張曉玉，潘宇翔，王佳，張婷婷，陳海霞

（天津大學(xué)藥物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，天津 300072）

2型糖尿?。╰ype 2 diabetic mellitus，T2DM）又稱為非胰島素依賴性糖尿病，是最常見(jiàn)的內(nèi)分泌代謝疾病之一[1]。盡管現(xiàn)有很多用于治療T2DM的藥物，但是多數(shù)藥物存在副作用。藥用植物及其植物化學(xué)物質(zhì)對(duì)T2DM有很好的治療效果[2]，不僅更安全，而且有助于改善人體抗氧化系統(tǒng)，具有改善胰島素抵抗或促進(jìn)其分泌的作用[3]。

玉米須（Zea mays L.）是禾本科玉蜀黍?qū)僦参锏母稍锘ㄖ椭^[4]，是我國(guó)傳統(tǒng)的中藥材和農(nóng)產(chǎn)品副產(chǎn)物，民間常以玉米須制成藥茶輔助治療糖尿病、高血壓病[5]。它的活性成分復(fù)雜多樣，主要包括多糖、多酚、甾醇、皂苷、有機(jī)酸[6]、生物堿[7]等。據(jù)報(bào)道，玉米須提取物具有多種生物活性，例如抗氧化[8]、降血糖[9]、神經(jīng)保護(hù)[10]以及抗肥胖[11]等。用大鼠進(jìn)行的玉米須亞慢性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，玉米須安全且無(wú)副作用[12]。玉米須富含多酚類(lèi)化合物，具有很強(qiáng)的自由基清除能力，是良好的天然抗氧化劑來(lái)源。研究表明，玉米須的乙醇溶液（體積分?jǐn)?shù)為50%）提取物可以通過(guò)抗前脂肪細(xì)胞增殖、抗脂肪生成和誘導(dǎo)脂肪分解來(lái)預(yù)防超重和肥胖的發(fā)生[13]。玉米須-玉米芯可以減少T2DM大鼠血糖值、改善脂代謝紊亂、減少脂質(zhì)過(guò)氧化，從而明顯減輕對(duì)糖尿病大鼠胰島形態(tài)結(jié)構(gòu)的損傷[14]。然而，目前關(guān)于玉米須不同極性溶劑萃取物活性成分的分析和降血糖活性的研究較少。本研究對(duì)玉米須乙醇提取物不同極性溶劑萃取物進(jìn)行體外抗氧化及消化酶抑制活性分析，并對(duì)其正丁醇萃取物進(jìn)行活性成分分析，同時(shí)探究正丁醇萃取物對(duì)高脂飲食和鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的T2DM小鼠的降血糖作用，為相關(guān)研究提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明小鼠[雄性，18 g～22 g，許可證號(hào)：SXCK（京）2014-0008]：北京華阜康生物科技股份有限公司。

屏障環(huán)境（SPF級(jí)）動(dòng)物房飼養(yǎng)，環(huán)境溫度20℃～22℃，相對(duì)濕度45%～55%，每天照明12 h。實(shí)驗(yàn)期間小鼠自由進(jìn)食和飲水。嚴(yán)格按照《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理和使用指南》進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。

1.1.2 動(dòng)物飼料

基礎(chǔ)飼料（粗蛋白質(zhì)≥18.0%、粗脂肪≥4.0%、粗纖維≤5.0%、粗灰分≤6.5%、礦物質(zhì)0.6%～1.2%、水分含量≤8.0%）、高脂飼料（77%基礎(chǔ)飼料、15%精制豬油、5%蔗糖、2%膽固醇、0.2%膽酸鈉、0.7%鹽）：北京華阜康生物科技股份有限公司。

