王莉莉， 趙慶佳， 張 娜， 郭慶啟,3

(東北林業(yè)大學林學院1，哈爾濱 150040) (哈爾濱商業(yè)大學食品工程學院2，哈爾濱 150076) (黑龍江省森林食品資源利用重點實驗室3，哈爾濱 150040)

植物甾醇屬于三萜烯化合物[1]，通過競爭作用降低膽固醇在小腸內的溶解度和吸收[2]，從而降低人體膽固醇水平。研究表明，植物種子油中植物甾醇含量為0.956～3.527 mg/g，通常以結合態(tài)和游離態(tài)的形式廣泛存在于各種堅果、種子和植物油中[3]。國內外研究發(fā)現，植物甾醇具有降血脂[4]、預防心血管疾病[5]、抗腫瘤[6]、減肥[7]等作用，在食品、醫(yī)藥及化妝品等領域得到廣泛應用[8]。

近年來，人們廣泛關注安全高效的天然提取物及其活性，同時適宜的提取方法也是研究的熱點。傳統(tǒng)熱輔助回流提取耗能耗時，因此基于外部能量場的輔助提取被認為省時高效以及耗能較低[9，10]。目前關于提取方法對植物甾醇提取效果的影響已有報道，如龐利蘋等[11]、夏秋敏等[12]、郭瑞等[13]等分別采用微波輔助提取、超聲波輔助提取、超聲波輔助皂化提取了南瓜籽甾醇、蘋果籽甾醇、麥角甾醇，得率分別為0.892、2.183、0.880 mg/g，均高于普通的溶劑提取法。而高虹等[14]對比超聲波法、微波法與溶劑法提取麥角甾醇，發(fā)現微波法的提取率比溶劑法和超聲波法提高約30%，但是3種方法對其功能性質的影響并未深入研究。目前國內外對于植物甾醇的研究多集中在不同原料來源的提取及純化等方面，同時對于其抗炎、抗氧化以及生理活性等功能的研究也較為全面，但關于同種原料、不同方法對植物甾醇的提取效果和功能性質影響的比較與分析則是鮮有報道。

本研究以有機溶劑浸提法(簡稱“溶劑法”)為基礎，以紅松籽油甾醇得率為指標，考察超聲波輔助溶劑法(簡稱“超聲波法”)、微波輔助溶劑法(簡稱“微波法”)、光波輔助溶劑法(簡稱“光波法”)對紅松籽油甾醇提取效果及功能性質的影響。旨在選出一種提取得率高，對功能性質影響小的甾醇提取方法，為紅松籽油甾醇的制備及利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

紅松(Pineskoraiensis)籽食品級，膽固醇標準品(≥98%)，4-硝基苯酚丁酸酯，豬胰脂肪酶(30 000 u/g)，奧利司他(98%)，牛磺膽酸鈉(97%)，甘氨膽酸鈉鹽水合物(98%)，2,2-聯氮-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸二銨鹽(ABTS+)自由基(≥98.0%)，1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基(≥97%)，胰蛋白酶(>250 N.F.U/mg)，胃蛋白酶(≥250 u/mg)，其他所用化學試劑均為分析純。

1.2 儀器與設備

TU1900 紫外-可見分光光度計，SCIE-NTZ-IIDM 微波光波超聲波萃取儀，Scientz-18N 冷凍干燥機。

1.3 實驗方法

1.3.1 紅松籽油的制備

將紅松籽手工去殼去皮，60 ℃鼓風干燥箱中烘干至恒質量，取100.00 g紅松籽用粉碎機粉碎，按料液比1∶5 加入正己烷，浸提12 h后過濾，取濾液在45 ℃條件下真空旋轉蒸發(fā)，制得紅松籽油。

1.3.2 紅松籽油甾醇的制備

稱取一定質量的紅松籽油于錐形瓶中，按料液比加入一定濃度KOH-乙醇溶液，利用不同方法(溶劑法、超聲波法、微波法、光波法)處理后，溶劑萃取分離，合并有機相后用0.5 mol/L KOH溶液洗3次，蒸餾水洗至中性，再加入無水硫酸鈉除去水分，取濾液在45 ℃條件下真空濃縮至恒質量[15]，制得紅松籽油甾醇。

