李中瀚，張成超，翟 衡，高 振，杜遠鵬

（山東農(nóng)業(yè)大學園藝科學與工程學院，作物生物學國家重點實驗室，山東果蔬優(yōu)質高效生產(chǎn)協(xié)同創(chuàng)新中心，泰安271018）

葡萄屬葡萄科（Vitaceae）葡萄屬（VitisL.）[1]，在全球范圍內(nèi)廣泛栽培，是一種經(jīng)濟價值較高的植物[2]。近年來，全球氣候變暖，高溫、強光等極端天氣的頻繁發(fā)生，給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成了巨大損失[3-4]。光合作用是植物在逆境下生長發(fā)育的基礎，對環(huán)境條件極其敏感，其中光強和溫度是主要的影響因素，光系統(tǒng)Ⅱ（PSⅡ）是光合機構中最易受傷害的部位[5]。光照是光合作用的來源[6]，但是光照過強會導致過剩光能，如果不能及時耗散或利用，就會對胡蘿卜素、葉綠素和Dl 蛋白等造成傷害，從而抑制PSⅡ[7]。高溫脅迫主要通過產(chǎn)生過量活性氧，損傷生物膜結構和功能[8]。高溫往往都伴隨著強光，二者對植物造成復合傷害，強光對高溫脅迫具有加劇作用，高溫強光協(xié)同脅迫較高溫或者強光單一脅迫對植物造成的傷害更大[9-10]。夏季持續(xù)的高溫和強光，會造成葡萄葉片卷枯和果實日灼、氣灼，影響果實的產(chǎn)量和品質[11]。

熒光參數(shù)是研究植物抵御逆境的探針，能反映出植物受損傷的程度，在研究高溫和強光復合脅迫方面具有重要作用，能明確損傷主導因素，為葡萄栽培提供依據(jù)。孫永江等研究發(fā)現(xiàn)，光強適宜時，溫度超過37 ℃ PSⅡ就會受到傷害，發(fā)生光抑制，但是強光脅迫時，溫度超過28 ℃就會損傷PSⅡ，隨溫度升高損傷加劇[12]；高溫強光（40 ℃，1 600 μmol·m-2·s-1）處理會使單位面積有活性反應中心數(shù)量（RC/CSm）受到較大的抑制且恢復程度較低，但是弱光可以緩解高溫脅迫[13]。耿慶偉等發(fā)現(xiàn)，高溫和強光增加了PSⅡ活性對臭氧脅迫的敏感性，當高溫和強光復合脅迫時，臭氧對PSⅡ活性抑制程度最大[14]。本文在前人研究的基礎上，對不同葡萄品種抵御高溫強光的能力進行比較，以期為篩選抗高溫強光品種提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

美樂（Vitis viniferacv.Merlot）、品麗珠（Vitis viniferacv.Cabernet Franc）、摩爾多瓦（Moldova，Guzali Kala×SV.12-375）、夏黑（Summer Black，V.labrusca×V.vinifera）、福克（Frontenac，V.riparia89×Landot 4511）、香百川（Vitisspp.Chambourcin）等6 個葡萄品種。

1.2 葉綠素熒光參數(shù)的測定

在長勢大致相同的各個品種相同節(jié)位上各取3片葉，在葉片上隨機打取葉圓片，每個品種各取20片，葉背朝下放入培養(yǎng)皿中，利用水浴鍋與LED 冷光源控制溫度與光強，利用不同的溫度（34、40.5、47 ℃）及光強（800、1 200、1 600 μmol·m-2·s-1）交叉處理1 h。參照王輝等[15]的方法，隨機取7 片葉使用Dual-PAM-100 葉綠素熒光儀（Walz，德國）進行飽和脈沖分析，在測量之前將植株暗適應30 min。暗適應完成后開遠紅光照射測定最小熒光（Fo），之后打開飽和脈沖測定PSⅡ最大熒光產(chǎn)量（Fm）以及P700 中最大氧化量子產(chǎn)量（Pm），然后打開光化光（300 μmol·m-2·s-1），每60 s 打開1次飽和脈沖對其他熒光參數(shù)進行測定，待參數(shù)變化趨于穩(wěn)定后對熒光參數(shù)進行記錄。

另隨機取7 片葉參照卞鳳娥等[16]的方法利用連續(xù)激發(fā)式熒光儀（Handy PEA，Hansatech，英國）測定快速葉綠素熒光誘導曲線，通過JIP-test 分析得到熒光參數(shù)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)使用Excel 2016 進行處理并繪圖，使用SPSS 26 進行單因素方差分析（鄧肯氏多極差檢驗，P＜0.05）。

