袁銘君

中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥資源中心，道地藥材國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地

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中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥資源中心，道地藥材國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地

葉楊玉

中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥資源中心，道地藥材國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地

李軍德＊

中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥資源中心，道地藥材國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地

雞內(nèi)金又名雞食皮、雞合子、化石膽，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，是雉科動(dòng)物家雞Gallus gallus domesticus Brisson的干燥沙囊內(nèi)壁。具有健胃消食、澀精止遺、通淋化石的功效，常用于食積不消、嘔吐瀉痢、小兒疳積、遺尿、遺精、石淋澀痛、膽脹脅痛[1]。雞內(nèi)金全國(guó)各地均產(chǎn)、來(lái)源復(fù)雜、用途廣泛、炮制品多樣，是我國(guó)傳統(tǒng)消導(dǎo)藥之一，可藥食兼用，市場(chǎng)需求逐年上升。

據(jù)統(tǒng)計(jì)，269 882張內(nèi)科處方中雞內(nèi)金使用頻率達(dá)9.68%，排在內(nèi)科用藥頻率的第35位[2]。藥智網(wǎng)數(shù)據(jù)顯示，雞內(nèi)金為山楂麥芽口服液、太子參葡萄糖酸鋅口服液、山楂麥芽片等62種保健品主要原料；是蠶蛹雞內(nèi)金固體飲料、山楂雞內(nèi)金固體飲料和梨果仙人掌雞內(nèi)金壓片糖果的主料。雞內(nèi)金在醫(yī)藥、保健食品、食品等領(lǐng)域應(yīng)用不斷拓展，其質(zhì)量也越來(lái)越受到大眾的關(guān)注。由中國(guó)食品藥品檢定研究院中藥民族藥檢定所牽頭，安徽省食品藥品檢驗(yàn)研究院承擔(dān)的“2018年全國(guó)中藥飲片專項(xiàng)抽驗(yàn)——雞內(nèi)金質(zhì)量研究”發(fā)現(xiàn)，市場(chǎng)上存在用鴨內(nèi)金或鵝內(nèi)金冒充雞內(nèi)金的現(xiàn)象[3]。在2019年全國(guó)各省中藥材及飲片、中成藥質(zhì)量檢驗(yàn)督查中還發(fā)現(xiàn)，采用混入泥沙等增重雞內(nèi)金的行為較突出[4]。

本文通過查閱雞內(nèi)金國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)及國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、質(zhì)量控制等研究現(xiàn)狀進(jìn)行整理歸納與分析，剖析存在的問題，為完善雞內(nèi)金質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、提高質(zhì)量控制水平、保障其臨床效果提供參考。

1 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1.1 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

1963～2020年，共計(jì)10版《中國(guó)藥典》收錄雞內(nèi)金，并規(guī)定其來(lái)源為雉科動(dòng)物家雞Gallus gallus domesticus Brisson。1963年版《中國(guó)藥典》從來(lái)源、鑒別、炮制、貯藏等對(duì)雞內(nèi)金進(jìn)行規(guī)定，并認(rèn)為優(yōu)質(zhì)雞內(nèi)金為個(gè)大、完整不破碎、無(wú)雜質(zhì)者[5]。1977年版《中國(guó)藥典》刪除鑒別項(xiàng)，增加性狀描述，規(guī)定優(yōu)質(zhì)雞內(nèi)金為色黃、少破碎者[6]。從1985年版《中國(guó)藥典》開始，刪除優(yōu)質(zhì)雞內(nèi)金描述[7]。1990年版至2020年版《中國(guó)藥典》，增加雞內(nèi)金厚度（2mm）[8]。2005年版《中國(guó)藥典》，新增水分、總灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物[9]。2010年版《中國(guó)藥典》中總灰分限量由2005年版不得過1.0%提升至2.0%，刪除酸不溶性灰分[10]?，F(xiàn)行2020年版《中國(guó)藥典》一部規(guī)定了來(lái)源、性狀、檢查（水分、總灰分）、浸出物，以及雞內(nèi)金、炒雞內(nèi)金和醋雞內(nèi)金的炮制方法及炒雞內(nèi)金性狀[1]。

1.2 地方標(biāo)準(zhǔn)

