許明珠，董蘭芳，李恒慧，李世才，陳瑞芳，張 琴，彭慧婧，龍子揚(yáng)，林立蔚

(1.廣西海洋研究所有限責(zé)任公司/廣西海水養(yǎng)殖新品種繁育工程技術(shù)研究中心，廣西 北海 536000；2.合浦縣水產(chǎn)技術(shù)推廣站，廣西 合浦 536100；3.廣西科學(xué)院，南寧 530007；4.廣西民族大學(xué)海洋與生物技術(shù)學(xué)院/廣西多糖材料與改性實(shí)驗(yàn)室/廣西高校微生物與植物資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南寧 530006)

【研究意義】方格星蟲(chóng)(Sipunculusnudus)又稱(chēng)光裸方格星蟲(chóng)、光裸星蟲(chóng)、沙蟲(chóng)，是一種具體腔、不分節(jié)的海洋蠕蟲(chóng)，隸屬于方格星蟲(chóng)科方格星蟲(chóng)屬，在我國(guó)主要分布于熱帶和亞熱帶海域，尤其以廣西沿海資源最豐富[1]。方格星蟲(chóng)營(yíng)養(yǎng)豐富，蛋白含量達(dá)79.90%，且含有20種脂肪酸和多種微量元素，兼具藥理作用，深受消費(fèi)者追捧，是廣西沿海一種重要的海洋經(jīng)濟(jì)生物[2-5]。自2008年廣西海洋研究所有限責(zé)任公司突破規(guī)?；斯っ绶N技術(shù)以來(lái)，在廣西和廣東沿海地區(qū)掀起了方格星蟲(chóng)養(yǎng)殖熱潮。目前市場(chǎng)上尚未研發(fā)出一款經(jīng)濟(jì)高效的方格星蟲(chóng)配方飼料，方格星蟲(chóng)仍以灘涂粗放養(yǎng)殖模式養(yǎng)殖為主，產(chǎn)量難以滿(mǎn)足市場(chǎng)需求，其產(chǎn)品價(jià)格日益增高。廣西海洋研究所方格星蟲(chóng)研究團(tuán)隊(duì)長(zhǎng)期致力于方格星蟲(chóng)飼料營(yíng)養(yǎng)研究，已完成三大營(yíng)養(yǎng)元素、糖源及單一微量元素最適含量探討。營(yíng)養(yǎng)元素間存在復(fù)雜的相互促進(jìn)和抑制作用，銅和鋅是方格星蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育的必需微量元素，受環(huán)境因素脅迫較多，但對(duì)其相互作用了解甚少。因此，開(kāi)展微量元素銅鋅交互效應(yīng)對(duì)方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)生長(zhǎng)和生理機(jī)能影響研究，對(duì)研發(fā)人工配合飼料以促進(jìn)方格星蟲(chóng)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】銅是血液中血藍(lán)蛋白的重要組分，也是機(jī)體中細(xì)胞色素C氧化酶和超氧化物歧化酶(SOD)的組分，參與營(yíng)養(yǎng)代謝和免疫等系列重要機(jī)體功能[6]。與無(wú)機(jī)礦物質(zhì)相比，養(yǎng)殖動(dòng)物對(duì)有機(jī)螯合礦物質(zhì)的吸收率更高，常作為有效銅源添加至飼料中[7]。已有研究表明，飼料中適宜含量的銅能提高日本沼蝦(Macrobrachiumnipponense)幼蝦的生長(zhǎng)性能和免疫力，其血藍(lán)蛋白的表達(dá)顯著受飼料銅添加量影響，同時(shí)飼料銅和鋅添加量均可影響日本沼蝦生長(zhǎng)、抗氧化和免疫性能，并在抗氧化和免疫性能方面存在交互效應(yīng)[8]；飼料中添加10.0 mg/kg銅元素可顯著提高斑點(diǎn)叉尾鮰(Ictaluruspunctatus)的增重率，并降低飼料系數(shù)，且具有最高的血C銅和鋅—SOD活性[9]。同樣，鋅廣泛分布于機(jī)體內(nèi)中，素有有“生命元素”之美稱(chēng)，是機(jī)體內(nèi)多種金屬酶的組成成分或激活劑，參與機(jī)體生長(zhǎng)代謝、抗氧化和免疫等生理過(guò)程[10]。