王 川，王鈺瑩，王 婷，史永恒，劉繼平，王 斌，衛(wèi) 昊，劉 航

基于SIRT1-ERK1/2通路研究白藜蘆醇對(duì)環(huán)孢菌素A誘導(dǎo)高血壓的作用及機(jī)制

王 川1, 2，王鈺瑩1，王 婷1，史永恒1, 2，劉繼平1, 2，王 斌1, 2，衛(wèi) 昊1, 2，劉 航3*

1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，陜西 咸陽(yáng) 712046 2.陜西省中醫(yī)藥管理局中藥藥效機(jī)制與物質(zhì)基礎(chǔ)重點(diǎn)研究室，陜西 咸陽(yáng) 712046 3.陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，陜西 咸陽(yáng) 712000

研究白藜蘆醇對(duì)環(huán)孢菌素A（cyclosporine A，CsA）誘導(dǎo)高血壓的作用及其機(jī)制。采用離體血管培養(yǎng)技術(shù)和微血管張力描記技術(shù)研究CsA對(duì)5-羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）介導(dǎo)的平滑肌收縮量效曲線變化。大鼠sc CsA誘導(dǎo)血壓升高，給予白藜蘆醇進(jìn)行干預(yù)，研究白藜蘆醇對(duì)血壓的影響；采用微血管張力描記觀察5-HT引起的動(dòng)脈收縮量效曲線的變化；采用Western blotting檢測(cè)5-HT1B受體、沉默信息調(diào)節(jié)因子1（sirtuin 1，SIRT1）、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2（extracellular regulated kinase 1/2，ERK1/2）蛋白表達(dá)。離體血管培養(yǎng)結(jié)果表明，白藜蘆醇通過(guò)激活SIRT1-ERK1/2通路抑制CsA誘導(dǎo)的收縮。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明白藜蘆醇可以顯著降低CsA引起的血壓升高（＜0.05、0.01）；抑制5-HT引起的收縮反應(yīng)（＜0.05、0.01）；降低5-HT1B受體和p-ERK1/2蛋白表達(dá)（＜0.05、0.01），增加SIRT1蛋白表達(dá)（＜0.01）。白藜蘆醇通過(guò)SIRT1-ERK1/2信號(hào)通路下調(diào)5-HT受體，從而抑制CsA誘導(dǎo)的高血壓。

白藜蘆醇；高血壓；環(huán)孢菌素A；5-羥色胺；沉默信息調(diào)節(jié)因子1

環(huán)孢菌素A（cyclosporine A，CsA）是臨床上常用于預(yù)防器官移植排斥的免疫抑制劑，可防止器官移植患者體內(nèi)的免疫排斥，在器官移植治療中發(fā)揮了重要的作用[1-2]。目前臨床上CsA也被用于治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、再生障礙性貧血等自身免疫性疾病[3-6]。伴隨著CsA的廣泛使用，也暴露出較多的不良反應(yīng)，高血壓是CsA重要的不良反應(yīng)，臨床研究表明使用CsA的腎臟移植患者中高血壓發(fā)生率高達(dá)20%～25%[7-8]。CsA可以引起人和動(dòng)物的血壓升高，然而其機(jī)制尚不清楚[9-10]。

5-羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）是一種內(nèi)源性的神經(jīng)遞質(zhì)，5-HT可以引起血管收縮，通過(guò)激活5-HT1B等受體介導(dǎo)血管收縮[11]。研究表明，在蛛網(wǎng)膜下腔出血、腦缺血以及高血壓等病變中，5-HT1B受體的表達(dá)上調(diào)[12-13]。臨床上化學(xué)藥雖然降壓效果顯著、療效肯定，但仍有部分患者血壓不能得到有效的控制，也會(huì)產(chǎn)生一些嚴(yán)重的不良反應(yīng)，如利尿降壓藥可引起電解質(zhì)紊亂，血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑引起干咳，鈣通道阻滯劑引起心率失常，α受體阻滯劑引起體位性低血壓等[14-15]。某些中藥單體、中藥提取物和中藥復(fù)方等均可降低血壓，降壓作用緩和，且可以改善各類(lèi)癥狀[16-17]；在降壓的同時(shí)，還具有改善微循環(huán)、調(diào)血脂、抗氧化、保護(hù)血管內(nèi)皮、調(diào)節(jié)血管活性物質(zhì)等多重作用，具有廣闊的應(yīng)用前景。