2 結果與分析

2.1 溫光脅迫對不同葡萄品種葉片Y（Ⅱ）的影響

由圖1 可見，在適光（800 μmol·m-2·s-1）和 中強光（1 200 μmol·m-2·s-1）條件下，隨著溫度的升高，各葡萄品種葉片的Y（Ⅱ）（PSⅡ有效量子效率）均逐漸降低。在強光（1 600 μmol·m-2·s-1）條件下，隨溫度的升高，福克葉片的Y（Ⅱ）先升高后降低，其他品種均逐漸降低。在同一溫度下，隨著光強的升高，Y（Ⅱ）逐漸降低。在適光條件下，溫度為34 ℃時，歐亞種（美樂、品麗珠）的Y（Ⅱ）顯著高于其他品種，歐美雜交種（夏黑）次之，種間雜交種（香百川）最低；溫度為40.5 ℃時，歐亞種（美樂、品麗珠）的Y（Ⅱ）顯著高于其他品種，歐美雜交種（夏黑）次之，種間雜交種（?？?、香百川）最低；溫度為47 ℃時，歐亞種（美樂、品麗珠）的Y（Ⅱ）高于其他品種，歐美雜交種（夏黑）次之，種間雜交種（摩爾多瓦、香百川）最低。中強光和強光與各溫度組合時，基本表現(xiàn)為歐亞種（美樂、品麗珠）的Y（Ⅱ）顯著高于其他品種，歐美雜交種（夏黑）次之，種間雜交種（?？恕⒛柖嗤?、香百川）最低。

圖1 溫光脅迫對不同葡萄品種葉片Y（Ⅱ）的影響

2.2 溫光脅迫對不同葡萄品種葉片NPQ 的影響

在適光（800 μmol·m-2·s-1）、中強光（1 200 μmol·m-2·s-1）和強光（1 600 μmol·m-2·s-1）條件下，隨著溫度的升高，各葡萄品種葉片的NPQ（非光化學淬滅系數(shù)）逐漸升高（圖2）。在各溫度條件下，隨著光強的升高，各葡萄品種葉片的NPQ 也逐漸升高。在適光和中強光條件下，溫度為34 ℃和40.5 ℃時，種間雜交種（摩爾多瓦、?？?、香百川）NPQ 顯著高于其他品種，歐美雜交種（夏黑）次之，歐亞種（美樂、品麗珠）最低；溫度為47 ℃時，夏黑的NPQ 顯著高于其他品種。強光與各溫度組合時，香百川的NPQ 顯著高于其他品種，美樂最低。

圖2 溫光脅迫對不同葡萄品種葉片NPQ 的影響

2.3 溫光脅迫對不同葡萄品種葉片Pm 的影響

在適光（800 μmol·m-2·s-1）、中強光（1 200 μmol·m-2·s-1）和強光（1 600 μmol·m-2·s-1）條件下，隨著溫度的升高，各葡萄品種葉片的Pm（光系統(tǒng)Ⅰ最大量子產(chǎn)額）逐漸降低（圖3）。在各溫度條件下，隨著光強的升高，各葡萄品種葉片的Pm也逐漸降低。在各光照條件下，溫度為34 ℃和40.5 ℃時，夏黑的Pm 高于其他品種，美樂次之，摩爾多瓦最低；溫度為47 ℃時，美樂的Pm 高于其他品種，夏黑次之，摩爾多瓦最低。

圖3 溫光脅迫對不同葡萄品種葉片Pm 的影響

2.4 溫光脅迫對不同葡萄品種葉片ETR（Ⅰ）-ETR（Ⅱ）的影響

由圖4 可見，在適光（800 μmol·m-2·s-1）條件下，隨著溫度的升高，?？?、美樂、品麗珠的ETR（Ⅰ）-ETR（Ⅱ）（環(huán)式電子傳遞）先上升后下降，摩爾多瓦、夏黑逐漸下降，而香百川先略下降而后上升。在中強光（1 200 μmol·m-2·s-1）條件下，隨溫度的升高，?？恕⒛柖嗤吆拖暮诘腅TR（Ⅰ）-ETR（Ⅱ）先上升后下降，香百川和品麗珠逐漸下降，而美樂先略下降而后上升。在強光（1 600 μmol·m-2·s-1）條件下，隨溫度的升高，福克和香百川的ETR（Ⅰ）-ETR（Ⅱ）先上升后下降，美樂、摩爾多瓦、品麗珠和夏黑逐漸下降。在相同溫度條件下，隨光強的升高，?？?、品麗珠和夏黑的ETR（Ⅰ）-ETR（Ⅱ）逐漸升高。在各光照條件下，溫度為34 ℃和40.5 ℃時，夏黑的ETR（Ⅰ）-ETR（Ⅱ）均顯著高于其他品種。溫度為47 ℃時，在適光條件下，香百川的ETR（Ⅰ）-ETR（Ⅱ）顯著高于其他品種；在中強光和強光條件下，摩爾多瓦的ETR（Ⅰ）-ETR（Ⅱ）均顯著高于其他品種。