飼料中添加鋅對(duì)方斑東風(fēng)螺(Babyloniaareolate)[9]的生長(zhǎng)具有明顯影響，其軟體部分鋅含量隨著飼料鋅添加量的增加而顯著增加，并顯著影響其內(nèi)臟團(tuán)中多種酶的活力。仲曉麗[11]研究表明，飼料銅和鋅交互僅對(duì)皺紋盤(pán)鮑(HaliotisdiscushannaiIno)的軟體部蛋白含量、肝胰臟AKP酶活性和鐵元素含量具有顯著影響，并表現(xiàn)出一定的協(xié)同作用。李俊偉等[12]通過(guò)開(kāi)展方格星蟲(chóng)礦物質(zhì)元素組成及其生物富集特征研究，發(fā)現(xiàn)方格星蟲(chóng)對(duì)不同元素的生物富集能力不同，體壁銅元素和鋅元素含量分別為2.8和8.4 mg/kg；本研究團(tuán)隊(duì)前期開(kāi)展方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)飼料銅元素和鋅元素單因素試驗(yàn)證實(shí)，方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)飼料適宜的銅添加水平為7.5～11.2 mg/kg[13]，適宜的鋅添加水平為43.7 mg/kg[14]。銅和鋅是同一副族元素，在化學(xué)性質(zhì)上具有較多相似之處，且二者雜化軌道的化合價(jià)相似，致使這2種元素在吸收和金屬酶合成時(shí)互相競(jìng)爭(zhēng)蛋白的親和部位，導(dǎo)致彼此間產(chǎn)生拮抗作用[15-17]?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前，針對(duì)方格星蟲(chóng)飼料銅鋅交互影響的研究鮮見(jiàn)報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】以蛋氨酸銅為銅源、蛋氨酸鋅為鋅源，設(shè)計(jì)3×3雙因素正交試驗(yàn)，探討銅、鋅交互效應(yīng)對(duì)方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)生長(zhǎng)和生理機(jī)能的影響，確定飼料中的銅和鋅適宜添加量，以期為開(kāi)發(fā)高效環(huán)保的方格星蟲(chóng)人工配合飼料提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)采自廣西北海市廣西海洋研究所有限責(zé)任公司海水增養(yǎng)殖基地，為同批人工孵化苗種，平均體重(14.43±0.21)mg/條，自然狀態(tài)下體長(zhǎng)為1.21～1.67 cm。制作飼料前，分別對(duì)各原料進(jìn)行蛋白、脂肪和能值測(cè)定，作為制定和調(diào)整飼料配方的依據(jù)。試驗(yàn)用基礎(chǔ)飼料主要由酪蛋白、明膠、魚(yú)油、糊精、卵磷脂、褐藻酸鈉、微晶纖維素、維生素預(yù)混料和礦物質(zhì)預(yù)混料組成，并用蛋氨酸銅和蛋氨酸鋅調(diào)節(jié)試驗(yàn)飼料中的銅和鋅元素含量(表1)。根據(jù)方格星蟲(chóng)銅、鋅單因素試驗(yàn)結(jié)果，以適宜銅添加水平為7.5～11.2 mg/kg，適宜鋅添加水平為43.7 mg/kg為基準(zhǔn)，低于適宜添加量為低含量飼料，高于適宜添加量為高含量(過(guò)量)飼料。分別向基礎(chǔ)飼料1～3號(hào)、4～6號(hào)和7～9號(hào)添加29.4、58.8和117.6 mg/kg蛋氨酸銅，換算成銅添加量分別為5.0(Cu1)、10.0(Cu2)和20.0(Cu3)mg/kg。添加蛋氨酸銅后，1、4和7號(hào)飼料添加蛋氨酸鋅21.1 mg/kg，2、5和8號(hào)飼料添加蛋氨酸鋅42.1 mg/kg，3、6和9號(hào)飼料添加蛋氨酸鋅84.2 mg/kg，換算成鋅添加量分別為20.0(Zn1)、40.0(Zn2)和80.0(Zn3)mg/kg(表2)。飼料制作過(guò)程：先將主要原料粉碎過(guò)100目篩，按照添加量從少至多逐級(jí)稱(chēng)重并混合均勻，與魚(yú)油搓勻后再加少量水搓勻，烘干粉碎制成過(guò)100目篩的微顆粒飼料，裝袋標(biāo)號(hào)備用。