白藜蘆醇多存在于藜蘆、虎杖、葡萄、花生等植物中，屬于一種多酚類(lèi)天然化合物，不僅有較強(qiáng)的心血管保護(hù)作用，還具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗腫瘤、抗衰老和抗神經(jīng)退行性疾病等重要的藥理作用[18-21]。研究表明，白藜蘆醇可以舒張血管、降低血壓[22-23]。然而，白藜蘆醇對(duì)CsA引起的高血壓作用及其機(jī)制尚不清楚。本研究通過(guò)離體動(dòng)脈培養(yǎng)模型和CsA誘導(dǎo)大鼠高血壓模型，探究白藜蘆醇對(duì)大鼠血壓的影響及其相關(guān)機(jī)制，為CsA引起的高血壓的預(yù)防和治療提供新的思路與依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)雄性SD大鼠，體質(zhì)量（200±20）g，6～8周齡，由西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)（使用）許可證號(hào)SCXK（陜）2020-001。動(dòng)物飼養(yǎng)于陜西中醫(yī)藥大學(xué)中藥藥理實(shí)驗(yàn)室，室溫（23±2）℃，光照周期為12 h，飼養(yǎng)期間動(dòng)物自由進(jìn)食飲水。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號(hào)SUCMDL20201119001）。

1.2 藥品與試劑

CsA（批號(hào)S17068）、白藜蘆醇（批號(hào)S30630，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98%）購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司；5-HT（批號(hào)Slcf8396）、乙酰膽堿（acetyl choline，ACh，批號(hào)BCBX5660）、細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2（extracellular regulated protein kinase 1/2，ERK1/2）特異性抑制劑U0126（批號(hào)19826）、Triton X-100（批號(hào)T8787）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；5HT1B受體抗體（批號(hào)AB13896）、沉默信息調(diào)節(jié)因子1（sirtuin 1，SIRT1）抗體（批號(hào)AB12193）購(gòu)自英國(guó)Abcam公司；ERK1/2（批號(hào)4695S）、磷酸化ERK1/2（phosphorylated ERK1/2，p-ERK1/2）抗體（批號(hào)4370S）購(gòu)自美國(guó)CST公司；β-actin抗體（批號(hào)66009-1-Ig）購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司；HRP標(biāo)記的山羊抗兔二抗（批號(hào)A0280）購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；青霉素/鏈霉素溶液（批號(hào)J190033）購(gòu)自美國(guó)HyClone公司。

1.3 儀器

CODA動(dòng)物無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)量系統(tǒng)（美國(guó)Kent公司）；DMT 630M型離體微血管張力測(cè)定系統(tǒng)（丹麥DMT公司）；CO2培養(yǎng)箱（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）；肌張力描記記錄系統(tǒng)（澳大利亞ADI公司）；電泳儀、轉(zhuǎn)膜儀、凝膠成像系統(tǒng)（美國(guó)Bio-Rad公司）。

2 方法

2.1 腸系膜動(dòng)脈血管離體培養(yǎng)

