韓晶

摘 要：本研究以雞蛋、雞肉、豬肉及魚肉為試驗材料，對4種喹諾酮藥物殘留測定方法中的提取液濃度、均質(zhì)時間、氮吹溫度及氮吹剩余量等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化設(shè)計。結(jié)果表明，雞蛋、雞肉、豬肉和魚肉的回收率為67.5%～115.0%;目標(biāo)物濃度為5.0～800.0 μg/L時，與質(zhì)譜的響應(yīng)值之間有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)（R2）≥0.999。在50.0 μg/kg、100.0 μg/kg添加水平下，4種喹諾酮類藥物的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）為2.2%～4.5%，符合方法規(guī)范要求。因此，優(yōu)化后的前處理方法可分別用于雞蛋、雞肉、豬肉及魚肉中4種喹諾酮殘留量的測定。

關(guān)鍵詞：農(nóng)產(chǎn)品;喹諾酮;前處理;檢測

Study on Pretreatment Methods for the Determination of Common Quinolone Residues in Different Agricultural Products

HAN Jing

（Dalian General Standard Technical Service Co.， Ltd.， Dalian 116039， China）

Abstract：In this study， eggs， chicken， pork and fish were used as experimental materials to optimize the parameters such as extract concentration， homogenization time， nitrogen blowing temperature and nitrogen blowing residue in the determination of four quinolone drug residues. The results showed that the recoveries of eggs， chicken， pork and fish were 67.5%～115.0%; The target concentration is 5.0～800.0 μg/L， there is a good linear relationship with the response value of mass spectrometry， and the correlation coefficient （R2） ≥ 0.999. At the addition level of 50.0 μg/kg、100.0 μg/kg， the relative standard deviation （n=6） of the four quinolones was 2.2%～4.5%， which met the requirements of the method specification. Therefore， the optimized pretreatment methods can be used to determine the residues of four quinolones in eggs， chicken， pork and fish respectively.

Keywords： agricultural products; quinolone; pretreatment; testing

喹諾酮是一種作用于細(xì)菌DNA的合成抗菌藥物。本研究以雞蛋、豬肉、雞肉及魚肉為材料，通過設(shè)計提取液濃度、均質(zhì)時間、氮吹溫度及氮吹剩余量優(yōu)化前處理方法，應(yīng)用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定4種氟喹諾酮殘留量，以期為檢測4種氟喹諾酮提供更簡單、便捷的方法，提高禽畜和水產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)控效果。

1 材料與方法

1.1 材料

雞蛋、雞肉、豬肉及魚肉均來自大連通用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司食品實驗室有機液質(zhì)組。

1.2 試劑

水;乙腈;冰乙酸;甲酸;正己烷;恩諾沙星、環(huán)丙沙星、氧氟沙星和培氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品。

1.3 儀器與設(shè)備

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀;高速組織搗碎機;均質(zhì)器;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

1.4 試驗方法

1.4.1 試驗條件設(shè)計

《動物源產(chǎn)品中喹諾酮類殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（GB/T 20366—2006）[1]中的提取液濃度為2%，本研究設(shè)置提取液濃度分別為0.4%、0.8%、1.6%和3.2%;國家標(biāo)準(zhǔn)中均質(zhì)時間為1 min，本研究設(shè)置均質(zhì)時間分別為0 min、1 min、10 min和30 min;國家標(biāo)準(zhǔn)中的氮吹溫度為40 ℃，本研究設(shè)置氮吹溫度分別為20 ℃、40 ℃、60 ℃和80 ℃;國家標(biāo)準(zhǔn)中的氮吹剩余量為近干，本研究設(shè)置氮吹剩余量分別為0 mL、0.5 mL、1.0 mL和2.0 mL。使用1.4.3制備的加標(biāo)樣品，按照1.4.2的試驗步驟和1.4.4的色譜和質(zhì)譜條件及優(yōu)選的前處理條件，對雞蛋、豬肉、雞肉和魚的陰性樣品中的喹諾酮類殘留量進(jìn)行檢測，并對每個添加量進(jìn)行6次平行處理，計算4種喹諾酮類藥物的平均回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，驗證方法是否可行。