以溶劑法確定的料液比、KOH-乙醇溶液濃度、時間、溫度和萃取溶劑為基礎，分別對超聲波法、微波法、光波法提取紅松籽油甾醇的功率和時間進行研究，以紅松籽油甾醇得率為指標，詳細考察不同方法單獨處理較短時間以及處理后再次浸提，紅松籽油甾醇得率的變化情況，進一步考察不同提取方法對紅松籽油甾醇抗氧化、胰脂肪酶活性與膽酸鹽結合能力的影響。

1.3.3 紅松籽油甾醇得率的測定方法

采用磷硫鐵顯色法測定甾醇得率[16]，用無水乙醇溶液將膽固醇配制成質量濃度為0、0.075、0.100、0.125、0.150、0.175 mg/mL的膽固醇標準溶液，取4 mL不同質量濃度的膽固醇標準溶液，分別加入2 mL磷硫鐵顯色劑，反應15 min后在480 nm條件下測定溶液的吸光度值，以膽固醇質量濃度C為橫坐標，以吸光度值A為縱坐標，繪制標準曲線。標準曲線方程為y=4.910 5x-0.000 7，(R2=0.999)；按式(1)計算紅松籽油甾醇得率。

(1)

式中：Y為紅松籽油甾醇得率/mg/g；C為紅松籽油甾醇溶液的質量濃度/mg/mL；V為定容體積/mL；b為稀釋倍數；m為紅松籽油的質量/g。

1.3.4 紅松籽油甾醇功能性質的測定

利用無水乙醇溶液將最佳條件下不同方法提取的紅松籽油甾醇溶解，調至統(tǒng)一濃度作為母液，配置不同濃度的紅松籽油甾醇溶液測定其功能性質。IC50表示自由基清除率或脂肪酶抑制率達到50%時，樣品的濃度。IC50通過SPSS 軟件(IBM SPSS Statistics 24.0)回歸分析計算。

1.3.4.1 DPPH·清除能力的測定

準確移取2 mL不同濃度的紅松籽油甾醇溶液，分別加入2 mL DPPH溶液(0.2 mmol/L)，反應30 min后，517 nm條件下測定溶液的吸光度值[17]。按式(2)計算DPPH·清除率。

(2)

式中：Ai為紅松籽油甾醇溶液與自由基混合溶液的吸光度值；Aj為紅松籽油甾醇溶液與無水乙醇混合溶液的吸光度值；A0為自由基溶液和無水乙醇混合溶液的吸光度值。

1.3.4.2 ABTS+·清除能力的測定

取1 mL不同濃度的紅松籽油甾醇溶液，分別加入5 mL稀釋后的ABTS+和過硫酸鉀混合液，搖勻避光反應30 min，734 nm條件下測定溶液的吸光度值[18]。按式(2)計算ABTS+·清除率。

1.3.4.3 胰脂肪酶抑制能力的測定

以4-硝基苯酚丁酸酯為底物，采用對硝基苯酚法測定紅松籽油甾醇對胰脂肪酶活性的抑制能力[19]。取不同濃度的紅松籽油甾醇溶液50 μL與胰脂肪酶液(5 mg/mL)100 μL混合，37 ℃保溫10 min，加入4-硝基苯酚丁酸酯(5 mmol/L)100 μL，37 ℃保溫10 min后，405 nm條件下測定溶液的吸光度值。以Tris-HcL緩沖液(100 mmol/L)為空白對照，奧利司他為陽性對照。按式(3)計算胰脂肪酶抑制率。

(3)

式中：A2樣品組(紅松籽油甾醇溶液)的吸光度值；A1為反應體系中無胰脂肪酶組吸光度值；A0為空白對照組吸光度值。

1.3.4.4 膽酸鹽結合能力的測定

采用模擬體外消化實驗法測定膽酸鹽結合能力[20]。以0.4 mmol/L 甘氨膽酸鈉、0.5 mmol/L ?；悄懰徕c為母液，用0.1 mol/L pH 6.3 磷酸緩沖溶液配置不同濃度的甘氨膽酸鈉、牛磺膽酸鈉溶液，分別移取1 mL不同濃度的膽酸鹽溶液加入3 mL 60% 硫酸溶液，70 ℃水浴20 min，冰浴5 min，387 nm條件下測定溶液的吸光度值。以濃度C為橫坐標，吸光度值A為縱坐標繪制標準曲線。得到?；悄懰猁}標準曲線方程為：y=1.901 7x+0.047 5(R2=0.998)；甘氨膽酸鹽標準曲線方程為：y=1.63x+0.057(R2=0.999)。

