彭煦棠，楊喜艷，何谷良?

（1. 常德職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南 常德 415700 ；2. 長沙衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，湖南 長沙 410100）

中醫(yī)藥因其多效性、多靶點(diǎn)性、增效減副性、穩(wěn)定持久性在防治血脂異常相關(guān)疾病中得到了廣泛的應(yīng)用。有研究指出，中醫(yī)藥在調(diào)節(jié)并維持機(jī)體平衡、維持血脂穩(wěn)定等方面均有一定的優(yōu)勢[1]。中藥經(jīng)典名方是祖先留給我們的珍貴遺產(chǎn)，傳承千年，經(jīng)久不衰。經(jīng)典名方的開發(fā)符合我國中醫(yī)藥發(fā)展“十三五”規(guī)劃中提出的創(chuàng)新要求，其前景廣闊，市場需求迫切。高膽固醇血癥可隱匿性、漸行性地對(duì)人體造成損害，此病患者易出現(xiàn)冠心病、腦卒中、脂肪肝、糖尿病、心肌梗死等并發(fā)癥[2]。為有效控制高膽固醇血癥，防治相關(guān)并發(fā)癥，中、西醫(yī)均進(jìn)行了大量的研究，并取得了很大的進(jìn)展。經(jīng)典名方澤瀉湯出自《金匱要略》( 漢·張仲景)，由白術(shù)、澤瀉組成?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，澤瀉湯具有調(diào)血脂、利尿、降血壓、抗冠狀動(dòng)脈粥樣硬化等作用[3]。白術(shù)可燥濕利水、健脾益氣，其提取物具有抗炎、擴(kuò)張血管等作用[4]。澤瀉可利水滲濕、化濁調(diào)脂、泄熱，其提取物具有促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放NO、保護(hù)和擴(kuò)張血管、預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的作用[5]。本文基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討用澤瀉湯治療高膽固醇血癥的潛在作用靶點(diǎn)，旨在為進(jìn)一步研究開發(fā)澤瀉湯提供參考。

1 材料與方法

1.1 澤瀉湯化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)的篩選

本研究澤瀉湯中“澤瀉”“白術(shù)”的化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)來源于中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺(tái)數(shù)據(jù)庫（TCMSP,https ：//tcmspw.com/tcmsp.php）。

1.2 澤瀉湯化學(xué)成分的潛在作用靶點(diǎn)

以“high cholesterol”作為關(guān)鍵詞在GeneCard(https：//www.genecards.org/）、OMIM(http：//www.omim.org/）、DrugBank(https：//www.drugbank.ca/targets）數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索。綜合上述數(shù)據(jù)庫得到的高膽固醇血癥治療靶點(diǎn)，刪除重復(fù)基因和假陽性基因，得到澤瀉湯抗高膽固醇血癥的潛在作用靶點(diǎn)。

1.3 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用信息(PPI)

分析澤瀉湯治療作用潛在靶標(biāo)與高膽固醇血癥之間的PPI，將澤瀉湯和高膽固醇血癥的共同靶點(diǎn)導(dǎo)入在線數(shù)據(jù)庫STRING 進(jìn)行分析，得到蛋白相互作用PPI 數(shù)據(jù)。

1.4 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

針對(duì)澤瀉湯作用的潛在靶標(biāo)與高膽固醇血癥靶標(biāo)之間的PPI 信息計(jì)算網(wǎng)絡(luò)特征值，選取澤瀉湯中中藥靶標(biāo)- 疾病基因互作網(wǎng)絡(luò)的核心節(jié)點(diǎn)（hubs）；采用Cystoscape 3.6.0 軟件進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建、分析和可視化處理，“節(jié)點(diǎn)”代表分子，“邊”代表分子間的相互作用關(guān)系。通過評(píng)價(jià)網(wǎng)絡(luò)的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)特性來進(jìn)行分析，構(gòu)建澤瀉湯方劑- 中藥-成分- 靶標(biāo)的相互作用網(wǎng)絡(luò)，通過分析澤瀉湯活性成分與靶點(diǎn)、靶點(diǎn)與疾病之間的復(fù)雜關(guān)系來判定總結(jié)用澤瀉湯治療高膽固醇血癥的潛在作用靶點(diǎn)及其作用機(jī)制。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)澤瀉湯化學(xué)成分與靶標(biāo)的分析

澤瀉湯中的澤瀉共包含10 種主要化學(xué)成分（篩選出關(guān)鍵靶標(biāo)23 個(gè)），白術(shù)共包含7 種主要化學(xué)成分（篩選出關(guān)鍵靶標(biāo)18 個(gè)）。詳見表1。

表1 澤瀉湯的活性化合物

2.2 分析用澤瀉湯治療高膽固醇血癥的潛在核心作用靶點(diǎn)

取澤瀉湯作用潛在靶標(biāo)與高膽固醇血癥相關(guān)靶點(diǎn)的交集，獲得交集靶點(diǎn)。將交集靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING 11.0 數(shù)據(jù)庫，并利用Cytoscape 3.8.0 軟件進(jìn)行處理，得到潛在核心蛋白靶點(diǎn)組蛋白去乙?；?（HDAC2）、環(huán)加氧酶2(PTGS2)、內(nèi)皮一氧化氮合成酶（NOS3）、核受體亞家族3C 組成員2（NR3C2）、NCOA2、NR3C1、ENPP1、HMGCR、I T G A L、M T O R、A R、F 2、R X R A、A C H E、ADRB2。