表1 試驗(yàn)飼料基礎(chǔ)配方及營(yíng)養(yǎng)成分(干物質(zhì))

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 養(yǎng)殖時(shí)間為2018年8—10月，養(yǎng)殖周期為8周。選用相同規(guī)格(65 cm×55 cm×45 cm)的27個(gè)水槽，在水槽底部均勻鋪設(shè)1層(厚3～4 cm)細(xì)砂，用淡水徹底清洗消毒并經(jīng)海水浸泡1 d，加入海水約40 cm，此為方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)的棲息地。選用健康無(wú)病、同一批次繁育的方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)8100條，以300條為1個(gè)重復(fù)，3個(gè)重復(fù)1組，隨機(jī)分成9組，分別飼喂9種水平銅和鋅元素混合的人工微顆粒飼料(處理1～9)。投喂方法為過(guò)量投喂，即保證沙子表面有少量未食用完全的餌料。飼養(yǎng)采用自然光照周期，24 h連續(xù)微充氧，水溫維持在26～30 ℃，鹽度維持在18‰～22‰，溶解氧大于5.0 mg/L。

表2 各處理飼料的銅和鋅添加量

1.2.2 測(cè)定項(xiàng)目及方法 飼養(yǎng)結(jié)束后，將方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)轉(zhuǎn)移至盛有海水(水深約10 cm)的無(wú)沙水槽中停食排沙24 h后稱(chēng)量各組總重，同時(shí)記錄稚蟲(chóng)存活數(shù)量，計(jì)算各處理組方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)存活率。

存活率(Survival rate，%)=Nt/N0×100；

增重率(Weight gain rate，%)=(Mt-M0)/M0×100；

特定生長(zhǎng)率(Specific gain rate，%)=(lnMt-lnM0)/t×100

式中，Nt為終末稚蟲(chóng)條數(shù)，N0為初始稚蟲(chóng)條數(shù)，Mt為終末平均體質(zhì)量，M0為初始平均體質(zhì)量，t為試驗(yàn)天數(shù)。

稚蟲(chóng)體成分和飼料常規(guī)成分采用AOAC[18]的方法進(jìn)行測(cè)定，稚蟲(chóng)蟲(chóng)體勻漿液堿性磷酸酶(AKP)活性(U/mg)參考南京建成生物工程研究所試劑盒說(shuō)明進(jìn)行測(cè)定，蟲(chóng)體鋅和銅元素含量采用GB/T 13885—2003《動(dòng)物飼料中鈣、銅、鐵、鎂、錳、鉀、鈉和鋅含量的測(cè)定 原子吸收光譜法》的方法進(jìn)行測(cè)定。

銅鋅交互效應(yīng)采用折線圖表示，折線相交即為飼料銅和鋅添加量對(duì)其具有顯著交互效應(yīng)，折線不相交即為飼料銅和鋅添加量對(duì)其無(wú)交互效應(yīng)。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和方差分析，以Tukey’s進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 銅鋅交互效應(yīng)下方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)的生長(zhǎng)性能

由表3可知，經(jīng)過(guò)8周的飼養(yǎng)，不同水平銅和鋅處理組方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)的終末體重、增重率和特定生長(zhǎng)率均顯著提高(P<0.05，下同)。在9個(gè)處理中，以處理8(銅添加量為20.0 mg/kg，鋅添加量為40.0 mg/kg)的方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)增重率和特定生長(zhǎng)率最高；鋅添加量為40.0 mg/kg處理組(處理2、處理5和處理8)的方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)增重率和特定生長(zhǎng)率顯著高于鋅添加量為80.0 mg/kg處理驗(yàn)組(處理3、處理6和處理9)；當(dāng)飼料銅添加量一定時(shí)，隨著飼料中鋅元素的增加，方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)的增重率和特定生長(zhǎng)率呈先升后降的變化趨勢(shì)；當(dāng)飼料鋅添加量一定時(shí)，改變銅添加量其方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)的增重率間和特定生長(zhǎng)率間無(wú)顯著差異(P>0.05，下同)。說(shuō)明飼料中添加適量鋅元素、過(guò)量銅元素不會(huì)顯著影響方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)的生長(zhǎng)性能(處理8)，但添加適量銅元素、過(guò)量鋅元素會(huì)有效抑制方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)的生長(zhǎng)發(fā)育(處理6)，同時(shí)過(guò)量的銅元素可在一定程度上改善過(guò)量鋅元素對(duì)方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)生長(zhǎng)性能的影響(處理9)。因此，推斷方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)的增重率和特定生長(zhǎng)率主要與飼料中鋅元素含量相關(guān)。

