焦 匯 楠

(鄭州市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 鄭州 450018)

免疫學(xué)血小板減少癥，又稱為特發(fā)性血小板減少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP)，是臨床上以血小板減少為主要表現(xiàn)的出血性疾病，血小板生成不足及破壞增加是ITP病程中的重要特征，但具體的調(diào)控機(jī)制仍未闡明。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為體液免疫應(yīng)答紊亂、自身抗體分泌異常與ITP的發(fā)生密切相關(guān)，近年來越來越多的新觀點(diǎn)指出體液免疫的改變并不足以完全解釋ITP的病變機(jī)制，其病情發(fā)展過程同時還涉及細(xì)胞免疫應(yīng)答的紊亂、多種炎癥細(xì)胞因子和趨化細(xì)胞因子的分泌發(fā)生改變[1～2]。CD4+T細(xì)胞是調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫應(yīng)答及體液免疫應(yīng)答的細(xì)胞群，包含具有不同功能的亞群，其中，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell，Treg)具有免疫抑制活性，能夠抑制細(xì)胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答，其含量減少被證實(shí)與多種自身免疫性疾病的發(fā)生有關(guān)[3～4]。為了明確CD4+CD25+CD127lowTreg細(xì)胞在ITP進(jìn)程中所起到的作用，本研究具體分析了ITP患者外周血CD4+CD25+CD127low-Treg細(xì)胞與炎癥因子、趨化因子的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年1月～2020年12月期間在我院診斷為ITP的120例患者作為研究的ITP組，均符合ITP的診斷標(biāo)準(zhǔn)且未接受過糖皮質(zhì)激素、免疫制劑的治療，其中，男68例，女52例，年齡6～12歲，平均年齡(8.62±0.93)歲；另取同期在我院兒科門診進(jìn)行健康體檢的兒童100例作為對照組，均無急慢性感染、自身免疫性疾病、惡性腫瘤等疾病，年齡6～12歲，平均年齡(8.45±0.89)歲。兩組間一般資料的比較無顯著性差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2 外周血中CD4+CD25+CD127lowTreg含量的測定

入組后采集兩組受試者的空腹靜脈血1mL，EDTA抗凝后避光孵育熒光標(biāo)記的CD4、CD25、CD127單克隆抗體20min，而后加入溶血素并繼續(xù)避光孵育8min，最后用PBS洗滌、離心2遍并重懸，在流式細(xì)胞儀上測定CD4+CD25+-CD127lowTreg的含量。

1.3 血清細(xì)胞因子含量的測定

入組后采集兩組受試者的空腹靜脈血5mL，凝血后以3 000轉(zhuǎn)/min的速度離心20min，分離血清后采用酶聯(lián)免疫吸附法測定干擾素-γ(IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-2(IL-2)、白細(xì)胞介素-17A(IL-17A)、CC類趨化因子配體5(CCL5)、CC類趨化因子配體11(CXCL11)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)的含量。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 外周血中CD4+CD25+CD127lowTreg細(xì)胞的比較

ITP組和對照組外周血中CD4+CD25+CD127lowTreg細(xì)胞的含量分別為(5.86±0.74)%、(8.62±0.94)%。經(jīng)t檢驗(yàn)，ITP組患者外周血中CD4+CD25+CD127lowTreg細(xì)胞的含量明顯低于對照組，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=24.360、P=0.000)。

2.2 血清中促炎及抑炎細(xì)胞因子的比較

ITP組患者血清中促炎細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-17A的含量明顯高于對照組，抑炎細(xì)胞因子IL-4、IL-5、TGF-β、IL-10的含量明顯低于對照組，兩組間促炎細(xì)胞因子和抑炎細(xì)胞因子的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1～2。

表1 兩組間促炎因子的比較

表2 兩組間抑炎因子的比較

2.3 血清中趨化因子的比較

ITP組患者血清中趨化因子CCL5、CXCL11、MCP-1的含量明顯高于對照組，兩組趨化因子的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組間趨化因子的比較