SD大鼠斷頸處死，無(wú)菌條件下迅速分離出大鼠腸系膜，浸泡于經(jīng)濾過(guò)除菌并預(yù)冷的Na+-PSS緩沖液（119 mmol/L NaCl、15 mmol/L NaHCO3、4.6 mmol/L KCl、1.2 mmol/L MgCl2、1.2 mmol/L NaH2PO4、1.5 mmol/L CaCl2和5.5 mmol/L葡萄糖）中，于體視顯微鏡下分離出腸系膜動(dòng)脈，0.1% Triton X-100血管內(nèi)灌注10 s，去除血管內(nèi)皮，腸系膜動(dòng)脈剪成2 mm的動(dòng)脈環(huán)，放入24孔培養(yǎng)板內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，每孔加入1 mL不含血清的DMEM高糖培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中加入CsA（1×10?6、1×10?5mol/L）或二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）或U0126（1×10?6mol/L）或白藜蘆醇（1×10?5、1×10?4mol/L）。培養(yǎng)板置于37 ℃、5% CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)24 h。

2.2 離體培養(yǎng)的腸系膜血管收縮功能檢測(cè)

將5 mL Na+-PSS加入恒溫離體浴槽內(nèi)，并將含95% O2和5% CO2的混合氣體不斷通入浴槽內(nèi)，將分離的動(dòng)脈環(huán)穿入2根20 μm的金屬絲，其中一根金屬絲與可調(diào)節(jié)預(yù)張力的張力微調(diào)裝置相連，另一根連接張力換能器。固定好的動(dòng)脈環(huán)平衡40 min后，每15分鐘施加0.5 mN的預(yù)張力，直至2 mN，加入60 mmol/L K+-PSS緩沖液（119 mmol/L KCl、15 mmol/L NaHCO3、4.6 mmol/L KCl、1.2 mmol/L MgCl2、1.2 mmol/L NaH2PO4、1.5 mmol/L CaCl2和5.5 mmol/L葡萄糖）檢驗(yàn)動(dòng)脈環(huán)收縮活性，若動(dòng)脈環(huán)在2次K+-PSS緩沖液中的收縮幅度均大于5 mN并且2次收縮差異低于10%時(shí)，該動(dòng)脈環(huán)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，使用ACh檢測(cè)動(dòng)脈環(huán)內(nèi)皮是否完全去除。將5-HT受體特異性激動(dòng)劑5-HT按濃度累加法的方式，由低至高濃度（1×10?8～1×10?4mmol/L）依次加入DMT浴槽中來(lái)觀察大鼠血管收縮功能[24]。

2.3 動(dòng)物分組、給藥和造模

24只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組和白藜蘆醇低、高劑量（75、150 mg/kg）組，每組6只。除對(duì)照組sc大豆油外，其余各組sc CsA（25 mg/kg）；各給藥組再ig相應(yīng)藥物，對(duì)照組ig等體積0.5%羧甲基纖維素鈉[9,25]，1次/d，連續(xù)21 d。

2.4 大鼠無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)量

每周采用CODA無(wú)創(chuàng)血壓儀測(cè)量系統(tǒng)記錄大鼠清醒狀態(tài)下尾動(dòng)脈的收縮和舒張壓，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)重復(fù)測(cè)量15～30次，取其平均值。

2.5 大鼠腸系膜血管收縮功能檢測(cè)

給藥21 d后，大鼠處死，迅速取出腸系膜動(dòng)脈，浸入預(yù)冷的Na+-PSS緩沖液中，于顯微鏡下快速剝離腸系膜動(dòng)脈周?chē)じ浇M織，將分離的腸系膜動(dòng)脈剪切成長(zhǎng)約2 mm的動(dòng)脈環(huán)，使用離體肌張力記錄系統(tǒng)檢測(cè)動(dòng)脈張力的變化。