雞內(nèi)金全國(guó)各地均產(chǎn)，炮制形式多樣，各?。ㄗ灾螀^(qū)、直轄市）根據(jù)自身實(shí)際情況制定其地方標(biāo)準(zhǔn)。本文收集了相關(guān)地方標(biāo)準(zhǔn)并進(jìn)行匯總整理。由表1可知，僅《臺(tái)灣中藥典》第三版對(duì)雞內(nèi)金中有害物質(zhì)進(jìn)行了規(guī)定。各地方標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)雞內(nèi)金水分、總灰分、酸不溶性灰分要求不一。臺(tái)灣、陜西、北京、江西、廣西、湖南、浙江、上海8地地方標(biāo)準(zhǔn)收錄雞內(nèi)金。其中，湖南、浙江未規(guī)定水分限量，臺(tái)灣、廣西、上海規(guī)定水分不超過15%，陜西、北京、江西規(guī)定水分不超過13%；江西規(guī)定總灰分和酸不溶性灰分的限量最高，分別為不超過8.0%和3.0%，陜西、廣西、上海規(guī)定不超過2.0%和1.0%；湖南規(guī)定浸出物含量不低于9.0%，陜西、北京、廣西、上海規(guī)定浸出物含量不低于7.5%。陜西、江西、廣西、湖南、浙江、上海6地地方標(biāo)準(zhǔn)收錄炒雞內(nèi)金，但僅陜西規(guī)定了水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。陜西、北京、山東、江西、廣西、湖南6地地方標(biāo)準(zhǔn)收錄醋雞內(nèi)金，僅陜西規(guī)定了水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。另外，存在炮制品名稱相同炮制方法不同的情況。例如，陜西、江西規(guī)定炒雞內(nèi)金采用清炒法，江西、廣西、湖南、浙江、上海規(guī)定采用砂炒法；北京規(guī)定醋雞內(nèi)金所用醋為米醋，其他各地未做要求，且北京、廣西規(guī)定醋雞內(nèi)金用文火炒。按地方標(biāo)準(zhǔn)炮制加工的雞內(nèi)金往往會(huì)流入其他地區(qū)，但各地方標(biāo)準(zhǔn)有異，增加了監(jiān)管的難度。

表1 雞內(nèi)金相關(guān)地方標(biāo)準(zhǔn)

續(xù)表

2 質(zhì)量控制

中藥質(zhì)量控制是采用必要的方法、技術(shù)或措施監(jiān)控中藥質(zhì)量使之達(dá)到藥用要求。其內(nèi)容主要包括真?zhèn)舞b別和優(yōu)劣評(píng)價(jià)兩方面。真?zhèn)舞b別是中藥質(zhì)量控制的首要任務(wù)，是對(duì)中藥來(lái)源真實(shí)性的檢驗(yàn)。優(yōu)劣評(píng)價(jià)是在保證中藥真實(shí)性的條件下對(duì)其各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)，包括活性成份、指標(biāo)性成份、雜質(zhì)檢查、衛(wèi)生學(xué)檢查等。

2.1 真?zhèn)舞b別

2.1.1 基原鑒別

雞內(nèi)金來(lái)源于雉科動(dòng)物家雞Gallus gallus domesticus Brisson的干燥沙囊內(nèi)壁。家雞由紅原雞馴化而來(lái)，品種繁多。狼山雞、北京油雞、鹿苑雞等15個(gè)雞種COI基因序列存在特異性突變位點(diǎn)和單倍型，這些特異性遺傳標(biāo)記為品種資源的鑒定提供了客觀依據(jù)[11]。

2.1.2 性狀鑒別

雞內(nèi)金性狀鑒別應(yīng)注意形狀、厚度、顏色、表面特征、斷面5個(gè)方面。2020年版《中國(guó)藥典》規(guī)定雞內(nèi)金性狀為不規(guī)則卷片，厚約2mm。表面黃色、黃綠色或黃褐色，薄而半透明，具明顯的條狀皺紋。質(zhì)脆，易碎，斷面角質(zhì)樣，有光澤[1]。偽品鵝內(nèi)金較雞內(nèi)金稍大，呈圓片狀或片塊狀，長(zhǎng)7～10cm，寬5～7cm，厚1～1.5mm，表面黃白色或灰黃色，外部邊緣有齒狀短裂紋，斷面無(wú)光澤；偽品鴨內(nèi)金稍厚，呈蝶形碎片狀，厚1～3mm，表面暗綠色、黑綠色、紫色或黃棕色，表面縱紋較少，斷面無(wú)光澤[12]。性狀鑒別簡(jiǎn)單、快速，但對(duì)于破碎的雞內(nèi)金，則存在局限性。若鑒定者經(jīng)驗(yàn)不足，易出現(xiàn)誤判情況。

