趙慶華，張 沖，路廣金，宋雨明，鄭 珂，陳波生， 鄒紹林，趙 燕，陳紅菊*

（1.山東省微山縣動(dòng)物衛(wèi)生服務(wù)所，山東 微山 277600； 2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東 泰安；3.山東寶來(lái)利來(lái)生物工程股份有限公司，山東 泰安）

近年來(lái)，隨著畜牧業(yè)的快速發(fā)展，畜禽病害頻發(fā)，飼料中添加益生菌來(lái)預(yù)防疾病和提高免疫力成為新的研究熱點(diǎn)。乳酸菌是家禽常用的益生菌，研究發(fā)現(xiàn)，添加適量乳酸菌不僅可以通過(guò)降低腸道pH，抑制病原菌的生長(zhǎng)，提高動(dòng)物的生長(zhǎng)性能、還可以改善腸道結(jié)構(gòu)、提高免疫器官指數(shù)、激活保護(hù)性免疫反應(yīng)、誘導(dǎo)炎性細(xì)胞因子產(chǎn)生等[1]。植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）是屬于乳酸菌的一類革蘭氏陽(yáng)性菌，其發(fā)酵過(guò)程中可以產(chǎn)生大量乳酸、細(xì)菌素等抑菌物質(zhì)，還可以合成維生素和氨基酸，維持腸道菌群的微生態(tài)平衡，促進(jìn)腸道消化，抑制致病菌在腸道內(nèi)繁殖，從而增強(qiáng)宿主免疫力[2]。研究發(fā)現(xiàn)，植物乳桿菌可以豐富肉雞腸道菌群的多樣性，促進(jìn)有益 細(xì)菌的增殖，減少病原菌的數(shù)量，并具有預(yù)防腹 瀉、促進(jìn)生長(zhǎng)[3]、增強(qiáng)免疫力和抗病力的作用[4]。

本實(shí)驗(yàn)室分離到一株植物乳桿菌LP-37，該菌株呈現(xiàn)出優(yōu)良的產(chǎn)酸及抑菌性能，但其作為飼料添加劑對(duì)提高肉雞生長(zhǎng)及免疫性能的功效尚不明確。本研究擬將植物乳桿菌LP-37增添到基礎(chǔ)日糧中，研究其對(duì)AA肉雞生長(zhǎng)性能、屠宰指標(biāo)、腸道形態(tài)和免疫相關(guān)基因表達(dá)的影響，以評(píng)估該菌株作為飼料添加劑的潛力，為畜牧業(yè)健康、快速發(fā)展提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)所用植物乳桿菌LP-37（LactobacillusplantarumLP-37）由本實(shí)驗(yàn)室分離保存的菌株，以2 %（v/v）的接種量接種到MRS液體培養(yǎng)基中，37 ℃ 靜置培養(yǎng)24 h后獲得菌液；AA肉雞采購(gòu)自山東和康源集團(tuán)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)分組及飼糧選用288只體重相近的1日齡健康試驗(yàn)動(dòng)物AA肉雞，雌雄各半，隨機(jī)分為C組（對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧）、L1組（飼喂添加1×107CFU/g的LP-37）、L2組（飼喂添加1×108CFU/g的LP-37），每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)16只雞，飼養(yǎng)21 d。試驗(yàn)使用的基礎(chǔ)日糧符合雞料新標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5916-2020《產(chǎn)蛋雞和肉雞配合飼料》。

試驗(yàn)在山東農(nóng)業(yè)大學(xué)科技創(chuàng)新園畜牧試驗(yàn)站進(jìn)行。AA肉雞飼養(yǎng)于封閉雞舍，籠養(yǎng)方式，光照、溫度、濕度、飲水、消毒及免疫程序均嚴(yán)格按照飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，4次/d定時(shí)飼喂。