1.1.3 材料、試劑與儀器

玉米須：市售；鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）、α-淀粉酶（3 700 U/g）、α-葡萄糖苷酶（50 U/mg）：上海西格瑪奧德里奇貿(mào)易有限公司；肝糖原測(cè)定試劑盒、肌糖原測(cè)定試劑盒、總膽固醇（total cholesterol，TC）測(cè)定試劑盒、甘油三酯（triglyceride，TG）測(cè)定試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）測(cè)定試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇（lowdensity lipoprotein cholesterol，LDL-C） 測(cè)定試劑盒、非酯化脂肪酸（non-esterified fatty acid，NEFA）測(cè)定試劑盒、糖化血清蛋白（glycated serum protein，GSP）測(cè)定試劑盒、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性測(cè)定試劑盒、過(guò)氧化氫酶（catalase，CAT）活性測(cè)定試劑盒、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GPX）活性測(cè)定試劑盒、丙二醛（malondialdehyde，MDA）測(cè)定試劑盒：南京建成生物工程研究所；胰島素酶聯(lián)免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）測(cè)定試劑盒：武漢華美生物工程有限公司；阿卡波糖：北京拜耳醫(yī)藥保健有限公司；羅格列酮：成都恒瑞制藥有限公司；葡萄糖（分析純）：北京索萊寶科技有限公司；乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇（均為分析純）：天津市江天化工技術(shù)股份有限公司；乙腈（色譜純）：天津康科德科技有限公司。

BP-211D高精度天平：賽多利斯（上海）貿(mào)易有限公司；POCT型血糖儀：杭州艾康生物技術(shù)有限公司；N-1100型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：東京理化機(jī)械株式會(huì)社；TU-1810PC紫外分光光度計(jì)：北京普析通用儀器有限公司；6420型三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀：美國(guó)安捷倫科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 玉米須乙醇提取物及其不同極性溶劑萃取物的制備

將2 kg玉米須用體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇溶液在80℃下提取3次，過(guò)濾并合并3次所得濾液，減壓蒸發(fā)濾液以除去乙醇。將乙醇提取物分散在水中，分別用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到石油醚萃取物（petroleum ether fraction，PEF）、乙酸乙酯萃取物（ethyl acetate fraction，EAF）以及正丁醇萃取物（n-butanol fraction，NBF）。

1.2.2 玉米須乙醇提取物不同極性溶劑萃取物總多酚、總黃酮和總甾醇含量測(cè)定

通過(guò)多酚與蛋白質(zhì)相互作用產(chǎn)生沉淀以及使氯化鐵顯色判斷萃取物中是否含有多酚。以沒(méi)食子酸為對(duì)照品，采用福林-西奧卡特比色法[15]測(cè)定樣品總多酚含量（total polyphenols content，TPC），TPC 以沒(méi)食子酸計(jì)，單位表示為mg GAE/g干玉米須。

以蘆丁為對(duì)照品，通過(guò)比色法[15]測(cè)定樣品總黃酮含量（total flavonoids content，TFC），TFC 以蘆丁計(jì)，單位表示為mg RE/g干玉米須。

以β-谷甾醇為對(duì)照品，參考Miao等[16]的方法通過(guò)比色法測(cè)定樣品總甾醇含量（total sterols content，TSC），總甾醇含量以β-谷甾醇計(jì)，單位表示為mg SE/g干玉米須。

1.2.3 玉米須乙醇提取物不同極性溶劑萃取物抗氧化和消化酶抑制活性測(cè)定

參考Fu等[17]的研究方法，測(cè)定玉米須乙醇提取物不同極性溶劑萃取物的DPPH自由基清除活性。參考Nakajima等[18]的研究方法，測(cè)定各萃取物的鐵離子還原/抗氧化能力（ferric ion reducing antioxidant power，F(xiàn)RAP）。參考Chen等[19]的研究方法，測(cè)定各萃取物對(duì)α-淀粉酶抑制活性，以阿卡波糖為參照。參考Rahmi等[20]的研究方法，測(cè)定各萃取物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制活性，以阿卡波糖為參照。

1.2.4 NBF的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（liquid chromatography tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）分析