取3 mL不同濃度紅松籽油甾醇溶液，加3 mL胃蛋白酶(10 mg/mL)和1 mL HCl溶液(0.01 mol/L)，37 ℃振蕩消化1 h，用NaOH溶液(0.1 mol/L)調節(jié)pH6.3，加入4 mL胰蛋白酶(10 mg/mL)，37 ℃振蕩消化1 h，加入4 mL膽酸鹽溶液(0.4 mmol/L甘氨膽酸鈉、0.5 mmol/L?；悄懰徕c)，37 ℃振蕩消化1 h，8 000 r/min離心10 min，取上清液進行分析。按式(4)計算膽酸鹽結合率。

(4)

式中：C1為膽酸鹽加入量/μmol；C2為膽酸鹽剩余量/μmol。

1.4 數據統(tǒng)計與分析

數據結果采用平均值±標準差表示，使用SPSS 24.0、Excel 2010與Origin 2018軟件進行圖表繪制及數據分析。

2 結果與分析

2.1 紅松籽油甾醇提取工藝的研究

2.1.1 料液比對紅松籽油甾醇得率的影響

如表3、表4所示，油脂與堿性物質結合后，以酯態(tài)形式存在的甾醇被水解為對應的植物甾醇，生成溶于水的高級脂肪酸鹽、甘油和不溶于水的甾醇，甾醇可通過有機溶劑萃取制備。在KOH-乙醇溶液濃度為1 mol/L、時間120 min、溫度75 ℃、萃取溶劑為乙酸乙酯的條件下，考察料液比對紅松籽油甾醇得率的影響，結果如圖1。

注：圖中小寫字母不同表示差異顯著(P<0.05)，下同。圖1 料液比對紅松籽油甾醇得率的影響

料液比為1∶4 時紅松籽油甾醇得率最大(P<0.05)，此時紅松籽油和KOH-乙醇溶液反應完全，當料液比小于1∶4 時，紅松籽油和KOH-乙醇溶液未完全反應，致使與脂肪酸結合的甾醇未完全游離出來，溶劑萃取游離甾醇時，導致少部分結合態(tài)甾醇受到損失。料液比大于1∶4 時紅松籽油甾醇基本已經浸出，而過大的料液比會使其他物質溶出，反而影響紅松籽油甾醇得率。紅松籽油甾醇得率隨料液比先增大后減小的趨勢與趙茜茜等[21]提取文冠果仁油甾醇相似，因此選擇料液比為1∶4。

2.1.2 KOH-乙醇溶液濃度對紅松籽油甾醇得率的影響

在料液比為1∶4、時間120 min、溫度75 ℃、萃取溶劑為乙酸乙酯的條件下，考察KOH-乙醇溶液濃度對紅松籽油甾醇得率的影響，見圖2。氫氧化鉀在提取過程中起催化作用，可以解離出酯態(tài)甾醇[14]，但紅松籽油在氫氧化鉀溶液中的溶解度有限，故加入乙醇來增加紅松籽油在氫氧化鉀溶液中的溶解度，加快反應的進行。隨KOH-乙醇溶液濃度的增加，紅松籽油甾醇得率呈先上升后下降趨勢，當KOH-乙醇溶液濃度為1 mol/L時，紅松籽油甾醇得率最大(P<0.05)，達到(1.763±0.046) mg/g，當濃度繼續(xù)增大時，氫氧化鉀殘留過多，水洗次數過多導致甾醇得率下降，因此選擇溶液濃度為1 mol/L。

圖2 KOH-乙醇溶液濃度對紅松籽油甾醇得率的影響

2.1.3 浸提時間對紅松籽油甾醇得率的影響

在料液比1∶4、KOH-乙醇溶液濃度1 mol/L、溫度75 ℃、萃取溶劑為乙酸乙酯的條件下，考察浸提時間對紅松籽油甾醇得率的影響，結果如圖3。

圖3 浸提時間對紅松籽油甾醇得率的影響

浸提時間60～90 min紅松籽油甾醇得率快速增長，90 min時得率最大(P<0.05)，達到(1.915±0.055) mg/g，90～180 min紅松籽油甾醇得率呈顯著下降趨勢。陳佳麗等[22]認為當提取時間達到平衡點后，溶劑總量等因素會破壞甾醇的溶解能力，導致甾醇得率下降，故選擇浸提時間為90 min。