1.2.2 檢測(cè)指標(biāo)（1）生長(zhǎng)指標(biāo)測(cè)定記錄21 d試驗(yàn)期間AA肉雞的體重與耗料量，統(tǒng)計(jì)初始與終末均重、平均增重、采食量與料肉比。（2）屠宰指標(biāo)測(cè)定試驗(yàn)肉雞飼養(yǎng)結(jié)束后，禁食12 h，每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選取2只雞稱重，屠宰解剖后，統(tǒng)計(jì)并計(jì)算半凈膛率、全凈膛率、腿肌率、胸肌率和腹脂率。（3）免疫器官指數(shù)的測(cè)定試驗(yàn)肉雞飼養(yǎng)結(jié)束，禁食12 h，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取2只雞稱重，解剖取胸腺、脾臟、法氏囊稱重，計(jì)算免疫器官指數(shù)。（4）腸道組織形態(tài)的測(cè)定試驗(yàn)肉雞飼養(yǎng)結(jié)束后屠宰，剪取十二指腸、空腸、回腸中段約0.5 cm放入多聚甲醛中固定1周后，制作石蠟切片，進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色，顯微鏡觀察并測(cè)量絨毛長(zhǎng)度、隱窩深度、肌層厚度，計(jì)算絨隱比。（5）免疫相關(guān)基因的測(cè)定取試驗(yàn)雞空腸、回腸中段，Trizol法提取RNA，反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定IFN-γ和IL-1β基因的表達(dá)量。

1.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析運(yùn)用Excel對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，軟件IBM SPSS statistics 21Duncan進(jìn)行ANOVA分析。

2 結(jié)果

2.1 植物乳桿菌LP-37對(duì)AA肉雞生長(zhǎng)指標(biāo)與屠宰指標(biāo)的影響

由表1可知，與對(duì)照C組相比，L1和L2組終末均重、平均體增重和采食量都略有增加，料肉比略有下降，差異不顯著（P＞0.05）。

表1 植物乳桿菌LP-37對(duì)AA肉雞生長(zhǎng)指標(biāo)的影響

由表2可知，L1組和L2組與對(duì)照C組相比，各屠宰指標(biāo)均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

表2 植物乳桿菌LP-37對(duì)AA肉雞屠宰指標(biāo)的影響

2.2 植物乳桿菌LP-37對(duì)AA肉雞腸道組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

由圖1可知，與對(duì)照C組相比，L1和L2組絨毛長(zhǎng)度增加，上皮細(xì)胞排列整齊，頂端完整，無(wú)破損。

圖1 植物乳桿菌LP-37對(duì)AA肉雞腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響（40×）

由表3可知，與對(duì)照C組相比，L1組、L2組十二指腸絨毛長(zhǎng)度顯著提升（P＜0.05）；L1組十二指腸、空腸、回腸絨隱比顯著提高（P＜0.05），L2組十二指腸、空腸絨隱比極顯著提高（P＜0.01），其余各組間腸道組織形態(tài)變化均不顯著（P＞0.05）。

表3 植物乳桿菌LP-37對(duì)AA肉雞腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

2.3 植物乳桿菌LP-37對(duì)AA肉雞免疫器官指數(shù)的影響

由表4可知，與對(duì)照C組相比，L1、L2組法氏囊指數(shù)顯著增高（P＜0.05），L2組胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均顯著增高（P＜0.05）。

表4 植物乳桿菌LP-37對(duì)AA肉雞免疫器官指數(shù)的影響

2.4 植物乳桿菌LP-37對(duì)AA肉雞免疫相關(guān)基因表達(dá)的影響

由圖2可知，與對(duì)照C組相比， L1和L2組空腸中的IFN-γ和IL-1β均顯著提高（P＜0.05）； L1組和L2組回腸中的IFN-γ和IL-1β均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

