劉 琛，胡海燕，文鋮熹

〔1. 中國科學(xué)院大學(xué)深圳醫(yī)院（光明）醫(yī)學(xué)檢驗二科，廣東 深圳 518107 ；2. 中山大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院（深圳）預(yù)防醫(yī)學(xué)專業(yè)2 班，廣東 深圳 518107〕

地中海貧血是指由于珠蛋白基因缺陷（突變、缺失）導(dǎo)致一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全被抑制所引起的一種溶血性疾病。此病屬于珠蛋白肽鏈間的正常平衡異常、正常血紅蛋白合成降低的遺傳性血紅蛋白病。地中海貧血可分為α、β、δβ 和δ 四個類型，其中以α 型和β 型地中海貧血最為常見[1-2]。地中海貧血屬于單基因遺傳病，因其治療費(fèi)用昂貴，因此目前國際上對于地中海貧血的防控重點主要是在孕前（如婚檢）或孕期通過進(jìn)行地中海貧血表型篩查、遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷等，避免重型地中海貧血兒的出生[3]。本研究對深圳市光明區(qū)接受免費(fèi)婚檢、孕檢的疑似患有地中海貧血的夫妻進(jìn)行地中海貧血基因檢測，以了解本地區(qū)地中海貧血基因的分型、分布，為優(yōu)生優(yōu)育、預(yù)防出生缺陷工作提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年10 月至2020 年6 月在中國科學(xué)院大學(xué)深圳醫(yī)院東院區(qū)接受免費(fèi)婚檢、孕檢的1860 例疑似患有地中海貧血的夫妻作為研究對象。其納入標(biāo)準(zhǔn)是：平均紅細(xì)胞體積（MCV）＜82 fl、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量（MCH）＜27 pg、紅細(xì)胞脆性試驗結(jié)果＜68%、血紅蛋白F（Hb-F）＞3.0、血紅蛋白A2（HbA2）＜2.5 或＞3.5、血紅蛋白電泳出現(xiàn)異常帶；近期無輸血史；知曉本研究內(nèi)容，并簽署了知情同意書。這些患者的年齡為20 ～38 歲，平均年齡為27 歲。

1.2 方法

1.2.1 主要儀器與試劑 人體血細(xì)胞DNA 提取試劑盒（由深圳亞能生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)），DNA擴(kuò)增試劑（購自廣州凱普醫(yī)藥有限公司），DNA提取儀（購自上海思路迪生物技術(shù)有限公司），ABI 2720 擴(kuò)增儀（由美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司生產(chǎn)），HB 2012A 雜交儀（由廣東凱普生物科技股份有限公司生產(chǎn)）。

1.2.2 樣本采集 采集研究對象的靜脈血2 mL，加入EDTA-K2 進(jìn)行抗凝處理。盡早對血液標(biāo)本進(jìn)行檢測，若不能即刻檢測應(yīng)放入冰箱中在2℃～4℃下冷藏保存。

1.2.3 基因分型檢測 在研究對象的外周血中提取出人類全基因組DNA 后，經(jīng)擴(kuò)增、導(dǎo)流雜交處理，進(jìn)行3 種α 地中海貧血缺失檢測：--SEA/αα、-α3.7/αα、-α4.2/αα ；3 種α 地中海貧血突變檢測：αCSα/αα、αQSα/αα、αwSα/αα ；17 種β 地 中 海 貧 血 突 變 檢 測：βCD17、βCD28、βCD29、βCD30、βCD31、βCD32、βCD43、βIVS-Ⅱ-654、βIVS-Ⅰ-1M、βIVS-Ⅰ-5M、βCD14-15、βCD27-28、βCD41-42、βCD71-72、βE、βInt、βCAP。有關(guān)文獻(xiàn)報道以上23 種基因變異占中國人常見地中海貧血突變基因的90% 以上[4-5]。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察對1860 例疑似患有地中海貧血的夫妻進(jìn)行地中海貧血基因檢測的結(jié)果。

2 結(jié)果

對1860 例疑似患有地中海貧血的夫妻進(jìn)行地中海貧血基因檢測發(fā)現(xiàn)其中共有669 人為地中海貧血基因攜帶者，陽性檢出率為35.97%。在669例地中海貧血基因攜帶者中，有455 例α- 地中海貧血患者，占68.01%（具體基因型見表1），共檢出16 種型別，其中--SEA/αα 型別最為常見；有197 例β- 地中海貧血患者，占29.45%（具體基因型見表2），共檢出10 種型別，其中以βCD41-42型別最為常見；有17 例α- 地中海貧血復(fù)合β- 地中海貧血患者，占2.54%（具體基因型見表3），共檢出9 種型別，其中--SEA/αα 復(fù)合βCD28、-α3.7/αα 復(fù)合βCD17型別最為常見。