2.6 Western blotting檢測(cè)5HT1B受體、ERK1/2、p-ERK1/2和SIRT1蛋白表達(dá)

取大鼠腸系膜動(dòng)脈，加入RIPA裂解液提取總蛋白，采用BCA法檢測(cè)樣品蛋白含量，制備的蛋白樣品經(jīng)10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)至PVDF膜，于含5%脫脂牛奶的TBST中室溫封閉2 h，分別加入相應(yīng)一抗，4 ℃孵育過(guò)夜；加入二抗，室溫孵育1 h，洗膜后用ECL發(fā)光試劑顯影，檢測(cè)目標(biāo)條帶的灰度值，分析相關(guān)蛋白表達(dá)。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1 CsA對(duì)5-HT受體介導(dǎo)的收縮反應(yīng)的影響

為了研究不同濃度的CsA對(duì)5-HT收縮的影響，將CsA（1×10?6、1×10?5mol/L）[26]分別與離體動(dòng)脈血管共培養(yǎng)24 h，梯度累加法加入5-HT，獲得累積濃度-反應(yīng)曲線見(jiàn)圖1，不同濃度的CsA均顯著增強(qiáng)腸系膜動(dòng)脈收縮功能，收縮量效曲線明顯左移。與DMSO組相比，1×10?5mol/L CsA可以明顯增強(qiáng)5-HT的收縮作用，Emax明顯升高（＜0.05、0.01）。

與DMSO組比較：*P＜0.05 **P＜0.01

3.2 U0126對(duì)5-HT受體介導(dǎo)的收縮反應(yīng)的影響

為了考察ERK1/2通路是否參與了CsA誘導(dǎo)的腸系膜動(dòng)脈收縮增強(qiáng)，在培養(yǎng)時(shí)加入特異性ERK1/2信號(hào)通路抑制劑U0126（1×10?6mol/L）與CsA共培養(yǎng)24 h[24]，結(jié)果如圖2-A所示，與CsA組相比，U0126可以顯著抑制5-HT誘導(dǎo)的收縮反應(yīng)（＜0.05、0.01）；Western blotting結(jié)果（圖2-B）顯示，與DMSO組比較，CsA組p-ERK1/2/ERK1/2蛋白表達(dá)水平顯著升高（＜0.01）；與CsA組比較，U0126顯著抑制p-ERK1/2/ERK1/2蛋白表達(dá)（＜0.01）。表明ERK1/2-絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信號(hào)通路可能參與了CsA引起的血管收縮。

與DMSO組比較：*P＜0.05 **P＜0.01；與CsA組比較：#P＜0.05 ##P＜0.01

3.3 白藜蘆醇對(duì)5-HT受體介導(dǎo)的收縮反應(yīng)的影響

為了研究白藜蘆醇對(duì)CsA誘導(dǎo)的血管平滑肌收縮功能的影響，將白藜蘆醇（1×10?5、1×10?4mol/L）與CsA共培養(yǎng)24 h。如圖3-A所示，與CsA相比，白藜蘆醇顯著抑制5-HT誘導(dǎo)的收縮反應(yīng)（＜0.01）；Western blotting結(jié)果（圖3-B）顯示，CsA顯著降低SIRT1蛋白表達(dá)水平（＜0.05），而白藜蘆醇（1×10?4mol/L）可以顯著上調(diào)SIRT1蛋白表達(dá)水平（＜0.05）。提示白藜蘆醇可能通過(guò)激活SIRT1通路抑制CsA誘導(dǎo)的收縮。

3.4 白藜蘆醇對(duì)CsA誘導(dǎo)大鼠血壓的影響

為了研究白藜蘆醇對(duì)CsA誘導(dǎo)的高血壓大鼠收縮壓和舒張壓的影響，在給藥前和給藥期間平均每周測(cè)血壓1次。如圖4所示，給藥前（第0周）各組大鼠收縮壓和舒張壓均無(wú)顯著性差異；給藥1周后，給予CsA后大鼠收縮壓和舒張血壓均升高，與對(duì)照組相比，第3周模型組收縮壓和舒張壓均有顯著性差異（＜0.01）；與模型組相比，第3周白藜蘆醇高劑量組大鼠收縮壓與舒張壓均顯著降低（＜0.05、0.01）。

