郭愛華 曹媛

摘要：研究溫度、浸種時(shí)間、赤霉素（GA 3）用量、褪黑素用量和2，4-D溶液用量對(duì)苦苣菜種子萌發(fā)特性及幼苗生長(zhǎng)生理的影響，為苦苣菜選擇良好的萌發(fā)和生長(zhǎng)條件。設(shè)置不同溫度、浸種時(shí)間、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度處理苦苣菜種子，研究對(duì)苦苣菜發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)等發(fā)芽指標(biāo)及苗質(zhì)量、根長(zhǎng)、苗高等生長(zhǎng)生指標(biāo)，以及對(duì)脯氨酸含量、淀粉酶活性、過氧化物酶（POD）活性等生理代謝的影響。結(jié)果表明，25 ℃、浸種6 h時(shí)，苦苣菜的種子萌發(fā)指標(biāo)及幼苗生長(zhǎng)狀況顯著高于其他試驗(yàn)組;200 mg/L GA 3溶液對(duì)苦苣菜種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)顯著有效;100 μmol/L褪黑素溶液可顯著促進(jìn)苦苣菜細(xì)胞生理活性物質(zhì)含量的增加，脯氨酸含量、淀粉酶活性、POD活性分別較對(duì)照組高20.93 μg/g鮮質(zhì)量、2.28 U、26.66 U/（g·min）;10 mg/L 2，4-D溶液可顯著促進(jìn)苦苣菜種子萌發(fā)和幼苗生理代謝?？嘬牟朔N子最適宜的萌發(fā)溫度是25 ℃，最適宜的浸種時(shí)間是6 h;3種調(diào)節(jié)劑都不同程度地對(duì)苦苣菜種子萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用，其中 200 mg/L GA 3、100 μmol/L褪黑素、10 mg/L 2，4-D溶液處理的效果最顯著。

關(guān)鍵詞：苦苣菜;生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑;種子萌發(fā);幼苗;赤霉素;褪黑素;2，4-D溶液

中圖分類號(hào)： S636.904+.1? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2022）09-0148-06

苦苣菜（Sonchus oleraceus L.），別稱苦菜，屬菊科苦苣屬，是純天然、藥食同源的野生草本植物[1]，含有多種有效活性成分，如維生素C、類胡蘿卜素、短鏈脂肪酸、多糖、芹菜素、木樨素及其衍生苷類[2-3]，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。苦苣菜性微寒味苦，其嫩莖葉可涼食，是臨床上常用的清熱解毒、消暑保健、防治貧血、殺菌消炎、提高免疫力的藥物[4]，近年來(lái)受到較多學(xué)者的關(guān)注。Widderick等研究發(fā)現(xiàn)，苦苣菜喜光，暗黑可使其發(fā)芽率降低72%[5]。Ting等在2016年發(fā)表的研究發(fā)現(xiàn)，苦苣菜提取物對(duì)HepG-2、K562等腫瘤細(xì)胞有抑制作用，可防治癌癥[6]。苦苣菜的根、葉有較強(qiáng)的抗氧化活性[1]，具有抗?jié)僛7]、鎮(zhèn)痛的效果，對(duì)糖尿病、心血管疾病有一定的防治作用[8]?？嘬牟瞬粌H可作為蔬菜食用，還可作為藥劑開發(fā)，由于其有抗氧化及抑菌效果，還可作為化妝品添加劑及果蔬采后保鮮劑。目前，人們對(duì)苦苣菜的喜愛程度越來(lái)越深，對(duì)其需求量也相應(yīng)增長(zhǎng)。赤霉素（GA 3）、褪黑素和2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）等調(diào)節(jié)劑對(duì)植物種子萌發(fā)、幼苗生長(zhǎng)有一定影響，但對(duì)苦苣菜的作用尚未見報(bào)道。

本研究以苦苣菜種子為材料，研究溫度、浸種時(shí)間、GA 3、褪黑素、2，4-D等調(diào)節(jié)劑對(duì)苦苣菜種子萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)生理代謝的影響，從而得出較適宜苦苣菜的生長(zhǎng)條件，為苦苣菜的人工開發(fā)、大量種植提供技術(shù)方面的支持。由于野生苦苣菜資源有限，且晚秋及冬季缺乏，因此有關(guān)苦苣菜的培養(yǎng)及開發(fā)研究顯得極其重要。本研究旨在探討不同條件因素對(duì)苦苣菜種子萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)生理的影響，找尋最適宜苦苣菜的生長(zhǎng)條件，為提高苦苣菜的產(chǎn)率提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

