馬曉莉,吳麗麗,郭東更,郝春芳,張明珠,楊亞珊，陳坤婷，張英強(qiáng)，徐天宇，殷 喆，郭江濤

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)的主要表現(xiàn)為侵蝕性關(guān)節(jié)炎，不僅能夠造成關(guān)節(jié)的嚴(yán)重變形，而且也會(huì)產(chǎn)生功能的缺失。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，我國RA患者發(fā)病率達(dá)0.5%～1.0%，主要是女性和老年人，病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全明確[1]。研究表明[2]，RA的發(fā)病與患者自身免疫功能損傷有密切關(guān)系，以往認(rèn)為與免疫增強(qiáng)有關(guān)，現(xiàn)多數(shù)認(rèn)為系免疫功能紊亂所致,以T淋巴細(xì)胞亞群為主，其次是B細(xì)胞與NK細(xì)胞。在RA的病理機(jī)制方面，免疫細(xì)胞占比失衡發(fā)揮著關(guān)鍵性影響。本文通過分析初發(fā)RA患者與健康人外周血淋巴細(xì)胞亞群的分布，及不同初發(fā)RA患者疾病活動(dòng)組間淋巴細(xì)胞亞群的分布及炎癥因子水平，探討初發(fā)RA患者體內(nèi)免疫紊亂的狀態(tài)及炎癥水平。

1 資料與方法

1.1 一般資料:選擇2020年8月至2021年10月寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院寧南醫(yī)院住院的30例初發(fā)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者為RA組，其中男9例，女21例；年齡28～71歲，平均年齡(52±10)歲。隨機(jī)選擇同期健康體檢人員30例為健康對(duì)照組，其中男10例，女20例；年齡21～65歲，平均年齡(45±15)歲。2組在人數(shù)、年齡、性別方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。根據(jù)DAS28評(píng)分將RA患者分為低中疾病活動(dòng)組12例，高疾病活動(dòng)組18例，2組性別、年齡、病程等差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 診斷、排除標(biāo)準(zhǔn)：①診斷符合美國風(fēng)濕病學(xué)會(huì)與歐洲風(fēng)濕病防治聯(lián)合會(huì)2010年制定的RA診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。②排除標(biāo)準(zhǔn)：重度腎臟、內(nèi)分泌系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、肝臟與心臟病變、消化道疾病患者。要求納入觀察組的患者無干燥綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、結(jié)締組織病等免疫疾病或影響免疫的相關(guān)疾病。

1.3 方法

1.3.1 淋巴細(xì)胞亞群的流式測定L在清晨抽取2 mL空腹靜脈血，先離心，再置于流式管內(nèi)，借助流式細(xì)胞儀對(duì)外周血內(nèi)總T細(xì)胞(CD3+)、NK細(xì)胞(CD15+CD56+)、輔助性T細(xì)胞(CD3+CD4+)、B細(xì)胞(CD3-CD19+)、抑制性/細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CD3+CD8+)與相關(guān)表面標(biāo)記物表達(dá)進(jìn)行測定。

1.3.2 TNF-α、IL-6的檢測：空腹下采集患者靜脈血，4 ℃至自然凝固，3 000 r/min 離心 5 min，分離上層血清。采用西門子醫(yī)學(xué)診斷產(chǎn)品(上海)有限公司的α腫瘤壞死因子、白介素-6試劑盒通過化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行檢測。

1.3.3 疾病活動(dòng)度：收集初發(fā)RA患者信息，含性別、年齡、姓名、壓痛關(guān)節(jié)數(shù)(TJC)、C-反應(yīng)蛋白(CRP)、腫脹關(guān)節(jié)數(shù)(SJC)、紅細(xì)胞沉降率(ESR)?；贒AS28-CRP(3)，將RA患者中≤5.1者歸入低中度疾病活動(dòng)組，>5.1者歸入高度疾病活動(dòng)組。

2 結(jié)果

2.1 RA組與健康對(duì)照組外周血淋巴細(xì)胞構(gòu)成比比較:總T、CD8+T、T+B+NK細(xì)胞比例在初發(fā)RA患者與健康對(duì)照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。初發(fā)RA患者CD4+/CD8+、CD4+T細(xì)胞占比大幅提升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，NK細(xì)胞、總B細(xì)胞占比同健康對(duì)照組相比皆明顯偏低(P<0.05)，見表1。

表1 2組患者外周血淋巴細(xì)胞構(gòu)成比比較

2.2 RA患者與健康對(duì)照組外周血炎癥因子水平比較:初發(fā)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血TNF-α、IL-6、ESR、CRP與健康對(duì)照組比較均明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 2組患者外周血炎癥因子水平比較

2.3 RA患者不同疾病活動(dòng)組間外周血淋巴細(xì)胞亞群構(gòu)成比及炎癥因子水平比較:總T、CD8+T、 總B、T+B+NK在2組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CD4+T、CD4+/CD8+、 NK、TNF-α、 IL-6、 ESR、CRP在2組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 不同疾病活動(dòng)度組間淋巴細(xì)胞亞群構(gòu)成結(jié)果及炎癥因子水平比較