圖2 植物乳桿菌LP-37對(duì)AA肉雞免疫相關(guān)基因表達(dá)的影響

3 討論

大量研究表明，肉仔雞飼料中添加乳酸菌制劑，能提高肉雞的生長(zhǎng)性能，提高采食量[5]。也有研究認(rèn)為肉雞的平均體增重顯著增加，但采食量沒(méi)有發(fā)生變化，降低了料重比[6-7]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼料中添加LP-37，各生長(zhǎng)指標(biāo)與屠宰指標(biāo)均有所改善，但差異不顯著（P＞0.05），原因可能是養(yǎng)殖周期過(guò)短所致。禽類腸道絨毛的長(zhǎng)度與腸道吸收營(yíng)養(yǎng)能力成正比，絨毛長(zhǎng)則吸收能力強(qiáng)，反之則吸收能力弱[8]。研究發(fā)現(xiàn)益生菌能調(diào)控肉雞腸道微生物菌群，從而影響腸道屏障功能與發(fā)育，進(jìn)而提高小腸絨毛長(zhǎng)度[9]，并補(bǔ)充因炎癥等損耗的絨毛[10]。隱窩作為腸壁的凹陷，隱窩深度增加會(huì)減弱對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力。絨毛長(zhǎng)度、隱窩深度以及絨隱比可用來(lái)作為間接衡量飼料轉(zhuǎn)化效率的指標(biāo)。絨毛高度增加、隱窩深度降低、絨隱比增加表明腸道可更好地吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)[11]，即小腸消化機(jī)能提高。本研究結(jié)果顯示飼喂植物乳桿菌LP-37顯著提升了AA肉雞十二指腸絨毛長(zhǎng)度與絨隱比以及空腸、回腸的絨隱比，而且提升程度與添加乳酸菌濃度呈正相關(guān)，與張沖[4]范秋麗等[10]研究結(jié)果一致。分析其原因可能是植物乳桿菌LP-37在腸道定植后，代謝產(chǎn)物被腸黏膜吸收，從而促進(jìn)了腸上皮細(xì)胞生長(zhǎng)，改善了腸道結(jié)構(gòu)（絨毛變長(zhǎng)、隱窩變淺），最終增強(qiáng)了腸道的吸收能力。

禽類主要免疫器官為脾臟、胸腺和法氏囊，各器官發(fā)育情況反應(yīng)了機(jī)體免疫能力。有研究表明飼喂添加乳酸菌的飼料能顯著提高肉雞免疫器官指數(shù)，免疫器官的重量與益生菌添加濃度成正相關(guān)[11]。本實(shí)驗(yàn)飼喂1×108CFU/g植物乳桿菌LP-37，試驗(yàn)結(jié)果顯示脾臟、胸腺、和法氏囊指數(shù)與對(duì)照組差異顯著（P＜0.05），與前人研究結(jié)果一致。動(dòng)物免疫力的提高與免疫相關(guān)基因的表達(dá)上調(diào)也有關(guān)系，研究發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)益生菌能上調(diào)促炎因子的表達(dá)，適度的炎性因子表達(dá)量上調(diào)，有助于維持免疫平衡，增強(qiáng)對(duì)病原體的防御及識(shí)別能力，提高機(jī)體的免疫力[12]。本研究在日糧中加入植物乳桿菌LP-37，試驗(yàn)結(jié)果顯示空腸IFN-γ與IL-1β基因表達(dá)顯著上調(diào)，與李錦等[13]研究結(jié)果一致。表明植物乳桿菌LP-37能上調(diào)相關(guān)免疫基因的表達(dá)，驅(qū)動(dòng)炎癥反應(yīng)，加快吞噬細(xì)胞到達(dá)病灶，從而盡快消滅病原體，最終提高機(jī)體免疫力。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)在飼料中添加 1×107CFU/g與1×108CFU/g植物乳桿菌LP-37，對(duì)AA肉雞的生長(zhǎng)性能與屠宰性能有一定程度的提高，并顯著提高了免疫器官指數(shù)，改善了腸道組織形態(tài)，上調(diào)了免疫相關(guān)基因IFN-γ和IL-1β的表達(dá)。