李晶晶，田 賜，王明思，劉祿威，李沐陽，馬樹杰，張利輝，董金皋

（河北農(nóng)業(yè)大學植物保護學院，保定 071001）

農(nóng)田雜草是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的重要問題之一，其具有種類繁多、分布廣泛、危害性大的特點，給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成了巨大損失[1-3]。化學除草劑的出現(xiàn)極大地推動了雜草防治效率和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的發(fā)展，在雜草防治中發(fā)揮著無法替代的作用[4,5]。但化學除草劑的大量使用，也造成了土壤污染、雜草抗藥性以及農(nóng)藥殘留等系列問題[7,8]。植物源除草劑具有易降解、作用方式多樣、不易產(chǎn)生抗藥性等特點，是新農(nóng)藥創(chuàng)制的熱點之一[9,10]。目前世界上已發(fā)現(xiàn) 30多科植物含有百余種天然除草化合物，其中有些已被開發(fā)成天然除草劑[11]。纖精酮是從紅千層中分離得到的植物源除草先導化合物，以其為模板開發(fā)出了三酮類除草劑[12]；壬酸是從牻牛兒苗科植物中分離得到了羧酸類除草化合物，并得到專利保護和推廣應用[13]；1,8-桉樹腦是植物產(chǎn)生的天然揮發(fā)性單萜，對馬唐等具有較好的除草活性[14]。因此，對具有除草作用的植物提取物及其次生代謝產(chǎn)物進行研究，有望發(fā)現(xiàn)新穎除草機制的化合物，可為新型天然除草劑的開發(fā)提供候選材料和理論依據(jù)。

本研究采用種子萌發(fā)法測定了113種植物乙醇提取物對馬唐和反枝莧種子萌發(fā)的抑制作用，采用平皿法測定了對雜草幼根、幼芽生長的抑制作用；進一步評價了提取物對雜草幼根、幼芽的生長毒力，以期篩選出具較高除草活性的植物種類，為開發(fā)新型植物源除草劑提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 供試雜草種子 馬唐Digitaria sanguinlis和反枝莧Amaranthus retroflexus種子由河北農(nóng)業(yè)大學植物保護學院農(nóng)藥實驗室提供。

1.1.2 供試植物 供試植物113種，分屬56個科，購買于河北省安國市冷背藥材有限公司，詳細名稱見表1。

表1 113種植物乙醇提取物對反枝莧和馬唐種子萌發(fā)的影響Table 1 The effects of ethanol extracts from 113 kinds of traditional Chinese medicine on seed germination ofA. retroflexusandD. sanguinlis

續(xù)表1

續(xù)表1

1.2 植物乙醇提取物的制備

將上述113種植物放于40 ℃烘箱內(nèi)烘干，粉碎后過孔徑0.4 mm篩，采用超聲波提取法提取供試植物樣品[15]。具體如下：分別稱取供試植物干粉20 g，加入無水乙醇，按料（g）液（mL）比為1:10進行提取，每次30 min，重復提取3次，過濾3次，濾液在52 ℃減壓濃縮得乙醇浸膏，將乙醇浸膏配置成1 g DW/mL的母液。

1.3 除草活性的測定

1.3.1 113 種植物乙醇提取物對馬唐和反枝莧種子萌發(fā)的影響 試驗采用種子萌發(fā)法[16]，在培養(yǎng)皿（直徑為9 cm，下同）中鋪兩層濾紙，處理組加入0.5 g DW/mL的植物乙醇提取液1.0 mL，對照組加入乙醇1.0 mL，待乙醇完全揮發(fā)后，加入蒸餾水4 mL，再將20粒供試植物種子在濾紙上擺成一行，所有處理重復3次，置于培養(yǎng)箱（25±1）℃、相對溫度50%～70%、光周期14L:10D中培養(yǎng)，期間適時補充水分，3 d后觀察雜草種子的萌發(fā)情況，按照公式計算：種子萌發(fā)抑制率＝（對照種子萌發(fā)數(shù)—處理種子萌發(fā)數(shù)）/對照種子萌發(fā)數(shù)×100%。

1.3.2 113 種植物乙醇提取物對馬唐和反枝莧種子幼根、幼芽生長的影響 選取對種子萌發(fā)抑制率較高的中藥提取物，進一步測定其對馬唐和反枝莧種子幼根、幼芽的影響。在試驗前1 d浸泡雜草種子，使其吸足水分，然后置于25 ℃恒溫箱中催芽24 h至種子露白[17]。在培養(yǎng)皿中鋪兩層濾紙，處理組加入植物乙醇提取液1.0 mL，對照組加入乙醇1.0 mL，待乙醇完全揮發(fā)后，加入蒸餾水4 mL，再將20粒供試植物種子在濾紙上擺成一行，置于上述培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，期間適時補充水分，3～7 d后（依據(jù)幼苗生長速度）測量種子主根（最長根）及芽長，按照公式計算幼根（芽）生長抑制率。幼根（芽）生長抑制率＝[對照根（芽）長度—處理根（芽）長度]/對照根（芽）長度×100%。