2.1.4 浸提溫度對紅松籽油甾醇得率的影響

料液比為1∶4、KOH-乙醇溶液濃度為1 mol/L、時間90 min、萃取溶劑為乙酸乙酯的條件下，考察浸提溫度對紅松籽油甾醇得率的影響，結果如圖4。

圖4 浸提溫度對紅松籽油甾醇得率的影響

溫度從70 ℃至80 ℃，紅松籽油甾醇得率快速上升，當超過80 ℃時得率略有下降。這可能是在較高的溫度下處理較長時間，導致紅松籽油甾醇降解加快，時間過長紅松籽油甾醇發(fā)生包裹且有其他雜質溶出導致得率下降。當干燥溫度超過80 ℃時，會加快油菜中的部分甾醇的降解速率[23]，故選擇80 ℃為浸提溫度。

2.1.5 浸提后萃取溶劑對紅松籽油甾醇得率的影響

在料液比為1∶4、KOH-乙醇溶液濃度為1 mol/L、時間90 min、溫度80 ℃的條件下，考察萃取溶劑對紅松籽油甾醇得率的影響，結果如圖5。

圖5 萃取溶劑對紅松籽油甾醇得率的影響

紅松籽油甾醇得率與溶劑和提取液的分層程度以及是否形成乳化液有關，用石油醚萃取時，分層不清晰導致紅松籽油甾醇損失。由圖5可知5種溶劑萃取紅松籽油甾醇得率順序為乙酸乙酯>正己烷>乙醚>氯仿>石油醚，龐麗萍等[11]利用微波法篩選溶劑對南瓜籽甾醇提取率的影響時發(fā)現乙酸乙酯提取效果最好，乙酸乙酯相對安全且符合GB 2760—2014中允許使用的食品加工助劑。因此確定乙酸乙酯為萃取溶劑。

溶劑法提取最佳工藝條件為：料液比1∶4 ，KOH-乙醇溶液濃度1 mol/L，浸提時間90 min，溫度80 ℃，萃取溶劑為乙酸乙酯，此工藝條件下紅松籽油甾醇得率為(2.129±0.046) mg/g。

2.2 不同提取方法對紅松籽油甾醇得率的影響

2.2.1 超聲波法對紅松籽油甾醇得率的影響

如表3、表4所示，以溶劑法確定的最佳條件為基礎，通過單因素實驗確定超聲波法、微波法、光波法的浸提功率和時間，單一方法處理后繼續(xù)浸提至總時間為90 min，考察紅松籽油甾醇得率的變化情況。不同超聲波時間和功率處理條件下的甾醇得率結果如表1、表2所示。

表1 超聲波時間對紅松籽油甾醇得率的影響

表2 超聲波功率對紅松籽油甾醇得率的影響

超聲波法(560 W，40 min)提取的紅松籽油甾醇得率最高(P<0.05)，為(2.134±0.010) mg/g，超聲波后繼續(xù)浸提甾醇得率為(2.347±0.013) mg/g。超聲波法提取是通過破碎、侵蝕、毛細化、脫紋理等不同的獨立或聯合機制起作用[24]。隨功率和時間的增長，加速分子碰撞，細胞破裂，紅松籽油甾醇溶出量越多得率增大，當膜破碎完全后雜質溶出越多得率下降。王麗波等[25]從南瓜籽油中以乙酸乙酯為提取溶劑，超聲功率500 W，時間50 min時甾醇的含量為1.106 mg/g。對比超聲波法單獨處理及處理后繼續(xù)浸提，紅松籽油甾醇得率的變化情況，發(fā)現超聲波(560 W，40 min)時單獨提取比例占總量的(90.925±0.156)%，繼續(xù)浸提50 min后得率占總量的(9.075±0.312)%，表明超聲波法短時間內便可提取出大部分紅松籽油甾醇。

2.2.2 微波法對紅松籽油甾醇得率的影響

如表3、表4所示，微波功率500 W，時間1 min時紅松籽油甾醇得率最高(P<0.05)，為(2.263±0.013) mg/g，微波后繼續(xù)浸提甾醇得率為(2.289±0.015) mg/g，隨微波功率和時間的增長，紅松籽油甾醇的得率下降。這可能是當微波功率小于500 W時，隨微波功率增大，微波效應增強，紅松籽油細胞內極性分子加速振動使甾醇快速溶出，得率增加，而微波功率大于500 W時，雜質開始溶出，導致紅松籽油甾醇得率下降。徐艷陽等[26]以微波功率539 W，微波時間41 s提取桑白皮中甾醇，發(fā)現功率超過539 W甾醇得率下降。微波提取是300 MHz～300 GHz的頻帶內進行的[27]。微波加熱有偶極重定向和離子極化兩種機制，在微波應用中，當偶極子與電場重新排列時，分子發(fā)生碰撞產生熱量，離子向電場移動時，離子發(fā)生碰撞產生熱量[28]。微波萃取時間短、溶劑消耗少、效率高，但容易導致極熱敏化合物的降解[10]。