2.1.3 顯微鑒別

雞內(nèi)金經(jīng)粉碎后性狀特征消失，肉眼難以鑒別。翟延君等[13]曾利用光學(xué)顯微鏡對(duì)嬰兒消食散中雞內(nèi)金粉末進(jìn)行研究，其形狀不規(guī)則, 邊緣不整齊，半透明或略呈淡黃色，表面皺縮具扭曲紋理。張?chǎng)蔚萚14]采用顯微鑒別法對(duì)十味益脾顆粒中雞內(nèi)金進(jìn)行鑒別，發(fā)現(xiàn)雞內(nèi)金中有不規(guī)則的無(wú)色或棕黃色碎塊。姚志凌等[15]采用顯微鑒別法對(duì)肝維康膠囊中雞內(nèi)金進(jìn)行鑒別，發(fā)現(xiàn)雞內(nèi)金有不規(guī)則的淡黃色內(nèi)壁組織碎片，表面具明顯的條狀紋理。雞內(nèi)金粉末顯微特征專屬性弱，實(shí)際工作中鑒別難度較大。

2.1.4 理化鑒別

雞內(nèi)金含蛋白質(zhì)類成份，其理化鑒別多聚焦于電泳檢測(cè)。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳法（SDSPAGE）對(duì)雞內(nèi)金、鴨內(nèi)金、鴿內(nèi)金進(jìn)行檢測(cè)，電泳圖譜顯示三者譜帶數(shù)目及區(qū)域存在差異，可有效區(qū)分三者。另外，不同生長(zhǎng)階段、不同性別雞內(nèi)金電泳譜圖也不同[16-17]。SDS-PAGE法重現(xiàn)性好，但耗時(shí)耗力。高效毛細(xì)管電泳法（HPCE）高效、低耗、快速，對(duì)雞內(nèi)金、鴨內(nèi)金的酸性、中性、堿性蛋白提取液進(jìn)行檢測(cè)，3種提取液HPCE圖譜均存在顯著差異，可有效鑒別雞內(nèi)金與鴨內(nèi)金[18]。紅外檢測(cè)研究發(fā)現(xiàn)，雞內(nèi)金、鴨內(nèi)金、鵝內(nèi)金吸收峰特征不同，可作為其定性方法之一[19]。此外，廖立英[20]與崔恩忠等[21]分別建立了腎石顆粒、消石通顆粒中雞內(nèi)金的薄層色譜鑒別法（TLC）。

2.1.5 分子鑒別

近年來(lái)，分子鑒別在中藥鑒定領(lǐng)域發(fā)展迅速。以線粒體DNA細(xì)胞色素b基因通用引物L(fēng)14841和H15149對(duì)雞內(nèi)金和鴨內(nèi)金DNA進(jìn)行擴(kuò)增、測(cè)序、比對(duì)，發(fā)現(xiàn)二者DNA序列存在明顯差異，可準(zhǔn)確區(qū)分雞內(nèi)金和鴨內(nèi)金[22]。以COI基因序列的差異片段[23]和12S基因序列的差異片段[3]設(shè)計(jì)特異性引物，進(jìn)行擴(kuò)增和電泳檢測(cè)，均能快速、有效區(qū)分雞內(nèi)金及其偽品。另外，熊文樂等[24]采用DNA條形碼技術(shù)對(duì)小兒消食片、胃炎寧顆粒、胃可安膠囊3種劑型11種中成藥中雞內(nèi)金進(jìn)行鑒定，得出該方法可行、高效[25]，但成本較高，不能排除摻入除雞沙囊內(nèi)壁以外雞組織、器官的可能性。

2.2 優(yōu)劣評(píng)價(jià)

2.2.1 成份研究

雞內(nèi)金富含蛋白質(zhì)，堿提取物中蛋白含量達(dá)60%[26]。有學(xué)者認(rèn)為蛋白酶、淀粉酶可能為雞內(nèi)金活性蛋白[27]。還有學(xué)者認(rèn)為氨基酸在雞內(nèi)金功能主治方面起著重要作用[25]。氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)得肉雞雞內(nèi)金水解氨基酸總含量達(dá)86.924%[28]，柱前衍生化RP-HPLC 測(cè)得雞內(nèi)金氨基酸含量在261.7～571.3mg/g[29]。有研究表明，雞內(nèi)金多糖有較強(qiáng)的清除羥自由基、螯合二價(jià)鐵離子、抑制脂質(zhì)過氧化物活性的作用[30]；已分離純化出的新型多糖（PECGp）具有心臟保護(hù)活性[31]。現(xiàn)已知雞內(nèi)金多糖由甘露糖、鹽酸氨基葡萄糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、氨基半乳糖鹽酸鹽、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、巖藻糖11種物質(zhì)組成[32]。綜上，雞內(nèi)金成份研究主要集中在總蛋白、氨基酸定量及多糖定性研究階段，活性成份尚不明確，而活性成份是中藥優(yōu)劣評(píng)價(jià)的關(guān)鍵內(nèi)容，活性成份缺失增加了雞內(nèi)金質(zhì)量控制的難度。