與DMSO組比較：*P＜0.05 **P＜0.01；與CsA組比較：#P＜0.05 ##P＜0.01

與對(duì)照組比較：*P＜0.05 **P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.05 ##P＜0.01，下圖同 1 mm Hg＝133 Pa

3.5 白藜蘆醇對(duì)5-HT介導(dǎo)的收縮反應(yīng)和5-HT1B受體蛋白表達(dá)的影響

如圖5-A和表1所示，與對(duì)照組比較，模型組5-HT介導(dǎo)的大鼠腸系膜動(dòng)脈收縮反應(yīng)明顯增強(qiáng)（＜0.01），Emax顯著升高（＜0.01）；與模型組比較，白藜蘆醇高劑量組顯著抑制血管收縮反應(yīng)量效曲線（＜0.01），Emax顯著降低（＜0.01），表明白藜蘆醇可以抑制CsA引起的血管收縮。Western blotting結(jié)果（圖5-B）表明，與對(duì)照組比較，模型組5-HT1B受體蛋白表達(dá)水平明顯升高（＜0.01）；與模型組比較，白藜蘆醇高劑量組5-HT1B受體蛋白表達(dá)水平顯著降低（＜0.05）。

圖5 白藜蘆醇對(duì)5-HT介導(dǎo)的血管收縮反應(yīng)(A)和5-HT1B受體蛋白表達(dá) (B)的影響(n = 6)

表1 白藜蘆醇對(duì)5-HT誘導(dǎo)動(dòng)脈環(huán)收縮的Emax和pEC50的影響(, n = 6)

Table 1 Effect of resveratrol on Emax and pEC50 of 5-HT-induced arterial ring contraction (, n = 6)

組別劑量/(mg·kg?1)Emax/%pEC50 對(duì)照—187.90±11.065.680±0.098 模型—256.30±16.85**5.440±0.098* 白藜蘆醇75228.80±16.12#5.450±0.100 150206.20±17.29##5.570±0.130#

與對(duì)照組比較：*＜0.05**＜0.01；與模型組比較：#＜0.05##＜0.01

*< 0.05**< 0.01control group;#< 0.05##< 0.01model group

3.6 白藜蘆醇對(duì)大鼠腸系膜動(dòng)脈SIRT1、p-ERK1/2和ERK1/2蛋白表達(dá)的影響

為了研究SIRT1和ERK1/2通路是否參與了白藜蘆醇降低大鼠腸系膜動(dòng)脈高反應(yīng)性的過(guò)程，檢測(cè)了SIRT1和p-ERK1/2蛋白表達(dá)，如圖6所示，與對(duì)照組比較，模型組SIRT1蛋白表達(dá)水平顯著降低（＜0.01），p-ERK1/2/ERK1/2蛋白表達(dá)水平顯著升高（＜0.01）；與模型組比較，白藜蘆醇高劑量組SIRT1蛋白表達(dá)水平顯著升高（＜0.01），白藜蘆醇低、高劑量組p-ERK1/2/ERK1/2蛋白表達(dá)水平均顯著降低（＜0.05、0.01），表明SIRT1和ERK1/2- MAPK信號(hào)通路可能參與了白藜蘆醇抑制CsA上調(diào)5-HT1B受體引起的血管收縮。

圖6 白藜蘆醇對(duì)大鼠腸系膜動(dòng)脈SIRT1、p-ERK1/2和ERK1/2蛋白表達(dá)的影響(n = 6)