從表3和圖1～圖3可看出，飼料中添加銅和鋅對(duì)方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)增重率、特定生長(zhǎng)率和存活率的交互效應(yīng)顯著；飼料中的銅元素含量適量或偏低(5.0和10.0 mg/kg)時(shí)，隨著鋅元素添加量的升高，各處理組方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)的存活率呈先升后降的變化趨勢(shì)，說(shuō)明方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)的存活率主要受飼料中鋅添加量的影響；當(dāng)飼料中的銅添加量上升至20.0 mg/kg(高含量)時(shí)，方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)的存活率主要受飼料中銅添加量的影響，但處理組的稚蟲(chóng)存活率差異不顯著。

表3 銅鋅交互效應(yīng)對(duì)方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)生長(zhǎng)性能的影響

圖1 銅和鋅添加量對(duì)方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)增重率的交互影響Fig.1 The interactive effect between copper and zinc on weight gain rate of juvenile peanut worm

圖2 銅和鋅添加量對(duì)方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)特定生長(zhǎng)率的交互影響Fig.2 The interactive effect between copper and zinc on specific gain rate of juvenile peanut worm

圖3 銅和鋅添加量對(duì)方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)存活率的交互影響Fig.3 The interactive effect between copper and zinc on survival rate of juvenile peanut worm

2.2 銅鋅交互效應(yīng)下方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)的體成分

從表4可看出，各處理組方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)的水分含量在81.64%～82.78%，粗蛋白含量在58.46%～65.72%，粗脂肪含量在1.45%～1.72%，灰分含量在20.92%～24.92%。方差分析結(jié)果表明，飼料中不同銅添加量和鋅添加量對(duì)方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)的上述指標(biāo)均無(wú)顯著影響。

表4 銅鋅交互效應(yīng)下的方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)體成分比較

2.3 銅鋅交互效應(yīng)下方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)的蟲(chóng)體銅和鋅含量

由表5可知，各處理組方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)蟲(chóng)體的銅和鋅含量均隨著飼料中銅和鋅添加量的變化而變化。其中，飼料銅添加量為10.0和20.0 mg/kg(處理4～9)時(shí)，稚蟲(chóng)蟲(chóng)體銅含量顯著高于飼料銅添加量為5.0 mg/kg處理(處理1～3)；稚蟲(chóng)蟲(chóng)體鋅含量隨著飼料中鋅添加量的增加而顯著升高；高銅(20.0 mg/kg)高鋅(80.0 mg/kg)飼料處理(處理9)稚蟲(chóng)的蟲(chóng)體銅元素和鋅元素累積量最高。從圖4～5可看出，飼料中的銅和鋅添加量對(duì)方格星蟲(chóng)蟲(chóng)體銅和鋅含量的交互效應(yīng)不顯著。

表5 銅鋅交互效應(yīng)下的方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)蟲(chóng)體銅和鋅含量比較

2.4 銅鋅交互效應(yīng)下方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)蟲(chóng)體的AKP活性

由表6可知，各處理組方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)蟲(chóng)體的AKP活性均隨飼料中鋅添加量的增加呈先增后趨于平穩(wěn)的變化趨勢(shì)。其中，高鋅(80.0 mg/kg)處理稚蟲(chóng)的AKP活性顯著高于低鋅(5.0 mg/kg)處理，即處理1、處理4和處理7稚蟲(chóng)的AKP活性較低，均顯著低于其余處理。因此推斷，方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)的AKP活性主要受飼料中鋅添加量影響，但銅和鋅2種元素對(duì)其無(wú)交互效應(yīng)(圖6)。