表3 微波功率對紅松籽油甾醇得率的影響

表4 微波時間對紅松籽油甾醇得率的影響

2.2.3 光波法對紅松籽油甾醇得率的影響

如表5、表6所示，光波功率440 W，時間10 min時紅松籽油甾醇得率最高(P<0.05)，為(2.198±0.010) mg/g，這可能是光波的迅速制熱功能使紅松籽油與KOH-乙醇溶液快速充分反應，與脂肪酸結合的鍵快速斷裂甾醇單體游離出來，之后隨光波功率和時間的增長，紅松籽油中脂肪酸與乙醇反應生成脂肪酸乙酯，隨溶劑與甾醇一起萃取出來，導致甾醇得率下降。

表5 光波功率對紅松籽油甾醇得率的影響

表6 光波時間對紅松籽油甾醇得率的影響

當超聲波法、微波法、光波法單獨處理時，微波法(500 W、1 min)提取的紅松籽油甾醇得率最高(2.263±0.013)mg/g，單獨提取比例占總量的(98.864±0.160)%，繼續(xù)浸提89 min后得率占總量的(1.136±0.320)%。超聲波法、光波法單獨提取比例分別為(90.925±0.156)%、(97.950±0.244)%，表明超聲波法、微波法、光波法單獨提取紅松籽油甾醇在總提取過程中起主導作用。高虹等[14]、徐艷陽等[26]對比超聲波法、微波法與溶劑法提取麥角甾醇、桑白皮甾醇，發(fā)現微波法提取效果最好。而Oludemi等[29]利用熱輔助、超聲、微波提取從姬松茸殘渣中提取麥角甾醇，認為超聲提取法效果最好，能夠獲得高含量麥角甾醇。胡代花等[30]比較了乙醇超聲提取、超聲輔助皂化提取和傳統(tǒng)回流提取金針菇的麥角甾醇時發(fā)現乙醇超聲提取更完全，效率更高。有研究認為認為超聲波法提取植物甾醇更具有實用價值，可顯著降低能耗[13,31,32]。

2.3 不同方法提取紅松籽油甾醇對自由基的清除效果

對溶劑法最佳條件、超聲波法(560 W，40 min)、微波法(500 W，1 min)、光波法(440 W，10 min)單獨處理時提取的紅松籽油甾醇清除自由基能力進行測定，結果見圖6。不同方法提取的紅松籽油甾醇都具有抗氧化性，且紅松籽油甾醇和VE的濃度與DPPH·、ABTS+·清除率成正相關。由圖6a看出不同方法提取的紅松籽油甾醇質量濃度為2 mg/mL時，DPPH·清除率均達到最大且超聲波法、微波法和溶劑法提取的甾醇對DPPH·清除效果差異不顯著(P>0.05)，其IC50值分別為(0.802±0.063)、(0.785±0.041)、(0.882±0.043) mg/mL，而光波法DPPH·清除率為(89.692±2.102)%，IC50為(0.987±0.032) mg/mL。這可能是光波能迅速制熱使細胞內溶物沸騰破壞了紅松籽油甾醇的活性。而超聲波能促進有效物質溶出，不易破壞物質的化學結構[33]。由圖6b可以看出紅松籽油甾醇質量濃度在1～4 mg/mL ABTS+·清除率呈快速上升趨勢并趨于穩(wěn)定。紅松籽油甾醇質量濃度為1 mg/mL時，不同處理方法對ABTS+·清除效果表現為超聲波法>微波法>光波法>溶劑法。紅松籽油甾醇質量濃度為4 mg/mL，不同處理方法對ABTS+·清除效果差異不顯著(P>0.05)，均表現為較好的抗氧化效果。田丹丹等[34]發(fā)現牛油果中植物甾醇因有較多β-谷甾醇使DPPH·清除率高于VE，且由于植物甾醇C-3位極性羥基中的氫電子轉移給了自由基，清除了DPPH·達到抗氧化效果。朱雪梅等[35]發(fā)現松籽油中僅含有β-谷甾醇和菜籽甾醇，且β-谷甾醇是菜籽甾醇的8倍。表明紅松籽油甾醇具有良好的抗氧化能力。