苦苣菜種子品牌為琪龍?zhí)剡x，試驗(yàn)為2019年在呂梁學(xué)院生命科學(xué)系細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 苦苣菜種子萌發(fā)和幼苗的培養(yǎng) 將苦苣菜種子浸泡在裝有蒸餾水的燒杯中，浸泡一定時(shí)間后按間距擺放在有2層濕紗布的培養(yǎng)皿中，每皿放30粒，在生化培養(yǎng)箱中，使種子見光催芽、長(zhǎng)成幼苗。

1.2.2 發(fā)芽溫度的測(cè)定 將擺放好的種子分別置于15、20、25、30、35 ℃培養(yǎng)箱中，根據(jù)發(fā)芽指標(biāo)測(cè)定苦苣菜種子的最適發(fā)芽溫度，每組試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.3 浸種時(shí)間的測(cè)定 設(shè)置5組浸種時(shí)間，分別為1、6、12、18、24 h。浸種后將苦苣菜在“1.2.2”節(jié)中所得最適溫度下培養(yǎng)，每組試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.4 GA 3、褪黑素、2，4-D溶液的配制 分別配制質(zhì)量濃度為50、100、150、200、250、300 mg/L的GA 3溶液，質(zhì)量濃度為50、100、150、200、250 μmol/L的褪黑素溶液，質(zhì)量濃度為0.5、1、10、100、1 000 mg/L 的2，4-D溶液，將苦苣菜種子浸泡在不同濃度的溶液中，用篩選出的最佳浸種時(shí)間浸種，取出苦苣菜種子后，用清水沖洗若干次并用吸水紙吸干種子表面的水分，置于“1.2.2”節(jié)中所得最適溫度下培養(yǎng)，以清水處理作為對(duì)照，每組試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3 相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定方法

發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽指數(shù)（GI）、活力指數(shù)的測(cè)定參考孔佳茜等的方法[9]。

種子培養(yǎng)10 d后，選取長(zhǎng)勢(shì)一致的3株幼苗，測(cè)量平均根長(zhǎng)、苗高[9]。

脯氨酸含量的測(cè)定采用茚三酮顯色法;淀粉酶活性的測(cè)定采用硝基水楊酸法[10]。

過氧化物酶（POD）活性的測(cè)定采用愈創(chuàng)木酚法[11]。

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)使用Excel 2010，作圖使用GraphPad Prism 8.0.2，數(shù)據(jù)分析使用SAS 8.0。

2 結(jié)果與分析

2.1 溫度對(duì)苦苣菜種子萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)的影響

如圖1-a所示，在15～35 ℃的培養(yǎng)溫度處理下，除25、30 ℃處理苦苣菜種子的發(fā)芽率，30、35 ℃處理的發(fā)芽勢(shì)差異不顯著外，其他各組發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù)差異顯著（P<0.05）。在25 ℃的培養(yǎng)溫度處理下，苦苣菜種子的發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù)均達(dá)到了最大值，分別為78.8%、70.0%、9.25、2.3。如圖1-b所示，在15～35 ℃的培養(yǎng)溫度處理下，苦苣菜苗高、根長(zhǎng)、苗質(zhì)量呈先上升后下降的趨勢(shì)，在培養(yǎng)溫度為25 ℃時(shí)達(dá)到最高值，當(dāng)培養(yǎng)溫度為25、30 ℃時(shí)，苗質(zhì)量差異不顯著，但與其他各組間在苗高、根長(zhǎng)、苗質(zhì)量方面的差異均顯著（P<0.05）。隨著溫度繼續(xù)升高，各指標(biāo)均隨之降低，并影響幼苗發(fā)育。綜上分析可知，苦苣菜種子較適宜的發(fā)芽及培養(yǎng)溫度為25 ℃。5C0A1166-DC98-4EA5-8E9E-C74A9947F4B0

