俞建君，郝衛(wèi)強(qiáng)

(常州工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇 常州 213003)

布格替尼的化學(xué)名為5-氯-N2-[4-[(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]-2-甲氧基苯基]-N4-[2-(二甲基亞膦酰)苯基]-2,4-嘧啶二胺(I)，為酪氨酸激酶抑制藥，美國FDA 于2017年4月28日批準(zhǔn)阿瑞雅德(Ariad)公司的布格替尼片劑上市，用于對克唑替尼不耐受或用藥后疾病進(jìn)展的患者治療間變性淋巴瘤激酶(ALK)陽性的轉(zhuǎn)移性非小細(xì)胞肺癌。本文擬采用高效液相色譜法測定布格替尼原料藥的含量。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

LC-20A高效液相色譜儀(日本島津，包括 DGU-20A 在線脫氣機(jī)、LC-20AD Pump 四元泵、CTO-20AC 柱溫箱、SPD-20A紫外檢測器、島津LabSolutions工作站及 20 μL 手動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng))；Venusil C18(5 μm，4.6200 mm)色譜柱(Agela Technologies Inc)；Millipore 純凈水發(fā)生器。

色譜純甲醇(布格替尼標(biāo)準(zhǔn)品)，北京中科質(zhì)檢生物技術(shù)有限公司，布格替尼樣品，自制。

1.2 色譜條件

流動(dòng)相為磷酸二氫鉀(0.02 mol/L， pH由磷酸調(diào)節(jié)至4.50):甲醇=40:60，流速為1.0 mL/min，檢測波長為285 nm，柱溫為25 ℃，進(jìn)樣體積為20 μL。

1.3 對照品溶液和樣品溶液

精確稱取0.10 g的布格替尼標(biāo)準(zhǔn)品至100 mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度。合成的樣品以同法配制成溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長的選擇

將布格替尼標(biāo)準(zhǔn)品溶于甲醇中，以甲醇為參比，在200～350 nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，發(fā)現(xiàn)其在285 nm處有最大吸收，故選擇285 nm為布格替尼的檢測波長。

2.2 緩沖鹽pH的優(yōu)化

考察緩沖鹽pH 2.5～4.5 之間，樣品中布格替尼主峰與前后雜質(zhì)峰的分離情況。隨著 pH值提高，主峰的峰形得到改善，主峰及與前面雜質(zhì)峰的分離度提高。當(dāng)緩沖鹽pH值為4.5時(shí)，分離效果最佳(見圖1)。圖2為布格替尼對照品譜圖。

圖1 布格替尼專屬性色譜圖Fig.1 Specificity chromatograms of Brigatinib (Peak identifications: 1-impurity; 2-Brigatinib)

圖2 布格替尼對照品色譜圖Fig.2 Chromatograms of Brigatinib reference standards

2.3 方法評價(jià)

2.3.1 線性范圍

從布格替尼對照品溶液中，分別移取1.0 mL、3.0 mL、5.0 mL、8.0 mL、10.0 mL至50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容。在本文實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)樣分析，以峰面積對濃度作圖，結(jié)果表明0.020～0.200 mg/mL范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)為0.9999，線性關(guān)系良好。

2.3.2 定量限和檢測限

將標(biāo)準(zhǔn)溶液多次稀釋后作為定量限測定溶液，以10倍信噪比(S/N=10) 的結(jié)果作為定量限。得定量限為0.4520 μg/mL。

將標(biāo)準(zhǔn)溶液多次稀釋后作為檢測限測定溶液，以3倍信噪比(S/N=3) 的結(jié)果作為檢出限。得檢出限為0.1479 μg/mL。

2.3.3 精密度和回收率

取標(biāo)準(zhǔn)系列中間濃度溶液，連續(xù)進(jìn)樣6針，以峰面積的重復(fù)性驗(yàn)證方法的精密度，計(jì)算其RSD為0.60%。向空白溶液中分別加入低、中、高3個(gè)水平的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行加標(biāo)回收率的測定。結(jié)果(見表1)表明，布格替尼加標(biāo)平均回收率為98.93%。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

把配制好的樣品溶液放置24 h后進(jìn)樣分析，布格替尼含量的回收率100.4%，說明樣品溶液的穩(wěn)定性良好。峰面積重現(xiàn)性

2.3.5 耐用性試驗(yàn)

配制一定濃度的布格替尼溶液，分別改變色譜條件中的pH、流速、柱溫和流動(dòng)相比例，觀察布格替尼主峰與前一雜質(zhì)峰的分離度和主含量的回收率變化。結(jié)果表明，色譜條件的微小變化，對布格替尼主峰的分離度和回收率影響不大，見表2。

表1 布格替尼回收率試驗(yàn)

表2 方法耐用性試驗(yàn)數(shù)據(jù)

3 結(jié) 論

本文敘述了用高效液相色譜法測定ALK 抑制劑布格替尼含量的方法。本方法建立了布格替尼的色譜最佳分離條件，布格替尼含量測定的線性關(guān)系是良好的。精密度和準(zhǔn)確度較高，樣品的預(yù)處理并不煩瑣。因此，本方法可以用來對ALK 抑制劑布格替尼含量進(jìn)行快速而準(zhǔn)確的測定。