2.4 外周血中CD4+CD25+CDl27lowTreg細(xì)胞與血清指標(biāo)的相關(guān)性

CD4+CD25+CD127lowTreg細(xì)胞的含量與IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-17A、CCL5、CXCL11、MCP-1的含量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.615、-0.688、-0.587、-0.535、-0.493、-0.528、-0.703，P=0.010、0.004、0.013、0.024、0.034、0.025、0.000)，與IL-4、IL-5、TGF-β、IL-10的含量呈正相關(guān)(r=0.626、0.591、0.652、0.571，P=0.009、0.012、0.007、0.018)。

3 討論

ITP的發(fā)病機(jī)制尚不明確，但免疫應(yīng)答紊亂與疾病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系逐步得到證實(shí)，細(xì)胞免疫應(yīng)答及體液免疫應(yīng)答紊亂過程中細(xì)胞因子分泌的異常能夠通過不同途徑來破壞血小板，造成血小板數(shù)目減少。CD4+T細(xì)胞是參與細(xì)胞免疫應(yīng)答及體液免疫應(yīng)答調(diào)控的細(xì)胞群，其中，Treg亞群具有顯著的免疫抑制活性，能夠通過細(xì)胞間接觸抑制、分泌抑制性細(xì)胞因子、競爭性抑制等途徑來使免疫應(yīng)答發(fā)生抑制[5]。CD4、CD25是Treg細(xì)胞表面主要的標(biāo)志分子，而CD127是非調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表面的標(biāo)志分子，通過測定CD4+CD25+CD127low細(xì)胞能夠反應(yīng)Treg的含量[6～7]。為了明確Treg細(xì)胞在ITP發(fā)生發(fā)展過程中所起的作用，本研究通過分析外周血中CD4+-CD25+CD127lowTreg細(xì)胞的變化來反應(yīng)Treg的變化，ITP組外周血中CD4+CD25+CD127lowTreg細(xì)胞的含量明顯低于對照組。這一結(jié)果表明Treg細(xì)胞減少與ITP的發(fā)病密切相關(guān)，結(jié)合Treg的免疫抑制活性推測，Treg細(xì)胞的減少能夠使其免疫抑制活性減弱，進(jìn)而引起多種細(xì)胞因子分泌發(fā)生改變并參與對血小板的破壞、造成ITP的發(fā)生。

ITP病程中促炎細(xì)胞因子的大量分泌能夠通過多種途徑引起血小板的破壞。Th1和Th17細(xì)胞是體內(nèi)促炎細(xì)胞因子的重要來源，所分泌的促炎細(xì)胞因子包括IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-17A[8]。IFN-γ能夠促進(jìn)B細(xì)胞的增殖及向漿細(xì)胞的分化，進(jìn)而分泌血小板相關(guān)抗體，并使巨噬細(xì)胞對血小板的破壞效應(yīng)增強(qiáng)。一方面，TNF-α能夠直接增強(qiáng)T細(xì)胞的增殖和活化并通過細(xì)胞毒效應(yīng)來破壞血小板；另一方面，能夠增強(qiáng)IFN-γ促進(jìn)B細(xì)胞增殖、分化的效應(yīng)，并通過抗體的分泌來破壞血小板。IL-2能夠增強(qiáng)T細(xì)胞所介導(dǎo)的細(xì)胞毒效應(yīng)來破壞血小板。IL-17A具有促進(jìn)炎癥細(xì)胞、淋巴細(xì)胞黏附、浸潤的作用，通過增加細(xì)胞浸潤來增強(qiáng)血小板的破壞效應(yīng)[9]。本研究對ITP患者血清中促炎細(xì)胞因子含量的分析發(fā)現(xiàn)：ITP組患者血清中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-17A的含量明顯高于對照組。這一結(jié)果表明促炎細(xì)胞因子分泌的增多與ITP的發(fā)生有關(guān)，上述促炎細(xì)胞因子由Th1、Th17細(xì)胞分泌產(chǎn)生，進(jìn)而也說明Th1、Th17細(xì)胞分泌功能的增強(qiáng)與ITP的發(fā)生有關(guān)。通過進(jìn)一步分析ITP患者體內(nèi)Treg細(xì)胞與促炎細(xì)胞因子的關(guān)系可知：CD4+CD25+CD127lowTreg細(xì)胞與IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-17A呈負(fù)相關(guān)，說明ITP病程中Treg細(xì)胞的減少能夠引起促炎細(xì)胞因子分泌增多、Th1及Th17細(xì)胞功能增強(qiáng)，進(jìn)而參與疾病的發(fā)生及發(fā)展。