用LC-MS/MS法對(duì)NBF中的活性成分進(jìn)行分析。使用高效液相色譜儀，檢測(cè)器為二極管陣列檢測(cè)器（diode array detector，DAD），三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀配備電噴霧離子源（electron spray ionization，ESI）。Kromasil 100-5 C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）液相色譜柱，流動(dòng)相A（0.1%乙酸，99.9%水），流動(dòng)相B（乙腈）。梯度洗脫：90%A，10%B（0～2 min）；90%～80%A，10%～20%B（2 min～15 min）；80%～70%A，20%～30%B（15 min～17 min）；70%A，30%B（17 min～30 min），70%～0%A，30%～100%B（30 min～40 min）；0%～90%A，100%～10%B（40 min～45 min），柱溫為 30 ℃，流速為 0.5 mL/min，進(jìn)樣量為 10 μL。

分析物在正離子模式下掃描，全掃描光譜的范圍為 100 amu～1 000 amu。

1.2.5 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

使用高脂飲食和STZ誘導(dǎo)的T2DM小鼠研究NBF的降血糖作用。小鼠適應(yīng)喂養(yǎng)2 d后，除空白對(duì)照（NC）組外，其余小鼠均用高脂飼料喂養(yǎng)，并在4周后72 h內(nèi)按90 mg/kg bw的劑量?jī)纱胃骨蛔⑸銼TZ（溶于鹽水），NC組按同樣標(biāo)準(zhǔn)注射生理鹽水。3 d后，將小鼠禁食過(guò)夜，尾靜脈采集血樣，測(cè)量空腹血糖水平。選高血糖（血糖含量＞11.6 mmol/L）小鼠作為糖尿病小鼠進(jìn)一步研究。

將糖尿病小鼠隨機(jī)分為5組，每組8只，高脂飼料喂養(yǎng)。NC組：生理鹽水灌胃，基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)；陽(yáng)性對(duì)照（PC）組：2 mg/kg bw 羅格列酮（rosiglitazone，RSG）灌胃；糖尿病對(duì)照（DC）組：生理鹽水灌胃；其他3組分別用 100、200、400 mg/kg bw NBF 灌胃，連續(xù)灌胃 28 d。每天記錄小鼠的進(jìn)食量、飲水量和體質(zhì)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將各組小鼠禁食過(guò)夜后頸椎脫臼處死。將血樣收集在離心管中并立即離心（1 700×g，4℃，10 min），將肝臟、腎臟和胰腺收集在微量試管中，所有樣品于-80℃保存。

1.2.6 空腹血糖的測(cè)定及口服葡萄糖耐量試驗(yàn)

在第7、14、21、28天將小鼠禁食過(guò)夜后尾靜脈采集血樣，進(jìn)行空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)BG）水平的測(cè)量。第26天禁食過(guò)夜后，小鼠口服2 g/kg bw 10%葡萄糖，0、30、60、90、120 min 后尾靜脈采集血樣。對(duì)小鼠進(jìn)行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（oral glucose tolerance test，OGTT），使用血糖儀測(cè)量血糖水平。

1.2.7 降血糖機(jī)制相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)及組織切片病理學(xué)檢查

按照試劑盒的說(shuō)明測(cè)定血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C、NEFA、GSP 水平和肝臟中 CAT、SOD、MDA、GPX水平，以及肝糖原和肌糖原水平，按照ELISA測(cè)定試劑盒的說(shuō)明測(cè)定血清中胰島素水平。取小鼠肝臟、腎臟和胰腺，用4%甲醛固定后石蠟包埋切片，并用蘇木精-伊紅染色（hematoxylin-eosin staining，H&E）法染色，在電子顯微鏡下觀察并拍攝各組小鼠組織病理學(xué)狀態(tài)。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

使用SPSS 20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。所有結(jié)果均表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。通過(guò)單因素方差分析和Dunnett’s t檢驗(yàn)分析組間差異。P＜0.05認(rèn)為具有顯著差異，P＜0.01認(rèn)為具有極顯著差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 總多酚、總黃酮和總甾醇含量分析

玉米須乙醇提取物中加入牛血清白蛋白溶液后，有黃色沉淀生成；與氯化鐵溶液反應(yīng)，顏色迅速由黃色變?yōu)樯罹G色，表明玉米須乙醇提取物中存在有兩個(gè)相鄰羥基的多酚化合物。玉米須乙醇提取物不同極性溶劑萃取物的得率、TPC、TFC和TSC見(jiàn)表1。