1.4.2 樣品前處理

將樣品打碎拌勻，稱取5.0 g置于50 mL PTFE離心管中，加入20 mL 2%的甲酸-乙腈溶液，均質(zhì)1 min，以4 000 r/min離心5 min，將上清液轉(zhuǎn)移到另一個50 mL PTFE離心管中，再次用20 mL 2%甲酸-乙腈進(jìn)行提取，合并上清液。將上清液轉(zhuǎn)移到125 mL分液漏斗中，加入25 mL乙腈飽和的正己烷，搖動2 min，棄去上層溶液，將下層溶液轉(zhuǎn)移到100 mL棕色雞心瓶中，40 ℃水浴旋轉(zhuǎn)并蒸發(fā)至近干，氮氣流吹干。精確添加1.0 mL甲酸-乙腈溶液，將殘留物溶解，渦旋混合，用0.22 μm有機濾膜過濾該溶液，置于樣品瓶中，上機測定。

1.4.3 標(biāo)準(zhǔn)液配制

用外標(biāo)法定量，配制標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確稱取適量的4種喹諾酮標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈配制0.1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，再用乙腈配制成10 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間液，準(zhǔn)確量取適量的喹諾酮標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，用2%甲酸-乙腈溶液制備成濃度系列為5.0 ng/mL、20.0 ng/mL、50.0 ng/mL、100.0 ng/mL、200.0 ng/mL、400.0 ng/mL和800.0 ng/mL的喹諾酮混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.4.4 儀器條件

（1）色譜條件。色譜柱：C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）;流動相：乙腈+2%甲酸乙腈;流速：0.8 mL/min;進(jìn)樣量：20 μL。

（2）質(zhì)譜條件。離子源：電噴霧離子源;掃描模式：正離子掃描;監(jiān)測方式：多反應(yīng)監(jiān)測;電噴霧電壓：5 500 V;霧化氣壓力：0.413 MPa;氣簾氣壓力：0.344 MPa。

1.4.5 上機測試

設(shè)置質(zhì)譜條件和色譜條件后，將樣品放入進(jìn)樣區(qū)內(nèi)，進(jìn)行檢測。之后用曲線定量，對檢測結(jié)果進(jìn)行分析。

1.4.6 喹諾酮殘留量計算

試樣中喹諾酮殘留量計算公式為：

（1）

式中：X為試樣中被測組分殘留量，μg/kg;

c為從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的被測組分溶液濃度，ng/mL;

V為試樣溶液定容體積，mL;m為試樣溶液所代表的質(zhì)量，g。

2 結(jié)果與分析

2.1 前處理選擇

2.1.1 雞蛋的前處理選擇

綜合4種藥物的回收率情況，雞蛋的前處理條件設(shè)置為提取液濃度0.8%、均質(zhì)時間1 min、氮吹溫度40 ℃、氮吹剩余量0.5 mL，4種藥物的回收率情況見表1、表2。

2.1.2 豬肉的前處理選擇

綜合4種藥物的回收率情況，豬肉的前處理條件設(shè)置為提取液濃度0.8%、均質(zhì)時間1 min、氮吹溫度60 ℃、氮吹剩余量1 mL[2]。4種藥物的回收率情況見表3、表4。

2.1.3 雞肉的前處理選擇

綜合4種藥物的回收率情況，雞肉的前處理條件設(shè)置為提取液濃度0.4%、均質(zhì)時間1 min、氮吹溫度60 ℃、氮吹剩余量1 mL，4種藥物的回收率情況見表5、表6[3]。

2.1.4 魚肉的前處理選擇

綜合4種藥物的回收率情況，魚肉的前處理條件設(shè)置為提取液濃度0.8%、均質(zhì)時間1 min、氮吹溫度60 ℃、氮吹剩余量1 mL，4種藥物的回收率情況見表7、表8。

2.2 工作曲線繪制

研究通過外標(biāo)法定量，在確定的最佳條件下，根據(jù)每個分析對象的響應(yīng)值，將4種喹諾酮類藥物配制成5.0～800.0 μg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，并繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。由表9可知，該方法分析的每個目標(biāo)物的濃度與質(zhì)譜的響應(yīng)值間具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)（R2）均≥0.999。4種喹諾酮色譜圖峰型清晰、良好，此研究得出的數(shù)據(jù)較準(zhǔn)確。

2.3 回收率與精密度試驗

由表10可知，恩諾沙星、環(huán)丙沙星、培氟沙星和氧氟沙星在50.0 μg/kg添加水平下的回收率分別為94.3%、94.2%、91.3%和90.5%;相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.3%、3.5%、2.6%和4.5%。恩諾沙星、環(huán)丙沙星、培氟沙星和氧氟沙星在100.0 μg/kg添加水平下的回收率分別為92.7%、90.4%、88.5%、87.1%;相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為3.4%、2.2%、3.2%和4.1%。表明該方法準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好，可滿足動物源產(chǎn)品中4種喹諾酮殘留量的檢測需求。