Treg一方面能夠直接抑制Th1、Th17分泌促炎細(xì)胞因子，另一方面也能直接分泌抑炎細(xì)胞因子TGF-β及IL-10、促進(jìn)Th2細(xì)胞分化成熟并分泌抑炎細(xì)胞因子IL-4、IL-5。TGF-β對Th17細(xì)胞的分化成熟具有抑制作用，IL-10及IL-4、IL-5對Th1細(xì)胞的分化成熟具有抑制作用，在抑炎細(xì)胞因子的作用下，Th1和Th17所介導(dǎo)的促炎效應(yīng)減弱、對血小板的破壞也減弱[10]。本研究對ITP患者血清中抑炎細(xì)胞因子含量的分析發(fā)現(xiàn)：ITP組患者血清中IL-4、IL-5、TGF-β、IL-10的含量明顯低于對照組，說明抑炎細(xì)胞因子分泌的減少與ITP的發(fā)生有關(guān)，上述抑炎細(xì)胞因子由Th2、Treg細(xì)胞分泌產(chǎn)生，進(jìn)而也提示Th2細(xì)胞分泌功能的減弱與ITP的發(fā)生有關(guān)。進(jìn)一步分析ITP患者體內(nèi)Treg細(xì)胞與抑炎細(xì)胞因子的關(guān)系可知：CD4+CD25+CD127lowTreg細(xì)胞與IL-4、IL-5、TGF-β、IL-10呈正相關(guān)，由此說明ITP病程中Treg細(xì)胞的減少能夠引起抑炎細(xì)胞因子分泌增多、Th2細(xì)胞功能增強(qiáng)，進(jìn)而參與疾病的發(fā)生及發(fā)展。

在ITP的病程中，免疫細(xì)胞、炎癥細(xì)胞異常分化后需要通過向血小板的趨化運(yùn)動來發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng)，趨化因子在該過程中起到重要作用。CCL5是CCR5的高親和力配體、CXCL11是CXCR3的高親和力配體，兩種受體在Th1細(xì)胞表面均有較高的表達(dá)量，CCR5和CXCL11能夠促進(jìn)Th1向血小板的趨化并介導(dǎo)血小板的破壞[11]；MCP-1是作用于單核巨噬細(xì)胞的趨化因子，能夠通過單核巨噬細(xì)胞的活性來破壞血小板[12]。本研究對ITP患者血清中趨化因子含量的分析發(fā)現(xiàn)：ITP組患者血清中CCL5、CXCL11、MCP-1的含量明顯低于對照組，這一結(jié)果表明趨化因子分泌的增多與ITP的發(fā)生有關(guān)，上述趨化因子能夠介導(dǎo)Th1細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞發(fā)生趨化運(yùn)動，進(jìn)而增強(qiáng)了Th1細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞對血小板的破壞效應(yīng)。進(jìn)一步分析ITP患者體內(nèi)Treg細(xì)胞與趨化因子的關(guān)系可知：CD4+CD25+CD127lowTreg細(xì)胞與CCL5、CXCL11、MCP-1呈負(fù)相關(guān)，由此說明ITP病程中Treg細(xì)胞的減少能夠增加趨化因子的分泌，進(jìn)而增強(qiáng)趨化因子所介導(dǎo)的血小板破壞效應(yīng)并參與疾病的發(fā)生及發(fā)展。

綜上所述，ITP患者外周血CD4+CD25+CD127lowTreg細(xì)胞的含量明顯減少，Treg細(xì)胞的變化能夠增加促炎因子及趨化因子、減少抑炎因子的分泌，進(jìn)而參與病情的發(fā)展變化。