4 討論

高血壓是CsA臨床使用中最常見(jiàn)的不良反應(yīng)，高血壓會(huì)促使左心室肥大、動(dòng)脈粥樣硬化、心力衰竭，高血壓也通常會(huì)導(dǎo)致移植器官存活率大幅度下降，甚至可能導(dǎo)致死亡[27-28]，因此，需要積極地干預(yù)CsA引起的高血壓。白藜蘆醇是一種多酚類(lèi)化合物和植物抗毒素，作為SIRT1的激動(dòng)劑，具有較好的抗氧化、抗炎、抗血小板聚集、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、舒張血管、防止心肌纖維化和心室肥厚及電生理效應(yīng)等作用，從而發(fā)揮對(duì)心血管系統(tǒng)的保護(hù)作用[18]。白藜蘆醇對(duì)自發(fā)性高血壓、血管緊張素II引起的高血壓模型、腎性高血壓模型和同型半胱氨酸引起的高血壓等許多動(dòng)物模型均具有降壓作用[29-31]。然而，白藜蘆醇對(duì)CsA引起高血壓的影響未見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)離體血管培養(yǎng)技術(shù)考察了白藜蘆醇對(duì)CsA誘導(dǎo)的血管收縮功能的影響，并通過(guò)CsA誘導(dǎo)大鼠高血壓模型考察了白藜蘆醇對(duì)大鼠血壓的影響，從大鼠腸系膜動(dòng)脈平滑肌收縮功能和蛋白表達(dá)闡述了白藜蘆醇降低CsA引起高血壓的作用機(jī)制。研究結(jié)果表明，CsA可顯著升高大鼠血壓，增強(qiáng)腸系膜動(dòng)脈平滑肌的5-HT受體介導(dǎo)的收縮反應(yīng)，該現(xiàn)象可能與CsA上調(diào)5-HT受體相關(guān)。白藜蘆醇可以降低CsA誘導(dǎo)的高血壓，并且抑制CsA引起的血管高反應(yīng)性和減少5-HT1B蛋白的表達(dá)，白藜蘆醇可能通過(guò)激活SIRT1、抑制ERK1/2通路減弱血管收縮作用從而降壓。

高血壓病理狀況下血管平滑肌收縮性受體明顯上調(diào)，使血管對(duì)激動(dòng)劑產(chǎn)生高反應(yīng)性；下調(diào)血管平滑肌收縮性受體能夠降低血管的高反應(yīng)性，從而降低血壓[32-33]。研究發(fā)現(xiàn)，5-HT誘導(dǎo)的急性血管收縮主要由5-HT1B受體介導(dǎo)，而長(zhǎng)期暴露于5-HT可通過(guò)激活5-HT1B受體引起肺動(dòng)脈高壓，自發(fā)性高血壓大鼠動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞上的5-HT受體表達(dá)增強(qiáng)[34-35]。在血管收縮功能研究中，白藜蘆醇可以顯著降低5-HT誘導(dǎo)的大鼠腸系膜動(dòng)脈收縮，Western blotting結(jié)果顯示白藜蘆醇顯著下調(diào)大鼠腸系膜動(dòng)脈5-HT1B受體的表達(dá)，提示白藜蘆醇通過(guò)下調(diào)血管平滑肌上的5-HT受體表達(dá)，降低血管高反應(yīng)性，從而降低血壓。

