張和陽 王夢鴿 伍志文 黃 瑜 傅光華，3

（1.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所 福州 350013；2.福建農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院 福州 350119；3.龍巖學(xué)院 福建龍巖 364012）

H9N2亞型禽流感病毒（Avain influenza virus，AIV）在世界范圍的禽群中廣泛流行[1]。雖然該病致病力不高但病毒易變異，雞群感染后往往會影響生產(chǎn)性能，蛋雞感染后表現(xiàn)呼吸道、消化道異常及零星死亡、產(chǎn)蛋性能下降等癥狀，是近年來蛋雞養(yǎng)殖的常見疾病[2]。大腸桿菌病是由大腸桿菌引發(fā)的腸道疾病，伴有繼發(fā)性局部感染或全身感染，常表現(xiàn)為蛋雞多個臟器病變，具有較高的發(fā)病率和病死率，傳播速度極快[3]。部分蛋雞養(yǎng)殖場設(shè)施化程度較低，環(huán)境衛(wèi)生較差、疫病防控措施不到位，在氣溫驟降或持續(xù)高溫等應(yīng)激因素影響下，蛋雞群很容易發(fā)生多病原共感染[4-6]。2022年3月，龍巖某蛋雞場發(fā)生一起以產(chǎn)蛋率下降，伴隨大面積死亡的病情。場方將病死雞樣本寄到本實驗室，經(jīng)檢查后確診為H9亞型禽流感與大腸桿菌病共感染，通過緊急治療后病情得到有效控制。

1 發(fā)病情況及臨床癥狀

龍巖某蛋雞場飼養(yǎng)的3 000羽產(chǎn)蛋雞群出現(xiàn)呼吸困難，咳嗽、流淚，產(chǎn)蛋量下降，并伴有產(chǎn)軟殼蛋、畸形蛋，精神沉郁，采食量減少但飲水量增加，甩頭，肛門外翻，部分有腹瀉。

2 剖檢病變

剖檢3羽病死雞，可見肝臟表面有白色纖維素性滲出物附著且有明顯出血點，出現(xiàn)心包炎、肝周炎，肝臟及脾臟異常腫大易碎，腸道、氣管均有出血，卵巢出血并且卵泡破裂，輸卵管形成栓塞，卵黃凝固，胰腺有壞死點，喉頭及鼻竇部位有膿性分泌物。

3 初步診斷

根據(jù)發(fā)病情況及臨床剖檢特點，疑似為禽流感、雞安卡拉、傳染性支氣管炎、傳染性喉氣管炎、雞傳染性鼻炎和大腸桿菌病等。

4 實驗室病原檢查及診斷

4.1 病原檢查無菌采集病死雞的肝臟、脾臟及胰腺等實質(zhì)性臟器，剪碎后與3倍體積的無菌PBS（每毫升含2 000 U青霉素和鏈霉素）制備成混懸液，取適量進行8 000 r/min離心5 min，取200 uL上清，以病毒DNA/RNA抽提試劑盒，按照產(chǎn)品說明書提取樣品中的核酸。以獲得的核酸作為模板，開展雞腺病毒4型、禽流感病毒、雞呼腸孤病毒、新城疫病毒、雞傳染性支氣管炎、雞傳染性喉氣管炎、雞傳染性鼻炎及產(chǎn)蛋下降綜合征等雞常見病毒性疾病的核酸檢測。（RT-）PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠進行電泳。

結(jié)果表明，針對8種病毒的核酸（RT-）PCR檢測發(fā)現(xiàn)，從樣品中檢測到禽流感病毒核酸（見圖1），其余病原均呈陰性。將擴增產(chǎn)物送福州尚亞生物科技有限公司進行測序，獲得序列經(jīng)NCBI blast在線比對發(fā)現(xiàn)，與NCBI數(shù)據(jù)庫中H9亞型禽流感病毒核苷酸序列同源性達99.2%以上。