表1 α- 地中海貧血基因型及構(gòu)成比

表2 β- 地中海貧血基因型及構(gòu)成比

表3 α- 地中海貧血復(fù)合β- 地中海貧血基因型及構(gòu)成比

3 討論

地中海貧血又叫海洋性貧血，是一種單基因遺傳病。此病可嚴(yán)重影響胎兒出生后的生活質(zhì)量，甚至可導(dǎo)致其死亡。地中海貧血患兒多于出生后6 個月左右開始發(fā)病，若未得到及時的輸血治療，可導(dǎo)致其出現(xiàn)多種并發(fā)癥，給其家庭和社會帶來沉重的負(fù)擔(dān)。目前，地中海貧血已成為全球關(guān)注的重大公共衛(wèi)生問題之一。地中海貧血的發(fā)病具有明顯的區(qū)域性，此病在我國的高發(fā)地區(qū)為兩廣地區(qū)和長江流域。相關(guān)的文獻(xiàn)報道稱，廣東省居民α- 地中海貧血基因的攜帶率高達(dá)8.5% 左右，β- 地中海貧血基因的攜帶率高達(dá)2.5%[6-7]。深圳市盡管是一個以外來人口為主的城市，但地中海貧血的發(fā)病率仍較高。因此，深圳市政府將婚檢、孕檢中的地中海貧血相關(guān)檢測定為免費(fèi)、必查的項目。本研究對深圳市光明區(qū)1860 例疑似患有地中海貧血的夫妻進(jìn)行基因檢測發(fā)現(xiàn)其中共有669 人為地中海貧血基因攜帶者，陽性檢出率為35.97%。在這669 例地中海貧血患者中，有455例患者患有16 種型別的α- 地中海貧血，有197例患者患有10 種型別的β- 地中海貧血，有17例患者患有9 種型別的α- 地中海貧血復(fù)合β-地中海貧血。這說明，本地區(qū)優(yōu)生優(yōu)育檢測人群地中海貧血基因分型復(fù)雜、種類繁多。多數(shù)重型α- 地中海貧血胎兒出生即死亡，重型β- 地中海貧血胎兒雖不會出生即死亡，但其在出生后需進(jìn)行定期輸血、除鐵、切脾等治療，費(fèi)用昂貴，不良反應(yīng)多且療效欠佳[8]。α- 地中海貧血復(fù)合β- 地中海貧血患兒雖然不用終身輸血，但其生存質(zhì)量顯著低于健康兒童，且隨著患兒年齡的增長，其病情可進(jìn)一步加重，若未接受規(guī)范有效的治療，可能發(fā)展成需要終生輸血，給患兒的家庭帶來沉重的負(fù)擔(dān)[9]。造血干細(xì)胞移植是目前臨床上治愈重型地中海貧血的唯一方法[10]。β- 地中海貧血是一種常見的因β- 珠蛋白基因突變引起的遺傳性溶血性貧血， 其突變類型高達(dá)200 多種，以點突變?yōu)橹?。本研究中共檢測出10 種突變類型，其中CD41-42 點突變類型所占的比例最高，其次為CD17 突變?，F(xiàn)階段隨著三胎政策的全面放開，地中海貧血的防控工作更加緊迫，需加大對地中海貧血的檢測力度。建議夫妻雙方地中海貧血初篩陽性的應(yīng)直接進(jìn)行地中海貧血基因檢測，以有效預(yù)防重度地中海貧血兒的出生。同時檢驗科的工作人員應(yīng)警惕，進(jìn)行地中海貧血基因檢測的結(jié)果呈陰性并不能排除罕見的地中海貧血型別，若在工作中發(fā)現(xiàn)疑似罕見的地中海貧血型別，應(yīng)及時與臨床醫(yī)生溝通，將患者轉(zhuǎn)診至上級醫(yī)院進(jìn)行地中海貧血基因全序列檢測及遺傳學(xué)咨詢。

綜上所述，深圳市光明區(qū)進(jìn)行婚檢、孕檢的夫妻地中海貧血基因的攜帶率較高，該地區(qū)應(yīng)重視地中海貧血的產(chǎn)前診斷，以降低重癥地中海貧血兒的出生率。