姚 波，黃 力, 李冬麗

(昆明冶金高等專(zhuān)科學(xué)校環(huán)境與化工學(xué)院，云南 昆明 650033)

0 引 言

滇黃精(polygonatum kingianum Coll.et Hemsl)為百合科黃精屬的多年生草本植物的干燥根莖，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、健脾、潤(rùn)肺、益腎等功能[1]，是一種“藥食同源”的珍品，譽(yù)有“血?dú)怆p補(bǔ)之土”之稱(chēng)。產(chǎn)于云南的滇黃精，質(zhì)量較佳[2]，是云南重要的道地藥材?，F(xiàn)代藥理研究表明其活性成分最主要為黃精多糖，具有抗腫瘤、調(diào)節(jié)血糖血脂、抗衰老、免疫調(diào)節(jié)以及抗氧化損傷等作用[3-7]?，F(xiàn)在生產(chǎn)中較多采用溶劑水[8]提取黃精多糖，但滇黃精提取多糖后的藥渣中仍含有多糖等活性物質(zhì)，而這些藥渣通常作為廢棄物遺棄，造成極大的資源浪費(fèi)。鑒于此，本文首次采用苯酚-硫酸法對(duì)云南滇黃精藥渣中多糖的含量進(jìn)行測(cè)定評(píng)價(jià)，以期在解決環(huán)境污染問(wèn)題、實(shí)現(xiàn)二次資源利用的同時(shí)，為進(jìn)一步高效利用滇黃精資源提供理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)器材

1.1 材 料

滇黃精藥材于2020年購(gòu)于云南宗順生物科技有限公司，切片并經(jīng) 60 ℃ 恒溫干燥至恒重。

1.2 試 劑

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品(天津市鳳船化學(xué)試劑科技有限公司 AR批號(hào)：20200408)；95%乙醇(重慶川東化工有限公司AR 批號(hào)：20191201)；苯酚(麥克林 AR 批號(hào)：20200312)；濃硫酸(西隴科學(xué)有限公司 AR 批號(hào)：20200116)；實(shí)驗(yàn)用水為昆明冶金高等專(zhuān)科學(xué)校實(shí)驗(yàn)室自制。

1.3 儀 器

可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海元析儀器有限公司 UV—5900)；電子天平(JJ124BC型 常州市雙杰測(cè)試儀器廠)；回流裝置；數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海梅香儀器有限公司 HH—4)；數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱(鶴壁華諾電子科技有限公司101—1A)。

2 方法與結(jié)果

2.1 滇黃精藥渣的獲得

將滇黃精藥材粉碎，使其過(guò)φ0.45 mm 篩；稱(chēng)取過(guò)篩后的粉末 5 g，加80%的乙醇 100 mL，置水浴中回流提取 1 h，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)?0%的乙醇洗滌3次，過(guò)濾；殘?jiān)屑铀?100 mL 水浴回流 1 h，熱過(guò)濾，殘?jiān)脽崴礈?次；最后集中所得殘?jiān)?jīng) 60 ℃ 烘干，得滇黃精藥渣，裝袋密封備用。

2.2 滇黃精藥渣多糖的提取

取上述干燥的滇黃精藥渣細(xì)粉 0.25 g，精密稱(chēng)定，置圓底燒瓶中，加80%的乙醇 50 mL，置水浴中回流 1 h，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)?0%熱乙醇洗滌3次，每次洗滌乙醇用量 10 mL,將殘?jiān)盀V紙置圓底燒瓶中，加水 50 mL，置水浴中加熱回流1 h,趁熱過(guò)濾，殘?jiān)盁坑脽崴礈?次，每次洗滌熱水用量 10 mL，合并濾液與洗液，放冷，轉(zhuǎn)移至 250 mL 量瓶中，加水至刻度線，搖勻。再?gòu)闹腥?20 mL，加水定容到 100 mL 容量瓶中，即得。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

2.3.1 對(duì)照品溶液的配置

取經(jīng) 105 ℃ 干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖對(duì)照品精密稱(chēng)定 0.1 g，于 100 mL 燒杯中加水溶解，定容至 1 000 mL ，置4 ℃冰箱中貯存。