2.2 浸種時(shí)間對(duì)苦苣菜種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)的影響

如圖2-a所示，浸種6 h對(duì)苦苣菜種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽指數(shù)、活力指數(shù)都有顯著性影響，分別較浸種1 h時(shí)提高了46.7百分點(diǎn)、53.33百分點(diǎn)、7.08、1.62。浸種6～18 h，各試驗(yàn)處理對(duì)種子萌發(fā)的影響差異不顯著。由圖2-b可以看出，不同浸種時(shí)間對(duì)苦苣菜幼苗生長(zhǎng)的影響規(guī)律與影響種子萌發(fā)的規(guī)律相似，且浸種6～18 h對(duì)幼苗根長(zhǎng)和苗質(zhì)量的影響差異不顯著，浸種 24 h 反而不利于種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)。由此可見，在本研究中，最佳浸種時(shí)間為6 h。

2.3 不同濃度GA 3溶液浸種對(duì)種子萌發(fā)和幼苗生理的影響

從圖3-a、圖3-b可看出，不同濃度的GA 3溶液對(duì)苦苣菜種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)有一定影響，尤其對(duì)發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)、苗高的影響較大。低濃度的GA 3溶液對(duì)苦苣菜種子及幼苗發(fā)育有促進(jìn)作用，在濃度為200 mg/L時(shí)的促進(jìn)作用最明顯，與對(duì)照組相比，其發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)差異不顯著，而發(fā)芽勢(shì)、活力指數(shù)、根長(zhǎng)、苗質(zhì)量、苗高的差異均顯著（P<0.05）。此外，研究發(fā)現(xiàn)， 浸種溶液濃度較高時(shí)，對(duì)種子萌發(fā)及幼苗發(fā)育有一定的抑制作用。

從圖4可以看出，添加不同濃度的GA 3對(duì)苦苣菜幼苗生理物質(zhì)含量有一定的影響。與對(duì)照組相比，GA 3溶液對(duì)淀粉酶活性和POD活性有促進(jìn)作用，且濃度需在150～250 mg/L以上。200 mg/L GA 3溶液對(duì)脯氨酸含量（以鮮質(zhì)量計(jì)）有增加作用，較對(duì)照組增加了3.89 μg/g。

2.4 不同濃度褪黑素溶液對(duì)苦苣菜種子萌發(fā)和幼苗生理指標(biāo)的影響

由圖5可以看出，過低或過高濃度的褪黑素都不利于苦苣菜種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)。100 μmol/L褪黑素溶液處理對(duì)苦苣菜發(fā)芽指標(biāo)及幼苗生長(zhǎng)有促進(jìn)作用，但與對(duì)照組相比，發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽指數(shù)差異不顯著;100 μmol/L褪黑素溶液處理苦苣菜苗高、根長(zhǎng)、苗質(zhì)量的促進(jìn)作用顯著高于對(duì)照組。250 μmol/L褪黑素溶液處理對(duì)苦苣菜種子的抑制作用較明顯，其發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽指數(shù)均顯著低于對(duì)照組，而對(duì)苦苣菜幼苗苗高、苗質(zhì)量的抑制作用卻不顯著。

從圖6可以看出，大于100 μmol/L濃度的褪黑素溶液處理可顯著促進(jìn)苦苣菜細(xì)胞生理活性物質(zhì)含量的提高，且隨著褪黑素濃度的進(jìn)一步增加，其促進(jìn)作用降低。

2.5 不同濃度2，4-D溶液浸種對(duì)苦苣菜種子萌發(fā)的影響

不同濃度2，4-D溶液浸種對(duì)苦苣菜種子萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)的影響不同。從圖7可以看出，用 10 mg/L 2，4-D溶液浸種的種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)分別較對(duì)照組提高了8.89%、11.12%，且差異顯著（P<0.05）;10 mg/L 2，4-D溶液浸種后萌發(fā)的幼苗苗高、苗質(zhì)量也較對(duì)照顯著增高。

圖8顯示，2，4-D溶液對(duì)脯氨酸含量、淀粉酶活性、POD活性均有一定的影響。2～20 mg/L 2，4-D 溶液對(duì)淀粉酶活性均具有增強(qiáng)作用，且組內(nèi)差異不顯著。10 mg/L 2，4-D溶液對(duì)脯氨酸含量和POD活性都有顯著的促進(jìn)作用。