2.2.2 優(yōu)劣評(píng)價(jià)方法

研究發(fā)現(xiàn)，蛋白酶活力為醋雞內(nèi)金（112～113U/g）＞炒雞內(nèi)金（85～90U/g）＞生雞內(nèi)金（77～78U/g）；淀粉酶活力為生雞內(nèi)金（10～11U/g）＞醋雞內(nèi)金（9.5～9.6U/g）＞炒 雞 內(nèi) 金（2～3U/g）[33]。該發(fā)現(xiàn)為使用酶活性評(píng)價(jià)雞內(nèi)金優(yōu)劣提供了理論參考。近年來(lái)，生物活性測(cè)定法在動(dòng)物藥材優(yōu)劣評(píng)價(jià)中取得了一些進(jìn)展[34]。其是以藥物生物效應(yīng)為基礎(chǔ)，生物統(tǒng)計(jì)為工具，運(yùn)用特定實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，測(cè)定藥物有效性的一種方法[35]。黃偉等[36]以胃蛋白酶活力為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用質(zhì)反應(yīng)平行線法建立了基于胃蛋白酶活性的雞內(nèi)金生物效價(jià)測(cè)定法,該方法為雞內(nèi)金質(zhì)量?jī)?yōu)劣評(píng)價(jià)提供了新的思路。

3 存在的問題

3.1 質(zhì)控指標(biāo)待完善

理化、分子鑒別技術(shù)已在雞內(nèi)金真?zhèn)舞b別中有所應(yīng)用，而現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)性狀等內(nèi)容有所規(guī)定，缺乏專屬性較強(qiáng)的鑒別方法。雞內(nèi)金富含多種金屬元素，如鋁、鈣、鎘、鈷、銅、鐵、鎂、錳、鉬、鉛、鋅等[37]。其中，鉛、鎘、鋁、銅低劑量對(duì)人體有益，高劑量則對(duì)人體有害。2020年版《中國(guó)藥典》雖在四部規(guī)定了重金屬、有害元素等檢測(cè)方法，但尚未設(shè)定雞內(nèi)金檢測(cè)限度，缺乏與療效相關(guān)的【含量測(cè)定】，難以保證雞內(nèi)金有效性。雞內(nèi)金飲片存在生熟異用現(xiàn)象，但其飲片無(wú)專屬性質(zhì)控指標(biāo)。另外，部分雞內(nèi)金生粉中存在大腸埃希菌、沙門菌[38]，應(yīng)加強(qiáng)該指標(biāo)研究與監(jiān)測(cè)力度。

3.2 采收加工標(biāo)準(zhǔn)尚不具體

采收加工是影響中藥質(zhì)量的重要因素之一。2020年版《中國(guó)藥典》規(guī)定了雞內(nèi)金采收過程，但未規(guī)定其采收具體時(shí)期與采收年限。有資料顯示，雞內(nèi)金全年均可采收[39]。另外，白羽肉雞9周齡達(dá)到出欄體重，地方雞品種17 周齡達(dá)出欄體重[40]，所以市售雞內(nèi)金存在基原動(dòng)物生長(zhǎng)周期不一的情況。又因家雞不是以藥用為目的進(jìn)行養(yǎng)殖，雞內(nèi)金也非主要產(chǎn)品，其產(chǎn)地初加工缺乏統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程。