組別nT+B+NK(%)TNF-α(pg/mL)IL-6(pg/mL)ESR(mm/h)CRP(mg/L)低中疾病活動(dòng)組1296.86±1.3426.54±21.3156.95±104.4722.00±8.6050.75±9.48高疾病活動(dòng)組1896.61±1.49262.93±346.29406.57±488.4641.88±19.3783.44±12.79t值 0.48-2.35 -2.43-3.32-7.56P值>0.05<0.05 <0.05<0.05 <0.05

3 討論

RA主要表現(xiàn)為關(guān)節(jié)組織慢性炎癥，研究發(fā)現(xiàn)，其發(fā)病機(jī)制涉及細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)機(jī)能失調(diào)致T細(xì)胞亞群異常、T細(xì)胞活化等。基于成熟T細(xì)胞的表型，劃分成CD3+CD4+CD8-T 細(xì)胞(CD4+T 細(xì)胞)、CD3+CD4-CD8+T (CD8+T細(xì)胞)。CD4+T細(xì)胞機(jī)能異常與凋亡失調(diào)在極大程度上可引發(fā)RA[4]，其在諸多不同炎癥性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生方面皆發(fā)揮著關(guān)鍵影響[5]。本研究結(jié)果表明，RA 組外周血內(nèi)CD4+T細(xì)胞亞群占比大幅上調(diào)，CD8+T細(xì)胞亞群占比未見明顯不同(P>0.05)，因此CD4+/CD8+T同健康對(duì)照組相比顯著偏高(P<0.05)。高疾病活動(dòng)組CD4+T、CD4+/CD8+T明顯高于低中疾病活動(dòng)組，故Th 細(xì)胞機(jī)能相對(duì)亢進(jìn)，使得T細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)紊亂，導(dǎo)致細(xì)胞動(dòng)員的免疫損傷，成為RA的發(fā)病機(jī)制。

近年來，實(shí)驗(yàn)證實(shí)B細(xì)胞免疫機(jī)能紊亂和RA發(fā)病機(jī)制有關(guān)。B細(xì)胞除了能夠生成諸如RF(類風(fēng)濕因子)、CCP(抗環(huán)瓜氨酸多肽)等自身抗體，產(chǎn)生抗原—抗體復(fù)合物，并在關(guān)節(jié)處積滯，導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎癥[6]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，RA患者外周血內(nèi)記憶B細(xì)胞與NK細(xì)胞含量下降。NK細(xì)胞源自骨髓，大多數(shù)集中于外周血，為機(jī)體天然免疫的關(guān)鍵構(gòu)成，功能為免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤與抗感染等。在RA中，現(xiàn)已明確NK細(xì)胞活性減弱，此細(xì)胞于RA患者的滑膜液內(nèi)表達(dá)，發(fā)現(xiàn)在骨破壞方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用[7]。本研究結(jié)果顯示，在B細(xì)胞占比、NK細(xì)胞占比方面，相較健康對(duì)照組皆大幅降低，接近于先前研究結(jié)果；對(duì)比不同疾病活動(dòng)組，B 淋巴細(xì)胞百分比無明顯差異，而NK 細(xì)胞百分比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這表明B 淋巴細(xì)胞及 NK 細(xì)胞的免疫失衡是RA 發(fā)病機(jī)制之一，同王勇等人研究結(jié)果一致[8]。

CD4+T細(xì)胞經(jīng)由促進(jìn)炎性因子生成途徑，加速RA發(fā)展。此類因子中，TNF-α具備雙重生物學(xué)活性，對(duì)免疫細(xì)胞有活化、促增殖、促分化等作用，對(duì)某些非腫瘤細(xì)胞和大多數(shù)腫瘤細(xì)胞具有誘導(dǎo)凋亡的作用，在炎癥反應(yīng)、免疫防御與抗腫瘤方面起著關(guān)鍵作用。關(guān)于RA發(fā)病，TNF-α對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的刺激和關(guān)節(jié)損傷起控制作用，是重要的促炎因子。在RA患者的血管翳、軟骨與滑膜內(nèi)，TNF-α與自身2個(gè)受體顯示未正常表達(dá)[9]。作為一類多效性促炎介質(zhì)，IL-6在RA患者滑膜中大量表達(dá)，滑液中IL-6和可溶性IL-6R水平與慢性滑膜炎及關(guān)節(jié)破壞嚴(yán)重程度密切相關(guān)[9]。本研究提示TNF-α、IL-6、CRP、ESR在初發(fā)RA患者中明顯高于健康對(duì)照組，在不同疾病活動(dòng)組間高疾病活動(dòng)組明顯高于中低疾病活動(dòng)組。由此可知，RA的免疫系統(tǒng)紊亂是以CD4+T淋巴細(xì)胞功能亢進(jìn)為主，分泌TNF-α、IL-6等炎性細(xì)胞因子促進(jìn)疾病的發(fā)展。此外，導(dǎo)致體內(nèi)CRP與ESR大幅上調(diào)，對(duì)疾病發(fā)展更有促進(jìn)作用。