2.4 不同方法提取紅松籽油甾醇對胰脂肪酶活性的抑制效果

如圖7所示，不同方法提取的紅松籽油甾醇均隨著濃度的增大，胰脂肪酶抑制率增大。紅松籽油甾醇質量濃度在0.6～1.8 mg/mL內，光波法提取的紅松籽油甾醇相較于其他3種方法對胰脂肪酶抑制活性差異顯著(P<0.05)。紅松籽油甾醇質量濃度為2 mg/mL時，4種方法提取的紅松籽油甾醇對胰脂肪酶抑制率達到最大。超聲波法、微波法、光波法和溶劑法提取的紅松籽油甾醇對胰脂肪酶活性抑制的IC50分別為(1.322±0.020)、(1.620±0.030)、(2.056±0.024)、(1.585±0.031) mg/mL。奧利司他IC50為(0.400±0.045) mg/mL。楊鵬等[36]以奧利司他為陽性對照，發(fā)現蕎麥黃酮和奧利司他對胰脂肪酶抑制的IC50分別為1.94、0.47 mg/mL。胰脂肪酶是食品中分解脂肪的主要酶之一，抑制胰脂肪酶活性，會減少三酰甘油分解，從而降低身體吸收的量而起到降脂作用[37]。研究表明植物甾醇可以抑制與膽固醇吸收有關的酶活性[38]。奧利司他作為胰脂肪酶抑制劑，通過共價修飾活性位點抑制胰腺脂肪酶，降低機體對脂肪的吸收[39]。

圖7 不同方法提取紅松籽油甾醇對胰脂肪酶活性抑制效果

2.5 不同方法提取紅松籽油甾醇結合膽酸鹽能力比較

從圖8可知不同方法提取的紅松籽油甾醇質量濃度在0.6～2.2 mg/mL內隨濃度的增大，與牛磺酸膽酸鈉、甘氨膽酸鈉結合率均增大，紅松籽油甾醇質量濃度在1.8～2.2 mg/mL內與兩種膽酸鹽結合速率上升平緩。超聲波法提取的紅松籽油甾醇結合率上升速率均高于其他3種方法，且當膽酸鹽結合率趨于穩(wěn)定后，超聲波法提取的紅松籽油甾醇結合率最大(P<0.05)，?；悄懰徕c、甘氨膽酸鈉結合率分別為(77.593±1.401)%、(77.601±1.103)%。膽汁酸是膽固醇在膽汁中衍生而來的能夠加速脂類消化代謝引起血脂升高的大分子，膽汁酸通過酰胺鍵與甘氨酸或?；撬嵫杆俳Y合，形成相應的膽酸和去氧膽酸結合物，將膽酸鹽結合能夠降低機體對膽固醇的吸收[38]。

3 結論

以紅松籽油甾醇得率為指標，確定了溶劑法、超聲波法、微波法、光波法的最佳工藝條件，其中微波法提取的紅松籽油甾醇得率最大。對比超聲波法、微波法、光波法處理前后紅松籽油甾醇得率的變化情況，發(fā)現短時間單獨處理時可提取出大部分紅松籽油甾醇，在總浸提過程中起主導作用。比較4種方法對紅松籽油甾醇功能性質的影響可知：微波法提取的紅松籽油甾醇對DPPH·清除效果最好，與超聲波法差異不顯著(P>0.05)，超聲波法提取的紅松籽油甾醇對ABTS+·清除效果最好，并且超聲波法提取的紅松籽油甾醇對胰脂肪酶抑制效果及膽酸鹽結合能力最強。得率雖略低于微波法，但綜合考慮超聲波法更適合紅松籽油甾醇的開發(fā)利用。

不同提取方法對紅松籽油甾醇功能性質影響的差異性，可能與活性物質的降解有關，但短時間提取出的甾醇仍然具有較高的活性，均具備較強的清除自由基、抑制胰脂肪酶活性及結合膽酸鹽的能力，表現出潛在的抗氧化及降血脂效果。植物甾醇具有較高的應用價值和較大的市場發(fā)展空間，關于4種提取方法對紅松籽油甾醇結構和功能關系的影響機制還需進一步研究。