MAPK信號(hào)通路能夠調(diào)控細(xì)胞內(nèi)多種生物信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。ERK1/2信號(hào)通路將信息從細(xì)胞表面?zhèn)鬟f到細(xì)胞內(nèi)，再轉(zhuǎn)導(dǎo)到細(xì)胞核，激活轉(zhuǎn)錄因子，介導(dǎo)生物學(xué)效應(yīng)[36-37]。研究表明，吸煙與低密度脂蛋白等危險(xiǎn)因子損傷動(dòng)脈平滑肌，激活ERK1/2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄和翻譯機(jī)制，合成新的5-HT受體，使動(dòng)脈血管平滑肌5-HT受體表達(dá)上調(diào)，導(dǎo)致動(dòng)脈血管敏感性增強(qiáng)，呈高反應(yīng)性[38-39]。U0126是ERK1/2通路特異性抑制劑，阻斷絲裂原活化的細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2（mitogen-activated extracellular signal-regulated kinase 1/2，MEK1/2）激活，抑制下游ERK1/2激酶激活。CsA增強(qiáng)血管收縮的作用及上調(diào)5-HT受體的表達(dá)可以被ERK1/2通路抑制劑U0126抑制，表明CsA上調(diào)5-HT受體的作用可能與ERK1/2信號(hào)通路有關(guān)。激活SIRT1可以降低血壓，研究表明SIRT1的激活可以保護(hù)血管，降低血管的收縮作用，從而降低血壓[40]。SIRT1激活劑白藜蘆醇能夠通過(guò)SIRT1介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑改善高血壓。本研究結(jié)果表明，CsA抑制SIRT1表達(dá)，激活ERK1/2信號(hào)通路，而白藜蘆醇可以激活SIRT1，抑制ERK1/2通路而降低血管高反應(yīng)性。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇能夠激活SIRT1，抑制ERK1/2信號(hào)通路，下調(diào)5-HT受體的表達(dá)，改善腸系膜動(dòng)脈高反應(yīng)性，降低CsA引起的高血壓。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Effect and mechanism of resveratrol on cyclosporin A-induced hypertension based on SIRT1-ERK1/2 pathway

WANG Chuan1, 2, WANG Yu-ying1, WANG Ting1, SHI Yong-heng1, 2, LIU Ji-ping1, 2, WANG Bin1, 2, WEI Hao1, 2, LIU Hang3

1.College of Pharmacy, Shaanxi University of Chinese Medicine, Xianyang 712046, China 2.Key Laboratory of Pharmacodynamics and Material Basis of Chinese Medicine, Shaanxi Administration of Traditional Chinese Medicine, Xianyang 712046, China 3.Affiliated Hospital of Shaanxi University of Chinese Medicine, Xianyang 712000, China

To study the effect and mechanism of resveratrol on cyclosporine A (CsA) induced hypertension.organ culture and myograph were used to study CsA induced vasoconstrictions mediated by 5-hydroxytryptamine (5-HT) receptor.Rats were sc CsA to induce blood pressure increased, and resveratrol was given for intervention to study the effect of resveratrol on blood pressure; Microvascular tonometry was used to observe the changes in dose-response curve of arterial contraction caused by 5-HT; Western blotting was used to detect 5-HT1Breceptor, sirtuin 1 (SIRT1) and extracellular regulated kinase 1/2 (ERK1/2) protein expressions.The results of isolated blood vessel culture showed that resveratrol inhibited CsA-induced contraction by activating SIRT1-ERK1/2 pathway.Animal experiments showed that resveratrol could significantly reduce the increase in blood pressure caused by CsA (< 0.05, 0.01); Inhibited the contractile response caused by 5-HT (< 0.05, 0.01); Decreased the expressions of 5-HT1Breceptor and p-ERK1/2 protein (< 0.05, 0.01), and increased the protein expression of SIRT1 (< 0.01).Resveratrol can inhibit CsA-induced hypertension by down-regulating 5-HT receptor through SIRT1-ERK1/2 signaling pathway.

resveratrol; hypertension; cyclosporin A; 5-hydroxytryptamine; sirtuin1

R285.5

A

0253 - 2670(2022)09 - 2723 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.09.015

2022-01-18

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81800401）；陜西省科技廳一般項(xiàng)目——社會(huì)發(fā)展領(lǐng)域（2022SF-207，2022SF-435）；大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（S202010716021，S202010716024）；陜西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)科創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)（2019-YL13）

王 川（1987—），男，副教授，博士研究生，主要從事心血管疾病的發(fā)病及防治研究。E-mail: wangchuan@sntcm.edu.cn

通信作者：劉 航（1983—），男，主管中藥師，主要從事中藥制劑工藝研究。E-mail: 497240346@qq.com

[責(zé)任編輯 李亞楠]