2.3 對(duì)用澤瀉湯治療高膽固醇血癥基因功能和富集通路的分析

使用DAVID 數(shù)據(jù)庫對(duì)交集靶點(diǎn)進(jìn)行GO 基因功能和KEGG 富集通路分析。共對(duì)7 個(gè)生物過程（biological process）進(jìn)行GO 基因功能分析，涉及RNA 聚合酶Ⅱ啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄起始（transcription initiation from RNA polymerase Ⅱ promoter）、RNA 聚合酶Ⅱ啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控（positive regulation of transcription from RNA polymeraseⅡ promoter）、平滑肌收縮的負(fù)調(diào)節(jié)（negative regulation of smooth muscle contraction）、 血 小板活化的負(fù)調(diào)控（negative regulation of platelet activation）、RNA 聚合酶Ⅲ啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控（positive regulation of transcription from RNA polymerase Ⅲ promoter）、子 宮 內(nèi) 胚 胎 發(fā)育（in utero embryonic development）、 信 號(hào) 轉(zhuǎn)導(dǎo)（signal transduction）。 共 對(duì)5 種 細(xì) 胞 組 成(cell scomposition) 進(jìn)行GO 基因功能分析，涉及細(xì)胞核、蛋白質(zhì)復(fù)合物、受體復(fù)合物、細(xì)胞核染色質(zhì)、細(xì)胞核質(zhì)。共對(duì)7 種分子功能(molecular function) 進(jìn)行GO 基因功能分析，涉及類固醇激素受體活性、類固醇結(jié)合、蛋白質(zhì)結(jié)合、序列特異性DNA 結(jié)合、酶結(jié)合、RNA 聚合酶Ⅱ核心啟動(dòng)子近端區(qū)域序列特異性DNA 結(jié)合和鋅離子結(jié)合。分析的KEGG 富集通路有甲狀腺激素信號(hào)通路、神經(jīng)活性配體- 受體相互作用通路、內(nèi)分泌系統(tǒng)通路、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、循環(huán)系統(tǒng)通路等多條通路。

2.4 分析用澤瀉湯治療高膽固醇血癥的“方劑-中藥-成分-靶標(biāo)”多維網(wǎng)絡(luò)

結(jié)合候選靶標(biāo)網(wǎng)絡(luò)推測用澤瀉湯治療高膽固醇血癥的作用可能與神經(jīng)系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、神經(jīng)營養(yǎng)因子信號(hào)通路等有關(guān)。詳見圖1。

圖1 澤瀉湯治療高膽固醇血癥“方劑-藥物-活性成分-潛在靶標(biāo)”相關(guān)蛋白網(wǎng)絡(luò)圖

3 討論

大量的研究表明，中醫(yī)藥在防治血脂異常方面的應(yīng)用效果顯著。有報(bào)道稱，用中藥復(fù)方治療血脂異常的作用機(jī)制主要涉及動(dòng)脈粥樣硬化通路[6]、低氧誘導(dǎo)因子-1（HIF-1）信號(hào)通路[7]、AGE-RAGE 信號(hào)通路[8]、AMPK 信號(hào)通路[9]、胰島素抵抗等方面[10]。袁圓等[11]發(fā)現(xiàn)，澤瀉湯能顯著升高模型大鼠血清HDL-C 的水平，降低其SBP、血清LDL-C、TC、TG 的水平，改善其腎小球動(dòng)脈硬化、脂肪肝及胸主動(dòng)脈中膜增厚的相關(guān)癥狀。相關(guān)的研究指出，澤瀉湯可激活A(yù)MPK 信號(hào)通路，改善糖脂代謝紊亂，減輕胰島素抵抗[12]，促進(jìn)脂肪分解，改善高脂飲食誘導(dǎo)代謝綜合征大鼠的代謝紊亂[13]。藥理學(xué)研究表明，PTGS2 能夠參與急性炎癥的發(fā)展和消退，并且其本身是非甾體抗炎藥（NSAIDs）的治療靶標(biāo)[14]。研究發(fā)現(xiàn)，中國人的NOS3 基因位點(diǎn)rs4496877、rs1808593和rs3918186 使其對(duì)原發(fā)性高血壓具有遺傳易感性，蘇丹人的NOS3 基因位點(diǎn)rs2070744 使其對(duì)原發(fā)性高血壓具有遺傳易感性[15-16]。目前，以ADRB2 作為疾病治療靶標(biāo)已經(jīng)開發(fā)了大量的藥物，主要用于治療哮喘[17]。有報(bào)道稱，ADRB2具有成為高血壓、焦慮癥及抑郁癥等疾病治療靶標(biāo)的潛力[18-20]。本文基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對(duì)用澤瀉湯治療高膽固醇血癥的潛在作用靶點(diǎn)及其作用機(jī)制進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，NCOA2、NR3C2、NR3C1、ENPP1、HMGCR、ITGAL、HDAC2、MTOR、AR、PTGS2、F2、NOS3 等是用澤瀉湯治療高膽固醇血癥的關(guān)鍵靶標(biāo)。澤瀉湯對(duì)高膽固醇血癥的治療作用可能與甲狀腺激素信號(hào)通路、神經(jīng)活性配體- 受體相互作用、內(nèi)分泌系統(tǒng)等有關(guān)。

綜上所述，澤瀉湯可通過多靶點(diǎn)、多途徑發(fā)揮治療高膽固醇血癥的作用。