3 討 論

微量元素是動(dòng)物維持生命及其生產(chǎn)不可或缺的營(yíng)養(yǎng)元素，體內(nèi)微量元素的相互關(guān)系十分復(fù)雜，開(kāi)展相關(guān)研究時(shí)所采用的微量元素劑量不同，微量元素間的相互關(guān)系也會(huì)發(fā)生變化[19]。影響微量元素利用率的因素主要有動(dòng)物機(jī)體生理狀態(tài)、微量元素化學(xué)形式及飼料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子[20]。選用利用率高的微量元素螯合物，合理控制飼料中微量元素含量，摸清微量元素間的協(xié)同或拮抗作用已成為當(dāng)今飼料研究的熱點(diǎn)[21]。許明珠等[13-14]研究表明，綜合增重率和飼料成本考慮，方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)最適銅需要量

圖4 銅鋅交互效應(yīng)下的方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)蟲(chóng)體銅含量Fig.4 Copper content of juvenile peanut worm under the interaction of copper and zinc

圖5 銅鋅交互效應(yīng)下的方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)蟲(chóng)體鋅含量Fig.5 Zinc content of juvenile peanut worm under the interaction of copper and zinc

表6 銅鋅交互效應(yīng)下方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)蟲(chóng)體的AKP活性比較

為7.5～11.2 mg/kg，最適鋅需要量為41.93 mg/kg。本研究結(jié)果表明，氨基酸螯合微量元素銅和鋅對(duì)方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)生長(zhǎng)具有顯著影響，且飼料中鋅添加量的影響大于銅添加量，與前人對(duì)皺紋盤(pán)鮑[16]、黃顙魚(yú)(PelteobagrusachelliRichardsor)[17]、花魚(yú)骨(HernibarbusmacalatesBleekev)[22]、異育銀鯽(CarassiusauratusGibelio)[23]、鯉(Cyprinuscarpio)[24]的研究結(jié)果一致。本研究中，當(dāng)飼料中的銅添加量一定時(shí)，增加鋅添加量的方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)增重率和特定生長(zhǎng)率呈先升后降的變化趨勢(shì)；當(dāng)飼料中的鋅添加量一定時(shí)，銅添加量發(fā)生變化但方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)的增重率和特定生長(zhǎng)率無(wú)顯著差異；飼料中鋅元素過(guò)量會(huì)顯著降低方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)的生長(zhǎng)性能，銅元素過(guò)量對(duì)方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響，但可在一定程度上改善過(guò)量鋅元素對(duì)方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)生長(zhǎng)性能的影響。究其原因可能是銅和鋅元素二者互為競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系，過(guò)量的銅元素競(jìng)爭(zhēng)了一部分鋅元素的蛋白質(zhì)親和部位，從而降低過(guò)量鋅元素對(duì)方格星蟲(chóng)生長(zhǎng)的影響[12]。已有研究表明，飼料中添加過(guò)量鋅元素會(huì)抑制黑鯛(Acanthopagrusschlegelii)幼魚(yú)和鯉的生長(zhǎng)，飼料中添加適宜的鋅元素對(duì)二者的增重具有正向效應(yīng)[24-25]。鋅元素過(guò)量導(dǎo)致的方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)生長(zhǎng)性能降低，其原因可能在于方格星蟲(chóng)沒(méi)有鰓器官，無(wú)法通過(guò)鰓排出多余的鋅，導(dǎo)致體內(nèi)鋅累積過(guò)多，同時(shí)鋅過(guò)量會(huì)影響方格星蟲(chóng)對(duì)其他元素的正常吸收，從而導(dǎo)致生長(zhǎng)性能較低[26-27]。

圖6 銅鋅交互效應(yīng)下方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)蟲(chóng)體的AKP活性比較Fig.6 The interaction between copper and zinc on AKP activity of juvenile peanut worm