表1 不同極性溶劑萃取物得率、總多酚、總黃酮和總甾醇含量的比較分析Table 1 Comparison of yield，total polyphenols content，total flavonoids content，and total sterols content of different polar solvent fraction

由表1可知，PEF的得率最高（1.83%），EAF的得率最低（0.90%）。不同極性溶劑萃取物活性成分含量不同，不同極性溶劑萃取物TFC均低于TPC，TPC和TFC 大小順序均為 NBF＞EAF＞PEF（P＜0.05），推斷黃酮類(lèi)化合物可能是玉米須多酚的主要組分。TSC大小順序?yàn)?PEF＞EAF＞NBF（P＜0.05）。相關(guān)研究表明，NBF中TPC[（164.1±9.7）μg GAE/g干玉米須]最高（P＜0.05），而PEF中TPC[（16.4±0.9）μg GAE/g干玉米須]最低[21]，與本研究結(jié)果相似。

2.2 抗氧化和消化酶抑制活性測(cè)定

氧化作用與糖尿病和代謝紊亂在內(nèi)的多種疾病的發(fā)生有很大的相關(guān)性[22]，從植物中提取的天然抗氧化劑由于其能有效消除自由基且毒性較小已被廣泛研究。本研究比較了玉米須乙醇提取物不同極性溶劑萃取物的抗氧化和消化酶抑制活性，結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 玉米須乙醇提取物不同極性溶劑萃取物抗氧化和消化酶抑制活性Fig.1 Antioxidant and digestive enzyme inhibitory activities of different polar solvent extracts of corn silk alcohol extract

由圖1可知，從DPPH自由基清除率和FRAP來(lái)看，NBF和EAF的抗氧化活性明顯高于PEF，且NBF的DPPH自由基清除活性和FRAP最強(qiáng)。玉米須乙醇提取物不同極性溶劑萃取物的α-淀粉酶抑制率大小順序：EAF＞NBF＞PEF，其中EAF和NBF的抑制率均顯著高于阿卡波糖（P＜0.05），PEF的抑制率顯著低于阿卡波糖（P＜0.05）。不同極性溶劑萃取物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用與對(duì)α-淀粉酶抑制作用趨勢(shì)一致。結(jié)合PEF中TSC最高，但其抗氧化活性和消化酶抑制活性最低，說(shuō)明甾醇不是玉米須發(fā)揮抗氧化和消化酶抑制作用的主要活性成分。EAF和NBF的抗氧化和消化酶抑制活性高于PEF，說(shuō)明黃酮等多酚類(lèi)化合物是起到抗氧化和消化酶抑制活性的主要成分。據(jù)報(bào)道，植物提取物的抗氧化活性與總多酚的含量有關(guān)，而黃酮類(lèi)化合物作為一種有效的抗氧化劑是最常見(jiàn)和分布最廣的植物酚類(lèi)化合物[21]。NBF有較高的得率，且其中總多酚和總黃酮含量最高，有較好的抗氧化和消化酶抑制活性，因此，選擇NBF用于進(jìn)一步的LC-MS/MS分析和小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究。

2.3 NBF的LC-MS/MS分析

對(duì)NBF進(jìn)行LC-MS/MS分析，15種主要化合物的保留時(shí)間和質(zhì)荷比（m/z）列于表2。基峰圖如圖2所示。

圖2 LC-MS/MS的基峰圖Fig.2 Base peak chromatogram of LC-MS/MS

表2 NBF的LC-MS/MS初步分析Table 2 Tentative analysis of NBF by LC-MS/MS

由表2和圖2可知，初步鑒定出了15種化合物，NBF富含的多酚化合物大部分以糖苷的形式存在。在NBF中發(fā)現(xiàn)并鑒定了5種多酚化合物（4種類(lèi)黃酮和1種酚酸），LC-MS/MS數(shù)據(jù)表明NBF中確實(shí)存在黃酮類(lèi)化合物，它們是多酚化合物的主要成分。根據(jù)[M+H]+，保留時(shí)間為4.4 min的化合物可能是酰胺，保留時(shí)間為4.8、5.2 min的化合物可能是生物堿，均為含氮化合物。其余多數(shù)化合物都具有部分相似的碎片，它們都首先失去H2O，意味著結(jié)構(gòu)中可能存在羥基，可能是同系化合物。推斷這些同系物是一類(lèi)具有環(huán)和長(zhǎng)鏈結(jié)構(gòu)的多元醇化合物，更詳細(xì)的分析需要進(jìn)一步分離和研究。