2.3.2 5%苯酚試液的配制

精密稱(chēng)取 80 g 苯酚于 100 mL 燒杯中，加水 20 mL 溶解，轉(zhuǎn)移至 100 mL 棕色容量瓶中定容，置 4 ℃ 冰箱中避光保存。吸取 5 mL 上述80%的苯酚溶液溶于 75 mL 水中，混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.3.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

分別精密吸取對(duì)照品溶液和多糖樣品溶液各 1.00 mL 于具塞刻度試管中，分別精密加入配制的5%苯酚溶液 1.00 mL,快速加入 5.0 mL 濃硫酸溶液，放冷后置于水浴中保溫 10 min ，取出，立即置冰水浴中冷卻 10 min，放至室溫。用可見(jiàn)分光光度計(jì)在400～700 nm 波長(zhǎng)范圍進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果樣品與對(duì)照品溶液在 490 nm 處均有相同最大吸收峰,故確定 490 nm 為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密吸取無(wú)水葡萄糖對(duì)照品儲(chǔ)備液 0 mL,0.2 mL，0.4 mL，0.6 mL，0.8 mL，1.0 mL 置于 25 mL 的具塞試管中，用蒸餾水補(bǔ)至 1.0 mL。向試液中加入5%苯酚溶液 1.0 mL，然后快速加入 5.0 mL 濃硫酸溶液，放冷后置于水浴中保溫 10 min，取出，立即置冰水浴中冷卻 10 min，放至室溫。以相應(yīng)試劑為空白，參照可見(jiàn)分光光度法在 490 nm 處測(cè)吸光度，以吸光度(y)為縱坐標(biāo)，葡萄糖質(zhì)量濃度(mg/mL)(x)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：y=7.505 7x+ 0.002 7, (r=0.999 9)，如圖1所示，線性關(guān)系良好 。

圖1 葡萄糖溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of glucose solution

2.4 精密度試驗(yàn)

精密量取2.2項(xiàng)下的供試液 1 mL，按2.3.3項(xiàng)操作，以相應(yīng)試劑為空白，于 490 nm 處測(cè)定吸光度，由表1可知吸光度的RSD=1.6%,表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密量取多糖供試液 1 mL，按2.3.3項(xiàng)顯色處理，在 2 h 內(nèi)測(cè)定樣品液的吸收度，結(jié)果樣品吸光度的RSD=0.55%，由表2可知樣品在 2 h 內(nèi)是穩(wěn)定的。

表1 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Precision experimental results

表2 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Stability test results

2.6 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

精密稱(chēng)取藥渣6份，按2.2項(xiàng)和2.3.3項(xiàng)處理，測(cè)定多糖供試液吸光度，結(jié)果RSD=1.54%，見(jiàn)表3。

2.7 加樣回收率

精密稱(chēng)取6份藥渣樣品，其中5份精密加入葡萄糖對(duì)照品適量，1份作為空白對(duì)照，按2.2項(xiàng)和2.3.3項(xiàng)方法處理，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為99.40%，RSD為0.38%，見(jiàn)表4。

表3 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.3 Reproducibility experiment results

表4 加樣回收率結(jié)果Tab.4 Recovery results

表5 黃精多糖含量測(cè)定結(jié)果Tab.5 Determination results of polysaccharide

2.8 多糖含量的測(cè)定

按2.2項(xiàng)方法制備樣品溶液,按2.3.3項(xiàng)下操作，以相應(yīng)試劑為空白，在 490 nm 下進(jìn)行測(cè)定，由回歸方程計(jì)算樣品中多糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，所得結(jié)果見(jiàn)表5。

3 結(jié) 語(yǔ)

本實(shí)驗(yàn)采用苯酚-硫酸法測(cè)定云南滇黃精藥渣中的多糖成分的含量，通過(guò)一系列的方法學(xué)考察，表明此方法具有較好的可行性，滇黃精藥渣中多糖的含量為4.47%，平均回收率為99.39%；這一研究結(jié)果為治理中藥渣對(duì)環(huán)境的污染，充分實(shí)現(xiàn)云南滇黃精資源的二次利用奠定良好的基礎(chǔ)。