3.3 品種復(fù)雜多樣

家雞資源豐富，全球各地均產(chǎn)?！吨袊?guó)家禽品種志》（1989年版）共收載了家雞地方品種26個(gè)（仙居雞、北京油雞、清遠(yuǎn)麻雞等）、培育品種9個(gè)（北京白雞、鄭州紅雞、海江黃雞等）、引入品種11個(gè)（白來(lái)航雞、洛島紅雞、洛克雞等）[41]?！吨袊?guó)畜禽遺傳資源志-家禽志》（2011年版）共收錄107個(gè)地方雞品種[42]。《國(guó)家畜禽遺傳資源品種名錄（2021年版）》共收錄102個(gè)地方雞品種。家雞品種多樣造成了雞內(nèi)金來(lái)源的復(fù)雜性[43]。肉用型雞雞內(nèi)金促進(jìn)小鼠胃蛋白酶分泌作用強(qiáng)于蛋用型；但肉用型雞雞內(nèi)金組小鼠的小腸推進(jìn)率和胃排空率均低于蛋用型組[44]。白羽肉雞雞內(nèi)金胃蛋白酶活力和淀粉酶活力遠(yuǎn)大于家養(yǎng)雞雞內(nèi)金[45]。不同品種家雞雞內(nèi)金藥效作用和成份差異如何，需進(jìn)一步系統(tǒng)研究。

3.4 與臨床療效關(guān)聯(lián)研究較少

《本草蒙筌》記載：“雞種類最多，古今方書常用，并以毛色分優(yōu)劣。丹雄者取冠血并頭，黃雌者稱卵及卵白。其心、肝、膽、血、腸、肪、翅、黃皮等，取烏雄者為優(yōu)焉?！薄侗静莺酚涊d：“雞雖屬木，分而配之，則丹雄雞得離火陽(yáng)明之象，白雄雞得庚金太白之象，故辟邪惡者宜之，黃雌雞屬土，故脾胃宜之?！薄兜崮媳静荨酚涊d：“紅者味甘，無(wú)毒。白者氣味酸，寒。紅者治婦人諸虛損、血崩漏下，溫中。白者療風(fēng)、治狂，下氣消渴?！币ι都?yàn)方》首次提出雞內(nèi)金在臨床使用過程中應(yīng)遵循男用雌、女用雄的原則。此后，《本草綱目》《本草備要》《本草原始》等多部古籍均有記載。故宮博物院所藏清宮雞內(nèi)金有“雄”字標(biāo)注，且光緒三十四年三月初七至九月二十九日，由御醫(yī)張仲元為慈禧太后開具的處方中，曾5次出現(xiàn)使用“雄雞內(nèi)金”的記錄。有研究表明，雌雞內(nèi)金和雄雞內(nèi)金蛋白譜帶存在差異，雌雞內(nèi)金較雄雞內(nèi)金多一條較淺的譜帶[18]。但未見不同羽色、雌雄等與臨床療效關(guān)聯(lián)研究。

4 小結(jié)與展望

雞內(nèi)金是一味常見藥食同源藥材，開發(fā)利用前景廣闊。其質(zhì)量控制工作雖取得了一些進(jìn)展，但仍有一些不足。為提高雞內(nèi)金質(zhì)量，保障臨床用藥安全有效，筆者提出以下建議：一是盡快提升完善其質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。如增加電泳法、DNA分子鑒定等現(xiàn)代鑒別方法；組織開展雞內(nèi)金大樣本研究，制定重金屬、有害元素的限量標(biāo)準(zhǔn)。二是開展雞內(nèi)金采收時(shí)間、采收年限、產(chǎn)地初加工規(guī)范化研究，制定其采收加工過程技術(shù)規(guī)范。三是深入研究不同品種家雞雞內(nèi)金之間的異同，包括性狀、成份、藥理活性等，在此基礎(chǔ)上選擇優(yōu)良品種進(jìn)行以藥用為目的標(biāo)準(zhǔn)化養(yǎng)殖。四是重視雞內(nèi)金性狀、成份等對(duì)臨床療效影響的相關(guān)研究，構(gòu)建與臨床相關(guān)聯(lián)的動(dòng)物藥材質(zhì)量控制技術(shù)體系，傳承創(chuàng)新中藥源于臨床實(shí)踐的科學(xué)內(nèi)涵。

動(dòng)物類中藥物質(zhì)基礎(chǔ)復(fù)雜，一直以來(lái)都是中藥質(zhì)量控制的難點(diǎn)。雞內(nèi)金作為《中國(guó)藥典》品種，無(wú)明確藥效成份，整體質(zhì)量控制水平較低。雞內(nèi)金富含蛋白質(zhì)、多糖等?？衫枚康鞍踪|(zhì)組學(xué)（iTRAQ）、蛋白質(zhì)酶切、雙向電泳技術(shù)等，開展雞內(nèi)金活性成份研究；也可利用雞內(nèi)金中多糖成份，建立雞內(nèi)金多糖酶解產(chǎn)物多維色譜特征分析圖，探索建立以多糖為指示性成份的質(zhì)量控制方法。

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