3 結(jié)果與討論

馬春華等[4]用QuEChERS結(jié)合高效液相色譜法快速檢測雞肉中的氟喹諾酮殘留，結(jié)果顯示，最佳的提取溶液為5%甲酸乙腈，2%甲酸乙腈次之。實驗過程中發(fā)現(xiàn)甲酸乙腈溶液濃度越高，樣品越難搖散;甲酸乙腈溶液濃度過低，影響蛋白質(zhì)沉淀，增加雜質(zhì)，所以選擇合適的甲酸乙腈溶液濃度不僅使實驗操作更便利，而且節(jié)省了資源。本研究中雞蛋、豬肉、魚肉選擇的提取物濃度為0.8%，雞肉的提取物濃度為0.4%。在均質(zhì)時間的選擇上，4種農(nóng)產(chǎn)品的最優(yōu)選擇均為1 min，均質(zhì)的目的是為了更好地?fù)u散樣品，使提取更充分，但均質(zhì)時間過長可能會導(dǎo)致沉淀中的雜質(zhì)重新析出。在氮吹溫度的選擇上，雞蛋的最優(yōu)氮吹溫度為40 ℃，豬肉、雞肉和魚肉則為60 ℃，氮吹的主要目的是濃縮檢測類藥物，溫度越高，氮吹速度越快，但易產(chǎn)生不確定性雜質(zhì)以及可能會對喹諾酮類藥物產(chǎn)生破壞。彭文繡[5]在優(yōu)化液質(zhì)聯(lián)用法對氟喹諾酮類藥物殘留的檢測實驗中，將添加無水硫酸鈉、50 ℃旋蒸作為優(yōu)化后的旋蒸條件，研究中并未對不同基質(zhì)的不同情況進(jìn)行對比，與本研究不同基質(zhì)區(qū)分研究不同，因此數(shù)據(jù)有差異。雞蛋的最優(yōu)氮吹溫度為40 ℃，這可能與其脫脂步驟有關(guān)，雞蛋樣品較散，脫脂情況比其他3種農(nóng)產(chǎn)品好，因此氮吹過程中雜質(zhì)少、氮吹快，而其他3種農(nóng)產(chǎn)品中雜質(zhì)相對較多，溫度升高，更易氮吹，加快濃縮時間。在氮吹剩余量的選擇上，雞蛋的最優(yōu)選擇為0.5 mL，豬肉、雞肉和魚肉為1 mL，都與GB/T 20366—2006不同，吹干會導(dǎo)致喹諾酮類殘留黏在瓶口，如定容溶解殘渣不充分，則會造成提取不充分。雞蛋溶液脫脂干凈，氮吹剩余量為0.5 mL，回收率最好，其余3種農(nóng)產(chǎn)品中，雜質(zhì)比雞蛋多，氮吹剩余量選擇1 mL能更好地保留喹諾酮類藥物。本研究中4種喹諾酮含量為5.0～800.0 μg/L，與國家標(biāo)準(zhǔn)中的1.0～50.0 μg/kg相比，檢測的范圍更廣，且線性相關(guān)系數(shù)都≥0.999，故該方法線性關(guān)系良好，檢測結(jié)果較準(zhǔn)確。

4 結(jié)論

綜上所述，雞蛋在提取液濃度0.8%、均質(zhì)時間1 min、氮吹溫度40 ℃、氮吹剩余量0.5 mL的前處理條件下;豬肉在提取液濃度0.8%、均質(zhì)時間1 min、氮吹溫度60 ℃、氮吹剩余量1 mL的前處理條件下;雞肉在提取液濃度0.4%、均質(zhì)時間1 min、氮吹溫度60 ℃、氮吹剩余量1 mL的前處理條件下;魚肉在提取液濃度0.8%、均質(zhì)時間1 min、氮吹溫度60 ℃、氮吹剩余量1 mL的前處理條件下，樣品使用外標(biāo)定量法，色譜條件選擇乙腈+2%甲酸溶液洗脫，正離子掃描，其回收率為67.5%～115.0%，4種喹諾酮類藥物在5.0～800.0 μg/L時，線性關(guān)系良好（R2≥0.999），在50.0 μg/kg、100.0 μg/kg添加水平下，4種喹諾酮回收率的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）為2.2%～4.5%，說明這4種方法有較好的回收率和較高的精確度，可分別用于雞蛋、豬肉、雞肉及魚肉4種喹諾酮殘留的檢測。

參考文獻(xiàn)

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