對幼根、幼芽生長抑制較好的中藥材提取物進一步進行毒力測定。采用二倍稀釋法，將提取物稀釋為5個待測濃度，每個濃度重復3次，每個培養(yǎng)皿放置20粒雜草種子。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

采用SPSS 22.0軟件的單因素方差分析法求出抑制中濃度（IC50）及95%置信區(qū)間、毒力回歸方程等相關參數(shù)。

2 結果與分析

2.1 113種植物乙醇提取物對反枝莧和馬唐種子萌發(fā)的影響

采用種子萌發(fā)法測定了113種植物乙醇提取物對反枝莧和馬唐種子萌發(fā)的影響，結果見表1。由表1可知，在供試濃度125 mg DW/mL下，40種植物乙醇提取物對反枝莧種子萌發(fā)抑制率在80%以上，15種植物乙醇提取物抑制率為50%到80%，有64種植物乙醇提取物抑制率為低于50%。其中茖蔥、建蘭、楮、烏藥、大葉釣樟、牡丹皮、木香、豨薟、漏蘆、佩蘭、馬蹄決明、鹿藿、紫背浮萍、條葉龍膽、木芙蓉、蜀葵、九頭獅子草、安息香樹、昆明水金鳳、泡桐、蘇鐵蕨、短葉羅漢松、竹葉菜、馬蹄金、杜衡、橄欖和蜈蚣萍的種子萌發(fā)抑制率最高，均達到100%。

15種植物乙醇提取物對馬唐種子萌發(fā)抑制率在80%以上，其中大黃、牡丹皮、大葉三升麻、佩蘭、朝鮮淫羊藿、楸樹、安息香樹、泡桐、短葉羅漢松和杜衡等 10種植物乙醇提取物的種子萌發(fā)抑制率最高，均達到100%。

2.2 113種植物乙醇提取物對反枝莧和馬唐幼根和幼芽的影響

2.2.1 對反枝莧幼根和幼芽的生長抑制作用 選取32種對反枝莧種子萌發(fā)抑制率較高的中藥乙醇提取物，測定其對幼根、幼芽生長的影響，結果如表2所示。由表2可見，在供試濃度125 mg DW/mL下，測定的32種中藥乙醇提取物對反枝莧幼根和幼芽生長均具有一定的抑制作用，其中牡丹皮、木香、佩蘭、鹿藿和短葉羅漢松等5種提取物對幼根的抑制率最強，均為100%；紫背浮萍、蜈蚣萍、薜荔、茖蔥、馬蹄金、泡桐、杜衡和安息香樹對幼根的抑制率在90%以上，分別為97.12%、94.88%、94.88%、94.56%、93.36%、93.29%、92.65%和 92.01%；木芙蓉、蘇鐵蕨、烏藥、楮、九頭獅子草、苦葫蘆、建蘭、竹葉菜和秋子梨對幼根的抑制率在80%以上，抑制率分別為89.45%、89.13%、89.13%、86.26%、85.87%、84.66%、84.66%、83.70%和80.51%。

表2 32種植物乙醇提取物對反枝莧幼根和幼芽的影響Table 2 The effects of 32 kinds of plant ethanol extracts on the root and stem ofA. retroflexus

牡丹皮、木香、佩蘭、鹿藿和短葉羅漢松等5種提取物對幼芽的抑制率最強，為100%；紫背浮萍、蜈蚣萍、薜荔、竹葉菜和安息香樹的抑制率在90%以上，分別為96.92%、94.61%、93.84%、92.01%和90.76%；烏藥、苦葫蘆、馬蹄金、九頭獅子草、楮和茖蔥對幼芽的抑制率在 80%以上，分別為 89.23%、86.92%、84.61%、84.61%、83.07%和82.30%。

2.2.2 對馬唐幼根和幼芽的生長抑制作用 選取了10種對馬唐種子萌發(fā)抑制率為100%的植物提取物測定其對馬唐幼根、幼芽的生長抑制作用。由表3可知，在62.5 mg DW/mL供試濃度下，木香、杜衡、泡桐、大葉三生麻和安息香樹對馬唐幼根的抑制率在 80%以上，分別為 95.25%、90.26%、85.26%、83.24%和80.36%；杜衡、木香、大葉三升麻、泡桐和佩蘭對馬唐幼芽的抑制率在80%以上，分別為90.26%、90.25%、88.85%、85.25%和80.29%。

表3 10種植物乙醇提取物對馬唐幼根和幼芽生長抑制的影響Table 3 The growth inhibition effects of 10 kinds of plant ethanol extracts on the root and stem ofD. sanguinlis