圖1 病原核酸擴增產(chǎn)物電泳圖

4.2 細菌分離培養(yǎng)無菌采集發(fā)病雞肝臟，挑取肝內(nèi)部組織劃線接種在LB培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂平板上，置37℃溫箱培養(yǎng)24 h。發(fā)現(xiàn)麥康凱瓊脂平板上長出圓形、邊緣整齊、扁平、呈鮮紅色的菌落。LB培養(yǎng)基上長出光滑、圓潤、半透明菌落。根據(jù)菌落特征判斷為大腸桿菌。

4.3 診斷根據(jù)以上實驗室病原檢測、分離鑒定結(jié)果，并結(jié)合發(fā)病雞群臨床癥狀及剖檢病變，確定該蛋雞群發(fā)病是因H9亞型禽流感與致病性大腸桿菌病共感染引起。

5 防 治

5.1 治療措施發(fā)生低致病性禽流感與致病性大腸桿菌病共感染后，應(yīng)采取緊急免疫接種，同時通過飲水或拌料途徑給藥。每100 L水添加卡那霉素和多西環(huán)素等抗生素，甘草顆粒拌料，雞舍周邊環(huán)境用0.02%百毒殺進行噴灑消毒。經(jīng)過4 d的治療后雞群呼吸道癥狀明顯好轉(zhuǎn)，采食量和產(chǎn)蛋性能逐漸恢復(fù)正常。

5.2 防控措施加強雞群疫苗免疫工作及血清抗體檢測，加強飼養(yǎng)管理，注意養(yǎng)殖環(huán)境衛(wèi)生，加強通風(fēng)換氣，做好定期消殺工作，加強帶雞消毒制度，利用中藥提高動物機體抵抗力、抗生素加強抗病保健功能。發(fā)現(xiàn)病情后，立即采取治療措施，診斷越及時、給藥越早，治療效果就越好。

6 討 論

1）近年來隨著家禽養(yǎng)殖業(yè)的迅猛發(fā)展，不同飼養(yǎng)規(guī)模和飼養(yǎng)方式的養(yǎng)禽企業(yè)、養(yǎng)殖合作社及大量散養(yǎng)戶大量涌向，飼養(yǎng)條件、設(shè)施化程度及技術(shù)力量參差不齊。部分蛋雞養(yǎng)殖場設(shè)施化程度較低，環(huán)境衛(wèi)生較差、疫病防控措施不到位，尤其是禁抗令的實施，雞場防疫形勢更加復(fù)雜，常出現(xiàn)老病未除新病不斷的局面，且常呈亞臨床癥狀或多病原共感染[4-6]。

2）H9亞型禽流感病毒為低致病性病毒，在我國飼養(yǎng)的家禽中流行較廣，感染蛋雞致死率較低，臨床上以呼吸道癥狀如咳嗽、啰音或鼻竇腫脹等為主，產(chǎn)蛋率及蛋品質(zhì)下降，沙殼蛋、軟殼蛋及畸形蛋增多[1-3]。

3）致病性大腸桿菌是一種常見的、對蛋雞具有較高致死性的病原，蛋雞發(fā)病后表現(xiàn)為食量下降、飲水增加、產(chǎn)蛋量減少，剖檢病死雞可見卵黃性腹膜炎，腹腔內(nèi)散發(fā)惡臭味，腹腔中充滿卵黃液，實質(zhì)性臟器表面覆蓋纖維素性滲出物，卵巢出血變形、卵泡破裂、輸卵管內(nèi)有多量渾濁物或干酪樣物[3]。

4）臨床上一旦出現(xiàn)氣溫驟降，或持續(xù)高溫應(yīng)激等，很容易出現(xiàn)這兩種病共感染，給臨床診斷帶來困難，容易造成誤診或漏診。因此在診斷時除要了解患鴨臨床癥狀和剖檢病變，還應(yīng)結(jié)合病原流行病學(xué)、利用實驗室檢查等手段，以提高診斷的準(zhǔn)確性。