陳敬然，杜微波，張志強(qiáng)，沈建梅

(北京康仁堂藥業(yè)有限公司中藥配方顆粒關(guān)鍵技術(shù)國家地方聯(lián)合工程研究中心/北京市中藥配方顆粒工程技術(shù)研究中心，北京101301)

狗脊為蚌殼蕨科植物金毛狗脊Cibotiumbarometz(L.)J.Sm.的干燥根莖[1]，是傳統(tǒng)的祛風(fēng)濕中藥，臨床上根據(jù)癥狀的差異分別使用狗脊、燙狗脊，中醫(yī)理論認(rèn)為生狗脊以祛風(fēng)濕、利關(guān)節(jié)為主，燙狗脊以補(bǔ)肝腎、強(qiáng)腰膝為主，現(xiàn)代研究認(rèn)為化學(xué)成分的變化是生熟異治的原因，恰當(dāng)?shù)呐谥瞥潭仁侵兴庯嬈饔糜谂R床的重要保障，而關(guān)于飲片炮制程度是否合適的判別方法研究鮮有報(bào)道[2]，目前大多數(shù)的研究更多的是關(guān)注于炮制機(jī)理、炮制后成分差異及炮制工藝的確定，如解世全等[3]通過對燙狗脊炮制工藝的研究，發(fā)現(xiàn)燙狗脊飲片，其砂燙時(shí)間不同、飲片鼓起程度不同，對原兒茶酸含量也存在影響，鼓起程度高的原兒茶酸含量相對較高[4]；袁葉飛等[5]通過狗脊膨化實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)體積增大前后的狗脊飲片，體積變化大的醇溶性浸出物的含量明顯增加，而且鎮(zhèn)痛功效明顯增強(qiáng)。通過以上研究可知，燙狗脊炮制過程中發(fā)生了表面鼓脹的情況，《中國藥典》2020版也將燙狗脊的炮制描述為“砂燙至鼓起”，但應(yīng)鼓脹到什么程度，法定標(biāo)準(zhǔn)和現(xiàn)代研究均沒有給出明確的標(biāo)準(zhǔn)。對于市場上應(yīng)用的燙狗脊的質(zhì)量評估只能以《中國藥典》2020版“燙狗脊”項(xiàng)下的原兒茶酸含量限度標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判斷，但原兒茶酸的含量與炮制程度的相關(guān)性研究卻未見報(bào)道，因此采用法定標(biāo)準(zhǔn)不能判斷燙狗脊是否炮制到位。本研究從燙狗脊?fàn)C制后體積膨脹出發(fā)，將炮制前后其飲片密度差異與專家判別結(jié)果相關(guān)聯(lián)，明確燙狗脊炮制到位的密度限值，建立了一種快速準(zhǔn)確的判定燙狗脊飲片炮制程度的方法，以彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的空白。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters ACQUITY UPLC?H-Class超高效液相色譜儀，PDA Detector紫外檢測器，Empower 3色譜工作站；ME104E電子天平(梅特勒·托利多)，JY2002電子天平(梅特勒·托利多)，BSA124S電子天平(賽多利斯科技儀器(北京)有限公司)，BT25S電子天平(賽多利斯科技儀器(北京)有限公司)，KQ-500DB超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試劑與試藥

原兒茶酸對照品(批號：110809-201906，中國食品藥品檢定研究院)；甲醇、磷酸為色譜純，水為屈臣氏蒸餾水，其他試劑均為分析純。

試驗(yàn)所用生狗脊片、燙狗脊分別產(chǎn)于廣西、廣東、云南等地，共21批，購自安徽亳州藥材市場，飲片經(jīng)北京康仁堂藥業(yè)有限公司于立偉老師鑒定為蚌殼蕨科植物金毛狗脊(Cibotiumbarometz(L.) J.Sm.)的干燥根莖。詳情見表1。

表1 材料來源

2 方法與結(jié)果

2.1 燙狗脊飲片炮制程度判定法

根據(jù)文獻(xiàn)調(diào)研，解世全等[3]通過正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選出了燙狗脊最佳工藝，得出砂燙時(shí)間對狗脊中成分影響最大，砂燙溫度影響較小，砂量幾乎無影響，最終工藝為：180～190 ℃，砂燙6 min，用砂量為8倍量。白桐菲、許枬等[6-7]也驗(yàn)證了該工藝的可行性，還發(fā)現(xiàn)飲片的規(guī)格和炮制工藝有很大關(guān)系，當(dāng)飲片為厚度30 mm及以上的飲片，炮制時(shí)間應(yīng)在12～15 min，用砂量為10倍量，且砂燙溫度應(yīng)增加至200～220 ℃，由于本研究所使用的狗脊飲片厚度均在10～30 mm，因此將砂燙溫度設(shè)定為200～220 ℃，砂量控制為8～10倍，對砂燙時(shí)間進(jìn)行考察。

2.1.1 燙狗脊飲片的制備 將河砂置于熱鍋內(nèi)，加熱至200～220 ℃，取不同批次大小均勻的生狗脊片約100 g，置熱鍋內(nèi)，翻炒，分別炒制5、8、11、14、17、20 min時(shí)取出，放涼，除去殘存絨毛，即得燙狗脊飲片。

2.1.2 飲片檢測 將不同炮制時(shí)間的燙狗脊飲片，按《中國藥典》中燙狗脊飲片含量測定方法進(jìn)行檢測。結(jié)果狗脊飲片炮制5 min后，飲片中水分受熱蒸發(fā)，且燙狗脊飲片原兒茶酸含量均符合《中國藥典》規(guī)定，在狗脊飲片炮制8 min后，飲片中水分已基本恒定。見表2。

