海鱸（Dicentrarchus labraxL.）IgD嵌合體在鰓、腸和頭腎中有較高表達(dá)［13］。本試驗(yàn)中，劍尾魚IgD基因在腸、肌肉、肝、心臟、鰓和腦中均檢測(cè)到表達(dá)，且在腸中的表達(dá)量?jī)H低于頭脾臟和頭腎。腸是營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的主要場(chǎng)所，也是重要的免疫組織，IgD在劍尾魚腸道中有較高表達(dá)，表明其可能參與腸道相關(guān)免疫反應(yīng)。

由于劍尾魚IgD 在腸中的水平較高，本研究選取頭腎、脾臟和腸3 類組織來研究疫苗免疫后IgD的表達(dá)變化情況。目前關(guān)于魚類IgD的研究較少，初步認(rèn)為IgD 主要作為成熟B 淋巴細(xì)胞膜上的一種特異性抗原受體而存在，可能在細(xì)胞發(fā)育和信號(hào)傳遞過程以及刺激、誘導(dǎo)其他細(xì)胞因子分泌發(fā)揮作用［14］。在用滅活柱狀黃桿菌免疫鱖后，其IgD基因在頭腎和脾臟內(nèi)表達(dá)量顯著上升［15］，用滅活的無乳鏈球菌免疫吉富羅非魚（Oreochromis niloticus）后，其腎、脾臟、胸腺中的IgD基因表達(dá)量也上調(diào)［16］。外界病原菌刺激印度淡水鯉魚（Catla catla）后，其腎臟和脾臟中IgD表達(dá)也明顯上調(diào)，但其原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)抑制劑處理后，腎臟和脾臟中IgD表達(dá)出現(xiàn)明顯下調(diào)，表明其可能存在信號(hào)傳導(dǎo)作用［17］。在對(duì)人體和小鼠的研究中發(fā)現(xiàn)，IgD受到免疫原刺激后，其細(xì)胞表面IgD出現(xiàn)迅速下調(diào)［12］，類似地，在滅活鰻弧菌免疫大菱鲆后，其頭腎中的IgD也出現(xiàn)迅速下調(diào)，之后逐漸恢復(fù)［10］。牙鲆在注射免疫滅活鰻弧菌后，腎和脾臟中IgD的表達(dá)量均出現(xiàn)快速顯著下調(diào)，之后逐漸恢復(fù)到對(duì)照水平［1］。類似于以上現(xiàn)象，本研究中，劍尾魚頭腎IgD在嗜水氣單胞菌疫苗免疫后6 h 明顯上調(diào)表達(dá)，之后出現(xiàn)下調(diào)并在11 d 時(shí)基本恢復(fù)對(duì)照水平；脾臟中IgD在免疫后出現(xiàn)明顯下調(diào)，且一直持續(xù)到免疫后第2天。表明劍尾魚IgD參與了免疫應(yīng)答反應(yīng)，并具有免疫組織特異性，IgD 可能在劍尾魚的免疫應(yīng)答中存在某些調(diào)控和補(bǔ)償作用。

反之，劍尾魚腸中IgD在嗜水氣單胞菌疫苗免疫后出現(xiàn)顯著上調(diào)。與在頭腎和脾臟中相比，腸中IgD相對(duì)變化最為明顯，第2 天時(shí)表達(dá)為對(duì)照的5.2 倍，且后期表達(dá)量一直處于較高水平。魚類腸道除具有消化功能外，也是魚類粘膜免疫系統(tǒng)的重要組成部分，其構(gòu)成的局部免疫應(yīng)答環(huán)境可以保護(hù)魚類免受病原體感染［19］。腸中的免疫球蛋白，在通過其上皮抵抗?jié)撛诓≡w入侵方面起著重要作用［5,20］。在前人研究中發(fā)現(xiàn)，腸道表面的微生物群大部分被IgT 包裹，但I(xiàn)gM 和IgD 也與部分相似比例的腸道共生細(xì)菌進(jìn)行了結(jié)合［21］。有研究表明，魚類IgD 可以覆蓋粘膜組織中的一部分共生微生物群，包括腸粘膜、鰓粘膜等，表明魚類IgD 可能也參與粘膜內(nèi)穩(wěn)態(tài)［22-24］。本研究中，IgD 在劍尾魚腸中有較高分布，以及嗜水氣單胞菌疫苗免疫后腸中IgD明顯上調(diào)表達(dá)并一直處于較高表達(dá)水平，表明IgD可能在劍尾魚腸道粘膜免疫中發(fā)揮一定作用，具體作用及機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

本研究成功克隆獲得劍尾魚IgD基因序列，其cDNA 序列開放讀碼框長(zhǎng)為3 897 bp，編碼1 298 個(gè)氨基酸，且具有魚類IgD的經(jīng)典結(jié)構(gòu)域。系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示，劍尾魚IgD基因與鱖IgD基因序列一致性最高，為70%。IgD在劍尾魚的組織器官中均有分布，主要分布于劍尾魚的脾、頭腎和腸中，經(jīng)嗜水氣單胞菌疫苗免疫后，劍尾魚頭腎、脾臟和腸中IgD基因的表達(dá)量發(fā)生明顯表達(dá)變化，在頭腎和脾臟中先下調(diào)后上升，表明IgD 可能參與了劍尾魚的免疫應(yīng)答，并具有一定的免疫組織特異性。腸道中IgD 高水平分布及在疫苗免疫后顯著上調(diào)表達(dá)，表明其可能參與了對(duì)抗外來病原入侵的粘膜免疫。本研究結(jié)果為進(jìn)一步研究魚類IgD的功能及作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。