3 討論

苦苣菜不僅可以鮮食，還可加工成各類食品和飲料，如苦苣菜掛面、苦苣菜茶。Su等研究發(fā)現(xiàn)，苦苣菜對(duì)O 3敏感，可作為特殊的指示植物[12]?？嘬牟司哂休^強(qiáng)的抗氧化及抑菌功能[13]，是可進(jìn)一步開發(fā)的天然人工添加劑的潛在資源，同時(shí)可成為化妝品的加工原料。由此可見，加大苦苣菜產(chǎn)量、豐富其資源勢(shì)在必行。

苦苣菜種子較小，容易被風(fēng)吹散，在土壤中保留的時(shí)間較短，其萌發(fā)、生長(zhǎng)受溫度、水勢(shì)、光照等條件影響[5]，在5～35 ℃均可發(fā)芽，0～0.2 MPa為其最佳萌發(fā)水勢(shì)條件，當(dāng)光照不充分時(shí)，萌發(fā)率顯著降低。本研究發(fā)現(xiàn)，苦苣菜種子浸種6 h后，在培養(yǎng)溫度為25 ℃條件下的發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)等發(fā)芽指標(biāo)和生長(zhǎng)生理代謝較高，有利于種子萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)，浸種時(shí)間過長(zhǎng)或溫度過高反而不利于種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)。

生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑具有效率高、低毒性等特點(diǎn)，符合現(xiàn)代農(nóng)業(yè)綠色可持續(xù)發(fā)展的要求。GA 3是一種赤霉酸生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，外源施加GA 3可促進(jìn)種子萌發(fā)，在種子萌發(fā)過程中，GA 3從胚中釋放出來(lái)，通過α-淀粉酶刺激特定基因的mRNA轉(zhuǎn)錄[14]，900 mg/L GA 3浸種可使番茄在較短時(shí)間內(nèi)獲得較旺盛的幼苗，且田間發(fā)育狀況較好。在本研究中，200 mg/L GA 3溶液對(duì)苦苣菜種子萌發(fā)和幼苗生理指標(biāo)的影響顯著，其原因可能是GA 3的吸收增加了蛋白質(zhì)的積累，以滿足能量需求、氧化還原調(diào)節(jié)和代謝活化[15-16]。褪黑素于1995年首次在植物中被發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有研究結(jié)果表明，褪黑素可調(diào)節(jié)植物細(xì)胞膜的穩(wěn)定性，提高抗氧化性能[17]，影響根系生長(zhǎng)，從而增加根系吸收水分和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的能力，提高生物量產(chǎn)量，調(diào)節(jié)基因表達(dá)[18]，促進(jìn)甘藍(lán)、黃瓜、大豆、番茄等植物種子的發(fā)芽，同時(shí)對(duì)干旱、 鹽脅迫、重金屬等脅迫有修復(fù)作用[19]。這也解釋了為什么在本研究中，褪黑素處理顯著促進(jìn)了幼苗苗高、根長(zhǎng)、苗質(zhì)量、脯氨酸含量、淀粉酶活性及POD活性的增加。2，4-D是一種常用的生長(zhǎng)素類似物，可促進(jìn)細(xì)胞分裂和伸長(zhǎng)，影響根系發(fā)育及物質(zhì)運(yùn)輸[20]，低濃度2，4-D溶液就可促進(jìn)種子萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)代謝。

4 結(jié)論

在本研究的溫度、浸種時(shí)間范圍內(nèi)，25 ℃條件下種子的萌發(fā)效果最好，浸種6 h萌發(fā)及活力較高且有利于幼苗生長(zhǎng)。不同調(diào)節(jié)劑對(duì)苦苣菜種子萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)代謝均有低濃度促進(jìn)、高濃度抑制的功效，200 mg/L GA 3、100 μmol/L褪黑素、10 mg/L 2，4-D溶液的效果最明顯。褪黑素對(duì)于幼苗的作用顯著高于對(duì)種子的作用。

參考文獻(xiàn)：

[1] 韓陽(yáng)陽(yáng)，王天曉，朱海芳，等. 苦菜不同部位提取物的抗氧化活性[J]. 食品科學(xué)，2010，31（19）：45-48.5C0A1166-DC98-4EA5-8E9E-C74A9947F4B0

[2]Rangika M S M M. Antioxidant activities of Sonchus oleraceus L.[D]. Wellington：Victoria University of Wellington，2014.