本研究結(jié)果顯示，飼料中的銅和鋅添加量對(duì)星稚蟲(chóng)體成分無(wú)顯著影響，與其他學(xué)者對(duì)方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)[12]、羅非魚(yú)(Oreochromisniloticus)[21]、日本沼蝦[28]、草魚(yú)(Ctenopharyngodonidellus)[29]進(jìn)行單因素銅元素營(yíng)養(yǎng)試驗(yàn)，以及對(duì)星斑川鰈(Platichthysstellatus)[30]、半滑舌鰨(CynoglossussemilaevisGunther)[31]進(jìn)行單因素鋅元素營(yíng)養(yǎng)試驗(yàn)獲得的結(jié)果相同，究其原因可能在于飼料中微量元素的增加能有效促進(jìn)方格星蟲(chóng)快速生長(zhǎng)，并合理利用飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)合成自身物質(zhì)。方格星蟲(chóng)主要攝食灘涂沉積物表層的有機(jī)物質(zhì)和餌料，攝食過(guò)程必須利用適合口徑的沙粒作為載體，因此方格星蟲(chóng)對(duì)不同元素的生物富集與其攝食的餌料密切相關(guān)。李俊偉等[ 12]研究發(fā)現(xiàn)，方格星蟲(chóng)體內(nèi)的銅和鋅元素與沉積物環(huán)境間呈一定的正相關(guān)。本研究中，飼料的銅和鋅添加量對(duì)方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)蟲(chóng)體銅和鋅含量均具有顯著影響，蟲(chóng)體銅和鋅含量均隨飼料中銅和鋅添加量的增加而顯著增加，飼料中銅添加量不影響鋅元素在方格星蟲(chóng)蟲(chóng)體內(nèi)積累，但高銅高鋅處理稚蟲(chóng)的蟲(chóng)體銅和鋅元素累積量最高，與其他學(xué)者對(duì)皺紋盤(pán)鮑[16]、日本沼蝦[28]、中國(guó)對(duì)蝦[20]腹部鋅銅含量的研究結(jié)果一致。

AKP是一種二聚體結(jié)構(gòu)的酶，其結(jié)構(gòu)維持及酶活性發(fā)揮需要鎂和鋅離子參與。其中，鋅位于酶活性中心，是酶活性的必需基團(tuán)之一[32]，參與催化作用，而鎂僅起調(diào)節(jié)作用。AKP是鋅元素的特征酶，主要參與降解外來(lái)生物大分子，能夠良好反映生物體內(nèi)的鋅元素需求和利用率。本研究結(jié)果表明，方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)的AKP活性主要受鋅元素影響，AKP活性隨著飼料中鋅添加量的增加呈先增后趨于平穩(wěn)的變化趨勢(shì)，與許明珠等[13]研究單一鋅元素對(duì)方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)AKP活性影響獲得的結(jié)果一致；在不同飼料銅水平下，高鋅添加量處理組方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)的AKP活性均顯著高于低鋅添加量處理組，其原因可能在于適當(dāng)增加飼料中的鋅含量能保證方格星蟲(chóng)體內(nèi)富集更多鋅離子結(jié)合AKP鋅位點(diǎn)，從而增強(qiáng)AKP活性[11]。本研究中，飼料中添加高銅和適量鋅處理方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)的AKP活性顯著高于添加低銅和適量鋅處理，與其他學(xué)者對(duì)皺紋盤(pán)鮑[16]、日本沼蝦[28]的研究結(jié)果一致。這可能與鋅是銅的拮抗物有關(guān)，增加飼料中的鋅含量可降低方格星蟲(chóng)對(duì)銅的吸收量，進(jìn)而降低高銅引起的氧化脅迫[33]。

4 結(jié) 論

飼料中添加銅和鋅均可影響方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)生長(zhǎng)、體成分組成、體內(nèi)元素分布和積累，以及AKP活性。飼料中鋅元素對(duì)方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)生長(zhǎng)的影響大于銅元素，飼料高銅添加量不影響方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)對(duì)鋅的吸收。以增重率為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，方格星蟲(chóng)稚蟲(chóng)飼料中的最適銅和鋅添加量分別為20.0和40.0 mg/kg，飼料中對(duì)應(yīng)的蛋氨酸銅和蛋氨酸鋅添加量分別為117.6和42.1 mg/kg。