2.4 NBF對(duì)糖尿病小鼠的降血糖作用

2.4.1 進(jìn)食量、飲水量和體質(zhì)量分析

高脂飲食聯(lián)合STZ注射可以誘導(dǎo)T2DM小鼠模型，高脂飲食可以誘導(dǎo)胰島素抵抗，小劑量注射STZ可以破壞部分胰島β細(xì)胞，使胰島素分泌減少[23]。NBF對(duì)小鼠體質(zhì)量的影響見(jiàn)表3，對(duì)小鼠進(jìn)食量和飲水量的影響見(jiàn)表4。

表3 NBF對(duì)小鼠體質(zhì)量的影響Table 3 Effect of NBF on body weight of mice

表4 NBF對(duì)小鼠進(jìn)食量和飲水量的影響Table 4 Effect of NBF on food intake and water consumption of mice

由表3可知，DC組小鼠第1周體質(zhì)量極顯著低于NC組小鼠（P＜0.01）。NBF灌胃后，小鼠體質(zhì)量增加，生長(zhǎng)速度明顯高于DC組。高脂飲食和STZ誘導(dǎo)的糖尿病小鼠主要癥狀是進(jìn)食量和飲水量的增加[24]。由表4可知，DC組的進(jìn)食量和飲水量與NC組相比顯著升高；NBF組的進(jìn)食量和飲水量均隨時(shí)間延長(zhǎng)呈先增大后減小的趨勢(shì)。最后1周，NBF組的進(jìn)食量和飲水量極顯著小于DC組（P＜0.01）。結(jié)果表明，與DC組相比，不同劑量NBF可減少進(jìn)食量和飲水量，使小鼠體質(zhì)量增加。推測(cè)NBF通過(guò)修復(fù)β細(xì)胞使血糖水平恢復(fù)正常，減輕尿糖和多尿的癥狀，從而減少飲水和進(jìn)食，減少糖分流失并改善體質(zhì)量。

2.4.2 NBF對(duì)血糖水平和糖原水平的影響

高血糖是糖尿病的主要特征，長(zhǎng)期的高血糖會(huì)損害眼睛等人體組織器官。常用FBG水平和OGTT評(píng)估藥物對(duì)葡萄糖代謝的影響[25]。NBF對(duì)血糖水平和糖原水平的影響見(jiàn)圖3。

圖3 NBF對(duì)血糖水平和糖原水平的影響Fig.3 Effects of NBF on blood glucose level and glycogen level

由圖3A可知，與NC組相比，高脂飲食與STZ注射相結(jié)合使FBG水平極顯著升高（P＜0.01）。灌胃4周后，DC組小鼠的FBG水平基本保持不變，而NBF組小鼠FBG水平明顯下降。由圖3B可知，NC組和DC組在OGTT期間血糖水平差異明顯。給予葡萄糖后，各組小鼠血糖水平在30 min時(shí)出現(xiàn)高峰值，隨后下降直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。NBF組血糖水平下降速度明顯快于DC組。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)（120 min），DC組血糖水平無(wú)明顯下降，NBF組血糖水平恢復(fù)至正常水平。此外，由圖3C可知，與NC組相比，DC組的曲線下面積（area under the cure，AUC）升高了約150%。相對(duì)于DC組，NBF組AUC分別降低了29.11%、28.58%和19.63%。

這些結(jié)果表明NBF改善了糖尿病小鼠的葡萄糖耐受性并起到了降血糖作用。許多富含黃酮和多酚的植物提取物被認(rèn)為可以增加葡萄糖耐量并具有降血糖作用[26-27]。也有報(bào)道稱，從玉米須提取的粗黃酮可以顯著降低血糖水平[28]。結(jié)合本研究表明，玉米須的黃酮類(lèi)和多酚類(lèi)化合物在降血糖方面發(fā)揮著重要作用。

