吳 婷

(嘉興市農業(yè)科學研究院桐鄉(xiāng)農業(yè)科學研究所，浙江 桐鄉(xiāng) 314500)

狂犬病是由狂犬病病毒引起的人獸共患病[1]，多見于犬、狼、貓等肉食動物，人都因被病獸咬傷而感染。人患狂犬病后的病死率幾近100%，犬類接種疫苗是預防人類狂犬病最具成本效益的方法[2]。通過大規(guī)模犬只免疫，提高犬只免疫密度，是實現狂犬病有效控制的主要手段，也是防止人感染狂犬病的有效措施?？梢杂行Ц淖儭肮啡静?，人打苗”的局面，實現以科學方式、較低投入控制狂犬病的目的。

2021年10月1號起施行的《浙江省動物防疫條例》規(guī)定本省對犬只狂犬病實施免費免疫[3]。犬只飼養(yǎng)人攜帶犬只到畜牧獸醫(yī)主管部門確定的狂犬病免疫點免費接種狂犬病國產疫苗。本試驗通過比較狂犬病國產疫苗(SAD株)與進口疫苗(G52株)犬只免疫后不同階段抗體水平及消長規(guī)律，為今后犬類免疫中狂犬病疫苗的選擇提供參考。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1試驗動物 隨機選取在桐鄉(xiāng)市某寵物診所進行狂犬病疫苗免疫的無臨床疾病癥狀的健康犬只。

1.1.2狂犬病疫苗來源 進口疫苗為國外企業(yè)生產的狂犬病滅活疫苗(G52株)，生產日期：20191118，保持期36個月，免疫有效期：12個月。

國產疫苗為國內企業(yè)生產的狂犬病滅活疫苗(SAD株)，生產日期：20201005，保持期24個月，免疫有效期：12個月。

1.1.3試劑 狂犬病病毒抗體ELISA檢測試劑盒，批號：RV20210907E，購自哈爾濱元亨生物藥業(yè)有限公司。

1.1.4儀器 Eppendorf單、雙道可調移液器；精宏DNP-9162電熱式恒溫培養(yǎng)箱；TECAN Infinite F50酶標儀。

1.2方法

1.2.1狂犬病免疫方法 采用皮下注射的方法，免疫劑量為1頭份/只。注射時嚴格消毒，遵守操作規(guī)范。

1.2.2血樣采集 經狂犬病國產疫苗或進口疫苗免疫的犬只分別在免疫后的21-60 d、150-180 d、330-360 d經靜脈采血，分離血清。三個階段分別采集血樣各15份。

1.2.3實驗室檢測 狂犬病抗體采用ELISA抗體檢測，按試劑盒使用說明書進行操作。檢測的是抗狂犬病IgG總抗體。判定標準：樣品A值/臨界對照A值平均值≥1.0，抗體陽性；樣品A值/臨界對照A值平均值<1.0，抗體陰性。

2 結果

2.1不同時間階段的免疫效果評價 不同時間階段的狂犬病抗體檢測結果見表1。由表1可以看出，在狂犬疫苗免疫后的21-60 d已經能保持較高的抗體水平，國產疫苗(SAD株)合格率為93.33%，進口疫苗(G52株)合格率為86.67%；150-180 d抗體水平合格率分別為93.33%和100%，說明抗體水平整體平穩(wěn)；330-360 d抗體水平合格率為93.33%和60%。通過近一年時間的追蹤分析，國產疫苗(SAD株)免疫效果比較穩(wěn)定，進口疫苗(G52株)后期抗體水平明顯下降；兩者總體免疫合格率雖仍維持在70%以上，但此時應加強補免。

表1 狂犬病抗體檢測結果

2.2免疫抗體水平及消長規(guī)律 不同時間階段的狂犬病疫苗免疫抗體水平及消長規(guī)律見圖1。按照ELISA抗體檢測試劑盒標注的判定標準：樣品A值/臨界對照A值平均值≥1.0為抗體陽性；樣品A值/臨界對照A值平均值<1.0為抗體陰性進行判定。由圖1可以看出，在免疫后第21天起兩種疫苗均產生了較高水平的抗體，進口疫苗(G52株)的抗體水平整體略高于國產疫苗(SAD株)；在60-150 d，兩種疫苗的抗體水平呈平穩(wěn)向上態(tài)勢，特別是進口疫苗(G52株)免疫抗體水平上升明顯，到150-180 d左右達到峰值；330-360 d國產疫苗(SAD株)依然保持較高的抗體水平，進口疫苗(G52株)的抗體水平有所下降。

不同來源的狂犬病疫苗免疫抗體水平消長曲線見圖2，總體來說國產疫苗(SAD株)免疫的抗體水平整體較平穩(wěn)，抗體陽性率一直保持在90%以上。進口疫苗(G52株)在免疫后的第21天已產生較高的抗體水平，抗體水平持續(xù)上升至180 d左右達到峰值100%，隨后抗體水平在330-360 d回落至60%。

3 分析與討論

3.1國產疫苗整體表現優(yōu)異 從桐鄉(xiāng)市某寵物診所隨機抽取的犬免疫國產狂犬疫苗(SAD株)和進口狂犬疫苗(G52株)后的免疫效果來看，兩種疫苗均能達到預期的免疫效果。國產疫苗(SAD株)從免疫抗體產生的時間、抗體水平保持的時間，抗體消長規(guī)律上表現都不比進口疫苗(G52株)差。

3.2本次試驗中可能存在的不足之處

3.2.1樣品來源 本試驗樣品來自寵物診所隨機采取的無臨床疾病癥狀的健康犬只。犬只年齡沒有統(tǒng)一，有初次免疫，也有歷次免疫?？赡艽嬖诓糠秩辉诒敬慰袢∫呙缑庖咔翱贵w水平；犬只品種沒有統(tǒng)一，有寵物犬，也有田園犬。田園犬更適應本地的氣候與環(huán)境，身體素質普遍高于其他犬種。存在個體差異。

3.2.2疫苗來源 本試驗采用的進口疫苗生產日期是2019年11月18日，而國產疫苗生產日期是2020年10月5日。滅活苗在長時間保存后，可能會出現佐劑包裹力下降、抗原蛋白變性等情況，會直接影響疫苗免疫效果[4]。

近年來受到宣傳、習慣等影響，犬只飼養(yǎng)人對國產疫苗的接受程度并不高，多數還是選擇進口疫苗。但從本次試驗結果來看，國產疫苗和進口疫苗免疫效果相差不大，且國產疫苗在免疫后期仍能保持較高的抗體水平。但國產疫苗還是存在一些短板比如質量有效期比進口疫苗短，適用動物僅適用于犬，未包括貓。因此，不同來源的狂犬病疫苗免疫效果評價仍是值得日后進一步探討研究的課題。