2.1.3 燙狗脊飲片炮制程度判定方法的建立 取河砂400 g，置于燒杯中，震蕩，保證砂面水平，測定高度，記錄。取生狗脊飲片及不同炮制時(shí)間的燙狗脊飲片各30 g，置同一燒杯中，倒入400 g河砂，震蕩，保證砂面水平，測定高度，計(jì)算密度值；重復(fù)上述操作3次，計(jì)算密度值的平均值，作為最終密度值；并請從事飲片鑒定的專家進(jìn)行鑒定，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。見表2。

表2 炮制程度密度值

由以上結(jié)果可知，當(dāng)燙狗脊飲片的密度為0.43～0.60 g·cm-3時(shí)，原兒茶酸含量符合藥典規(guī)定，且專家鑒定為合格炮制品；當(dāng)燙狗脊飲片的密度>0.60 g·cm-3或<0.43 g·cm-3時(shí)，為不合格炮制品。

2.1.4 方法學(xué)考察 (1)重復(fù)性考察：由同一個(gè)分析人員在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，對同一燙狗脊飲片均按照“2.1.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行測定，在1天之內(nèi)重復(fù)測試6次，并計(jì)算RSD。結(jié)果燙狗脊飲片平均密度值為0.56，RSD為0.73%。

(2)精密度考察：選擇6名不同的實(shí)驗(yàn)人員，在同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，對同一燙狗脊飲片均按照“2.1.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行測定，并計(jì)算RSD。結(jié)果不同實(shí)驗(yàn)人員測定燙狗脊飲片平均密度值為0.56，RSD為0.73%。

(3)穩(wěn)定性考察：由同一個(gè)分析人員在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，對同一燙狗脊飲片按照“2.1.3”項(xiàng)下方法分別在0、2、4、6、8、12、18、25 h進(jìn)行測定，并計(jì)算RSD。結(jié)果不同時(shí)間測定燙狗脊飲片平均密度值為0.56，RSD為0.83%。

(4)方法驗(yàn)證：將隨機(jī)在市場中采購的18批燙狗脊飲片，按照“2.1.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行測定；并參照《中國藥典》中“燙狗脊含量測定”項(xiàng)下的檢測方法進(jìn)行原兒茶酸的含量檢測；同時(shí)請專業(yè)從事飲片鑒定10年的專家進(jìn)行判定，結(jié)果表明本判定方法針對燙狗脊飲片炮制程度的判斷結(jié)果與專家鑒定的燙狗脊飲片炮制方法一致。見表3。

表3 不同批次燙狗脊密度值驗(yàn)證結(jié)果

3 結(jié)語

根據(jù)文獻(xiàn)調(diào)研，燙狗脊在炮制過程中其化學(xué)成分原兒茶酸-3-O-糖苷受到加熱的影響可分解成原兒茶酸和糖[8-10]，《中國藥典》2020版也采用原兒茶酸的含量限值對燙狗脊進(jìn)行質(zhì)量控制，要求燙狗脊中原兒茶酸的含量不得少于0.02%，在本實(shí)驗(yàn)研究過程中發(fā)現(xiàn)，采用該方法檢測時(shí)，燙狗脊飲片中原兒茶酸和其同分異構(gòu)體在炮制未合格的情況下，特征峰分離效果較差，易造成原兒茶酸含量測定不準(zhǔn)確，因此采用《中國藥典》方法檢測原兒茶酸含量增加了判別錯(cuò)誤的風(fēng)險(xiǎn)。

2020版《中國藥典》中規(guī)定燙狗脊的炮制方法為：照燙法(通則0213)用砂燙至鼓起，放涼后除去殘存絨毛。目的是使狗脊藥材高溫處理后質(zhì)地疏松，利于煎出有效成分，但砂炒至藥材呈疏松鼓起狀，并不易把握火候，往往因?yàn)橐陨盀槊浇閷?dǎo)致受熱不均勻，出現(xiàn)一部分藥材已發(fā)生炭化而另一部分藥材卻炮制不徹底的現(xiàn)象[11]，因此造成大量偽劣飲片混入市場，市售燙狗脊飲片質(zhì)量參次不齊，無法判斷，嚴(yán)重影響了中藥的臨床功效。

本實(shí)驗(yàn)證明，采用密度測定法對燙狗脊飲片炮制程度進(jìn)行了判定，該方法有利于本實(shí)驗(yàn)采用密度值測定法對燙狗脊飲片炮制程度進(jìn)行判定，密度值法基于燙狗脊受熱體積增大，通過對燙狗脊飲片體積增大前后密度的變化，以密度客觀數(shù)據(jù)代替主觀經(jīng)驗(yàn)判斷，因此使?fàn)C狗脊炮制程度“可視化”。本實(shí)驗(yàn)通過對比專家鑒定法對市售燙狗脊飲片判斷準(zhǔn)確率的方式進(jìn)行驗(yàn)證，密度值法的準(zhǔn)確率可達(dá)到90%，因此本方法具有方便快捷、成本低廉、準(zhǔn)確性高的特點(diǎn)。

本研究提供的燙狗脊飲片炮制程度判斷方法，脫離了常規(guī)采用色譜研究對炮制程度進(jìn)行判斷的方法，是一種更為簡便的方法，可在不損壞樣品的情況下，進(jìn)行快速測定；并將飲片炮制前后體積的變化以密度值作為表現(xiàn)形式，實(shí)現(xiàn)燙狗脊炮制狀態(tài)的量化，將砂燙過程中飲片性狀的變化以數(shù)據(jù)形式展示，更加透明和簡單易懂，并為其他品種的炮制判斷方法提供了一種新思路。