糖尿病小鼠CAT和GPX等抗氧化酶的表達(dá)相對(duì)較低，β細(xì)胞也可能產(chǎn)生氧化應(yīng)激[29]。由圖3D可知，NBF給藥后，血清胰島素水平與DC組相比顯著降低（P＜0.05），這可能與NBF能提高胰島素敏感性有關(guān)。富含多酚的NBF具有良好的抗氧化活性，可以消除自由基，修復(fù)胰腺等人體組織器官。研究表明，多酚在多種動(dòng)物模型中具有抗肥胖和降血糖作用[30]。本研究發(fā)現(xiàn)NBF可以改善T2DM小鼠的葡萄糖耐受性，修復(fù)胰島細(xì)胞，抑制消化酶活性，從而起到降血糖作用。

糖原代謝作為體內(nèi)碳水化合物代謝的重要組成部分，出現(xiàn)代謝紊亂可能使血糖水平升高而引起糖尿病。由圖3E可知，DC組小鼠肝糖原水平較NC組極顯著降低（P＜0.01）。NBF（100、400 mg/kg bw）組小鼠肝糖原水平較DC組顯著升高（P＜0.05），肌糖原水平各組之間無(wú)顯著差異。這些結(jié)果表明NBF的降血糖作用可能通過(guò)促進(jìn)肝糖原合成而實(shí)現(xiàn)的。

2.4.3 NBF對(duì)糖化血清蛋白、非酯化脂肪酸和血脂水平的影響

血清葡萄糖水平過(guò)高會(huì)使蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸等大分子發(fā)生糖基化，產(chǎn)生高級(jí)糖基化終產(chǎn)物，使其出現(xiàn)結(jié)構(gòu)異常，細(xì)胞功能受到影響[31]。NBF對(duì)NEFA、GSP和血脂水平的影響見(jiàn)表5。

表5 NBF對(duì)TC、TG、HDL-C、LDL-C、NEFA和GSP水平的影響Table 5 Effects of NBF on levels of TC，TG，HDL-C，LDL-C，NEFA and GSP

由表5可知，NBF組GSP水平較DC組極顯著降低（P＜0.01），表明NBF可以通過(guò)降低GSP水平起到降血糖作用。

NEFA與胰島素抵抗和肥胖等代謝紊亂有關(guān)。NEFA氧化可影響糖尿病患者的胰島素敏感性并引起代謝紊亂。與NC組相比，DC組小鼠NEFA水平極顯著增加（P＜0.01）。劑量為 200、400 mg/kg bw的NBF組小鼠NEFA水平極顯著低于DC組（P＜0.01）。此外，與NC組相比，DC組的血清TC和TG水平極顯著增加（P＜0.01）。當(dāng)小鼠NBF灌胃4周后，血清TC和TG水平呈劑量依賴性下降。NBF組HDL-C水平較DC組顯著升高，而LDL-C水平則極顯著降低（P＜0.01）。結(jié)果均表明NBF可以成為一種很有前景的降脂藥物。推測(cè)NBF主要通過(guò)清除自由基、抑制氧化、減少脂質(zhì)吸收、加速脂質(zhì)降解來(lái)發(fā)揮降脂作用，從而發(fā)揮緩解和治療糖尿病的作用。

2.4.4 NBF對(duì)抗氧化酶活性的影響

本研究測(cè)定了包括CAT、GPX和SOD在內(nèi)的抗氧化酶的活性，并測(cè)定了各組小鼠MDA水平，結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 NBF對(duì)MDA水平和抗氧化酶活性的影響Table 6 Effects of NBF on MDA level and antioxidant enzymes activities