[3]Liu Z W，Zhao X L. Effects of different extraction methods on extraction rate of polysaccharide from Sonchus oleraceus L.[J]. Medicinal Plant，2010，1（5）：35-36，39.

[4]Yin J，Si C L，Wang W H. Antioxidant activity of flavonoids and their glucosides from Sonchus oleraceus L.[J]. Journal of Applied Biological Chemistry，2008，51（2）：57-60.

[5]Widderick M J，Walker S R，Sindel B M，et al. Germination，emergence，and persistence of Sonchus oleraceus，a major crop weed in subtropical Australia[J]. Weed Biology & Management，2010，10（2）：102-112.

[6]Ting H Y，Li Q，Wang Y L，et al. Anti-tumor effect of hot aqueous extracts from Sonchus oleraceus （L.） L. and Juniperus sabina L.—two traditional medicinal plants in China[J]. Journal of Ethnopharmacology，2016，185：289-299.

[7]Alothman E A，Awaad A S，Safhi A A，et al. Evaluation of anti-ulcer and ulcerative colitis of Sonchus oleraceus L.[J]. Saudi Pharmaceutical Journal，2018，26（7）：956-959.

[8]Fabiana C V，Marina de M P，Santos-e-Silva L D，et al. Evaluation of the antinociceptive activity of extracts of Sonchus oleraceus L. in mice.[J]. Journal of Ethnopharmacology，2009，124（2）：306-310.

[9]孔佳茜，趙銘森，孟曉康，等. PEG模擬干旱脅迫對(duì)大麻種子萌發(fā)的影響[J]. 種子，2020，39（9）：26-30，52.

[10] 趙海蓓，危常州，張新疆，等. 腐殖酸浸種對(duì)玉米種子萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)的影響[J]. 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)，2020，57（11）：2118-2125.

[11]張明聰，何松榆，秦 彬，等. 外源褪黑素緩解干旱脅迫對(duì)春大豆苗期影響的生理調(diào)控效應(yīng)[J]. 大豆科學(xué)，2020，39（5）：742-750.

[12]Su B Y，Zhou M H，Xu H，et al. Photosynthesis and biochemical responses to elevated O 3 in Plantago major and Sonchus oleraceus growing in a lowland habitat of northern China[J]. Journal of Environmental Sciences，2017，53（6）：113-121.

[13]McDowell A，Thompson S，Stark M，et al. Antioxidant activity of Puha （Sonchus oleraceus L.） as assessed by the cellular antioxidant activity （CAA） assay[J]. Phytotherapy Research，2011，25（12）：1876-1882.

[14]Balaguera-López H E，Cárdenas-Hernández J F，lvarez-Herrera J G，et al. Effect of gibberellic acid （GA 3） on seed germination and growth of tomato （Solanum lycopersicum L.）[J]. Acta Horticulturae，2009，821（821）：141-148.

[15]Lando A P，Viana W G，Vale E M，et al. Cellular alteration and differential protein profile explain effects of GA 3 and ABA and their inhibitor on Trichocline catharinensis （Asteraceae） seed germination[J]. Physiologia Plantarum，2020，169（2）：258-275.

[16]文景锜，陳仕勇，柏曉玲，等. H 2O 2處理對(duì)3種高寒燕麥種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)的影響[J]. 種子，2020，39（10）：86-88，93.

[17]Castaares J L，Bouzo C A. Effect of exogenous melatonin on seed germination and seedling growth in melon （Cucumis melo L.） under salt stress[J]. Horticultural Plant Journal，2019，5（2）：79-87.

[18]Liu J L，Wang W X，Wang L Y，et al. Exogenous melatonin improves seedling health index and drought tolerance in tomato[J]. Plant Growth Regulation，2015，77（3）：317-326.

[19]Simlat M，Ptak A，Skrzypek E，et al. Melatonin significantly influences seed germination and seedling growth of Stevia rebaudiana Bertoni[J]. PeerJ，2018，6（6）：e5009-e5033.

[20]Clarke C R，Tegg R S，Thompson H K，et al. Low-dose foliar treatments of the auxin analog 2，4-D reduce potato common scab and powdery scab for multiple potato cultivars and enhance root development[J]. Crop Protection，2020，136：105-208.5C0A1166-DC98-4EA5-8E9E-C74A9947F4B0