2.3 植物乙醇提取物對雜草種子生長的毒力

2.3.1 6 種植物乙醇提取物對反枝莧幼根和幼芽生長的毒力 為進一步篩選對反枝莧幼根抑制活性高的植物種類，測定了木香、牡丹皮、短葉羅漢松、鹿藿、佩蘭和紫背浮萍對反枝莧幼根的室內(nèi)毒力。結果表明，鹿藿、佩蘭、木香、短葉羅漢松、紫背浮萍、牡丹皮對反枝莧幼根的IC50值分別為1.03、2.24、2.46、2.59、2.79和2.85 mg DW/mL，其中抑制活性最高的為鹿藿乙醇提取物，其他5種提取物的活性相當。

木香、牡丹皮、短葉羅漢松、鹿藿和佩蘭對反枝莧幼芽也具有較強的抑制作用，活性排序為鹿藿≥木香≥短葉羅漢松≥牡丹皮≥佩蘭，其IC50分別為4.52、7.05、24.17、31.21和32.72 mg DW/mL（表4）。

表4 6種供試植物提取物對反枝莧種子幼根和幼芽的生長抑制作用Table 4 The growth inhibition effects of 6 kinds of test plant extracts on the root and stem ofA.retroflexus

2.3.2 8種植物乙醇提取物對馬唐幼根和幼芽的生長抑制毒力 根據(jù)表5可知，楸樹、木香、泡桐、佩蘭、杜衡、安息香樹和大葉三升麻對馬唐幼根具有較強的抑制作用，活性排序為木香≥杜衡≥泡桐≥大葉三生麻≥安息香樹≥佩蘭≥楸樹，其IC50分別為5.93、8.72、13.93、15.20、19.20、28.70和39.30 mg DW/mL。

表5 8種供試植物提取物對馬唐種子幼根和幼芽的生長抑制作用Table 5 The growth inhibition effects of 8 kinds of test plant extracts on the root and stem ofD. sanguinalis

楸樹、木香、泡桐、佩蘭、杜衡、安息香樹、短葉羅漢松和大葉三升麻對馬唐幼芽也具有較強的抑制作用，活性排序為杜衡≥木香≥大葉三升麻≥泡桐≥佩蘭≥安息香樹≥短葉羅漢松≥楸樹，IC50分別為7.78、8.13、12.91、15.27、22.39、23.43、42.12 和 48.22 mg DW/mL。

3 討論

我國中藥植物資源豐富且獨具特色，已經(jīng)引起植物源農(nóng)藥研究者的廣泛關注，但是通過文獻調(diào)研發(fā)現(xiàn)對中藥植物開展除草活性篩選的研究報道較少[18-20]。本研究通過對53科113種中藥植物進行除草活性篩選，發(fā)現(xiàn)在125 mg DW/mL濃度下，對反枝莧種子萌發(fā)抑制率在80%以上的有40種，占所測試植物總數(shù)的35.40%；對馬唐種子萌發(fā)抑制率在80%以上的有15種，占所測試植物總數(shù)的13.27%；牡丹皮、佩蘭、木香、鹿藿和短葉羅漢松等5種中藥植物對反枝莧和馬唐幼根、幼芽的抑制率為100%。由此可以看出，篩選出的具有除草活性的植物種類所占比例較高，故有必要加強中藥植物除草活性篩選，以期獲得更多具有開發(fā)價值的除草植物資源。

本研究發(fā)現(xiàn)，牡丹皮、佩蘭、木香、鹿藿和短葉羅漢松等植物提取物對馬唐和反枝莧不僅具有種子萌發(fā)抑制作用，而且對幼根、幼芽生長的抑制作用較強，對反枝莧幼根的IC50分別為2.85、2.24、2.46、1.03和2.58 mg DW/mL。郭鳳和羅小勇[21]測定了牡丹葉提取物對生菜Lactuca sativaL.、稗Echinochloa crusgalli、播娘蒿Descurainia sophia等幼苗生長的抑制作用，結果顯示，該提取物對播娘蒿胚根或胚芽的IC50為1.02～9.65 g/L，與本研究結果較為一致。研究者已從牡丹中分離得到了芍藥甙、丹皮酚、二羥基苯乙酮等化合物[22,23]，但除草活性是否與這些物質(zhì)有關需要進一步研究。佩蘭、木香、鹿藿和短葉羅漢松具有抗菌、抗炎、抗過敏、抗腫瘤等藥用活性[24-27]，其農(nóng)用活性研究報道較少，除草活性為首次報道。此外，牡丹皮、佩蘭、木香、鹿藿和短葉羅漢松在我國分布廣泛、易于繁殖、產(chǎn)量較高、價格便宜，具備開發(fā)成新型植物源除草劑的良好前景。

由此可見，牡丹皮、佩蘭、木香、鹿藿和短葉羅漢松5種植物提取物的除草活性較好，具有作為植物源除草劑的價值。本研究為高效低毒植物源除草劑的發(fā)掘提供了線索，為新型植物源除草劑的創(chuàng)制奠定了基礎。