由表6可知，NBF可以提高抗氧化酶活性，抑制氧化應(yīng)激。DC組小鼠CAT、GPX和SOD活性較NC組極顯著降低（P＜0.01）。與 DC 組相比，NBF（200 mg/kg bw）可顯著恢復(fù)糖尿病小鼠抗氧化酶活性。與DC組相比，NBF組（400 mg/kg bw）脂質(zhì)氧化的終產(chǎn)物MDA水平顯著降低（P＜0.05）。許多疾病的治療效果是由抗氧化特性介導(dǎo)的[32]，改善體內(nèi)抗氧化環(huán)境對(duì)糖尿病的治療具有重要意義。NBF的體外抗氧化活性比較高，充分補(bǔ)充外源性抗氧化劑可以提高CAT、GPX和SOD等酶的活性，有效抑制自由基的氧化，從而預(yù)防或治療因氧化而引起的疾病。

2.4.5 腎臟、肝臟以及胰腺組織切片病理學(xué)檢查

H&E染色的腎臟、肝臟以及胰腺組織病理切片圖如圖4所示。

由圖4A2可知，DC組小鼠與NC組小鼠相比腎臟出現(xiàn)嚴(yán)重?fù)p傷。DC組可見(jiàn)腎小管損傷；部分腎小球充血、硬化、肥大；系膜細(xì)胞增生肥大；淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。NBF可以明顯減輕腎臟組織學(xué)損傷，NBF組腎小球硬化均消失，400 mg/kg bw NBF組腎臟未發(fā)現(xiàn)明顯異常。

T2DM是一種可造成全身性損害的代謝性疾病，肝臟作為靶器官之一，不可避免會(huì)受到影響[33]。由圖4B1可知，NC組肝細(xì)胞形態(tài)正常、肝細(xì)胞索排列有序，DC組小鼠中觀察到包括細(xì)胞變性、細(xì)胞壞死和肝索混亂在內(nèi)的明顯的肝損傷。NBF并沒(méi)有使癥狀有太大改善，但使壞死細(xì)胞減少，這可能是由于NBF改善了肝臟化學(xué)環(huán)境。

由圖4C1可知，NC組胰腺切片顯示β細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，排列均勻。相比之下，DC組切片顯示β細(xì)胞減少、出現(xiàn)局灶性壞死和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。與DC組相比，NBF組胰腺病變明顯減輕，400 mg/kg bw NBF組胰腺β細(xì)胞數(shù)量更多，分布更均勻，胰島結(jié)構(gòu)更完整。

有研究表明，黃酮類(lèi)化合物和有機(jī)酸聯(lián)合治療可以顯著改善STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠腎臟結(jié)構(gòu)退化，可以保護(hù)腎臟的結(jié)構(gòu)和功能[34]。本研究發(fā)現(xiàn)，NBF富含多酚和有機(jī)酸。肝臟、腎臟和胰腺組織學(xué)結(jié)果表明NBF可以修復(fù)受損的細(xì)胞和器官，在T2DM的治療中，對(duì)改善糖代謝和脂代謝紊亂，提高抗氧化活性和胰島素分泌有重要作用。組織病理學(xué)檢查顯示NBF可以修復(fù)肝臟、腎臟和胰腺的病理變化，這可能是NBF改善糖尿病癥狀的作用機(jī)制之一。

3 結(jié)論

玉米須的降血糖潛力使其成為一種有價(jià)值的農(nóng)業(yè)副產(chǎn)品。從玉米須乙醇提取物中提取出PEF、EAF和NBF，通過(guò)體外抗氧化和消化酶抑制研究發(fā)現(xiàn)，NBF具有以不同方式降低血糖的潛力。通過(guò)LC-MS/MS分析，推測(cè)NBF主要含有黃酮苷、生物堿和多元醇等化合物，但需要進(jìn)一步研究。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)NBF可以緩解體質(zhì)量減輕、降低血糖水平和調(diào)節(jié)血清胰島素水平。OGTT發(fā)現(xiàn)NBF可改善T2DM小鼠的葡萄糖耐受性。NBF處理后脂質(zhì)水平得到調(diào)節(jié)，抗氧化酶活性增加。從組織病理學(xué)觀察來(lái)看，NBF還發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用。這表明NBF通過(guò)抑制消化酶活性、改善抗氧化環(huán)境、修復(fù)組織器官等作用起到降血糖作用。這些結(jié)果表明，玉米須乙醇提取物的正丁醇萃取物具有良好的降血糖功效。