圖4 溫光脅迫對不同葡萄品種葉片ETR（Ⅰ）-ETR（Ⅱ）的影響

2.5 溫光脅迫對不同葡萄品種葉片ETo/CSo、VJ、Plabs、ΨEo、φPo 的影響

圖 5 表示各葡萄品種在不同溫光處理下ETo/CSo（單位面積葉面積上吸收的光能用于電子傳遞的能量）、VJ（J 點的相對可變熒光）、Plabs（光合性能指數(shù)）、ΨEo（吸收光能用于電子傳遞的量子產(chǎn)額）、φPo（PSⅡ最大光化學效率）等葉綠素熒光參數(shù)的變化，對照的溫度和光強分別為25 ℃、800 μmol·m-2·s-1。與對照相比，在相同光照條件下，隨溫度的升高，各葡萄品種的ETo/CSo、Plabs、φPo 和ΨEo 均表現(xiàn)出下降的趨勢；當溫度相同時，隨著光強的升高，各品種的ETo/CSo、Plabs、φPo和ΨEo 也均表現(xiàn)出下降的趨勢。在各高溫與光照組合下，歐亞種（美樂、品麗珠）的ETO/CSo、Plabs、φPo 和ΨEo 均顯著高于其他品種。與對照相比，在相同光照條件下，隨著溫度的升高，各品種的VJ均表現(xiàn)出上升的趨勢；當溫度相同時，隨光強的升高，各品種的VJ 也均表現(xiàn)出上升的趨勢。在各高溫與光照組合下，歐美雜交種（夏黑）的VJ 均顯著高于其他品種。

圖5 溫光脅迫對不同葡萄品種葉片ETo/CSo、VJ、Plabs、ΨEo、φPo 等熒光參數(shù)的影響

3 討 論

植物在受到脅迫時最先做出反應的部位是原初光合反應的中心PSⅡ，其對應的熒光參數(shù)被稱為研究植物光合生理的探針[17]，本研究通過測定不同葡萄品種的熒光參數(shù)來評價不同品種葉片抵御高溫強光的能力。當葡萄葉片受到溫光脅迫時，捕光色素、類囊體膜蛋白以及放氧復合體（OEC）被破壞，降解了葉綠素[18]，從而降低了實際光化學效率數(shù)值Y（Ⅱ）。歐亞種（美樂、品麗珠）的Y（Ⅱ）顯著高于其他品種，表明歐亞種受破壞程度較輕，對溫光脅迫的抗性較強。NPQ 表示依賴于葉黃素循環(huán)的非輻射能量耗散，反映植物的光保護能力[19]。當植物受到高溫強光脅迫時，捕獲的光能主要以熱能的形式耗散，轉化成光合同化力的光能減少[20-21]。種間雜交種（摩爾多瓦、?？?、香百川）的NPQ 顯著高于其他品種，歐美雜交種（夏黑）次之，歐亞種（美樂、品麗珠）最低，表明歐亞種（美樂、品麗珠）用于熱耗散的能量較少，轉化成光合同化力的能量較多。Pm 表示PSⅠ反應中心P700 最大量子產(chǎn)額，其數(shù)值大小反映了PSⅠ受脅迫的程度。歐亞種（美樂）的Pm 顯著高于其他品種，表明歐亞種PSⅠ受脅迫程度較輕，對溫光脅迫的抗性較強。ETR（Ⅰ）-ETR（Ⅱ）在一定程度上可以表示PSⅠ光修復能力的大小，隨著溫度的升高，適光和中強光條件下，ETR（Ⅰ）-ETR（Ⅱ）有先升高后下降的趨勢，而強光條件下，ETR（Ⅰ）-ETR（Ⅱ）逐漸下降，說明47 ℃的高溫嚴重阻礙了其光修復能力，強光更易導致ETR（Ⅰ）-ETR（Ⅱ）下降。溫度為47 ℃時，在中強光和強光條件下，摩爾多瓦的ETR（Ⅰ）-ETR（Ⅱ）顯著高于其他品種，說明摩爾多瓦PSⅡ與PSⅠ的電子傳遞效率較高，PSⅠ光修復能力較強。

高溫強光脅迫會影響PSⅡ電子傳遞鏈活性和光合綜合性能指數(shù)，光合性能指數(shù)（Plabs）能準確地反映脅迫對光合機構的影響。高溫強光條件下，各葡萄品種葉片的Plabs（光合性能指數(shù)）、φPo（PSⅡ最大光化學效率）和ΨEo（吸收光能用于電子傳遞的量子產(chǎn)額）顯著降低，VJ（J 點的相對可變熒光）升高，同時破壞了葉片中的葉綠素，從而降低了ETo/CSo（單位面積葉面積上吸收的光能用于電子傳遞的能量）。在各個溫光組合下，歐亞種（美樂、品麗珠）的Plabs、ETo/CSo、φPo 和ΨEo均顯著高于其他品種，說明歐亞種的PSⅡ電子傳遞鏈活性較高，耐高溫強光；歐美雜交種（夏黑）的VJ 均顯著高于其他品種，VJ 表示受脅迫的程度，說明夏黑不耐高溫強光。

4 結 論

歐亞種（美樂、品麗珠）對溫光脅迫適應性強，種間雜交種（?？恕⑾惆俅?、摩爾多瓦）對溫光脅迫適應性較弱，歐美雜交種（夏黑）對于高溫強光的適應性則介于二者之間。