李銀雙 李 倩 楊 梅 陳引彩 王亞楠 孫麗娟 莫忠妹 張欽語(yǔ)

（1楚雄醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，云南楚雄 675000；2 重慶大學(xué)生物工程學(xué)院，重慶 400044；3 銅仁學(xué)院農(nóng)林工程與規(guī)劃學(xué)院，貴州銅仁 554300；4 貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料研究所，貴州貴陽(yáng) 550000）

羊肚菌Morchella隸屬于子囊菌亞門Ascomycotina、盤菌綱Discomycetes、盤菌目Ezizales、羊肚菌科Morchellaceae[1]。羊肚菌作為一種世界公認(rèn)的珍稀食藥用菌，不僅味道鮮美，而且具有抗氧化、抗菌、抗腫瘤、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力、抗疲勞、保腎、保肝及調(diào)節(jié)胃腸蠕動(dòng)等諸多藥用價(jià)值[2-3]。2014年，國(guó)內(nèi)外野生羊肚菌干品的市場(chǎng)價(jià)格曾高達(dá)2 500~3 500元/kg[3]。

近幾年來(lái)羊肚菌作為一種價(jià)格昂貴的高級(jí)滋補(bǔ)營(yíng)養(yǎng)品，吸引了眾多國(guó)內(nèi)外學(xué)者紛紛研究其栽培技術(shù)。1982年，美國(guó)科學(xué)家Ower首次宣布羊肚菌子實(shí)體人工栽培成功，但該技術(shù)最終沒有得到較好的推廣應(yīng)用[4]。我國(guó)的羊肚菌栽培研究始于20世紀(jì)70年代，90年代后技術(shù)得到逐步完善。自2012年四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院“外援營(yíng)養(yǎng)袋技術(shù)”研發(fā)成功，我國(guó)羊肚菌生產(chǎn)得到了飛速發(fā)展。據(jù)中國(guó)食用菌協(xié)會(huì)的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，2011—2016 年，羊肚菌栽培已遍布我國(guó)20多個(gè)?。?016年統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)），每年羊肚菌栽培面積分別為67 hm2、200 hm2、300 hm2、400 hm2、1 617 hm2、1 560 hm2，呈快速上升態(tài)勢(shì)[5-6]。然而，據(jù)趙琪[5]統(tǒng)計(jì)，2012—2017 年我國(guó)至少有70%~80%的栽培戶羊肚菌產(chǎn)量低或絕收。羊肚菌菌種退化、產(chǎn)量低和不出菇等問題已日益突出，栽培管理技術(shù)也亟待更新提高。研究表明土壤及土壤消毒劑的選用，往往會(huì)對(duì)食用菌菌種萌發(fā)，菌絲、子實(shí)體生長(zhǎng)及產(chǎn)量有直接影響[5，7-8]，但是否會(huì)對(duì)羊肚菌的菌絲生長(zhǎng)及出菇有影響，至今還沒有詳細(xì)的研究報(bào)道。為此，筆者選擇貴州省貞豐縣4 種常見土壤，采用常用且較為綠色生態(tài)的生石灰、高效綠霉凈（湖北隨緣食用菌消毒有限公司）消毒土壤方法，觀察處理后土壤栽培六妹羊肚菌效果。旨在探索羊肚菌的高產(chǎn)栽培技術(shù)，為貴州貞豐當(dāng)?shù)匮蚨蔷耘喈a(chǎn)業(yè)的健康快速發(fā)展提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

六妹羊肚菌，菌種編號(hào)GZCC20-0035。菌種培養(yǎng)料（袋規(guī)格24 cm×28 cm，體積分?jǐn)?shù)）：干小麥25%，木屑60%，腐殖質(zhì)土11.5%，石灰2%，石膏1.5%。外援營(yíng)養(yǎng)袋培養(yǎng)料（袋規(guī)格12 cm×24 cm，體積分?jǐn)?shù)）：干小麥20%，木屑17%，谷殼50%，腐殖質(zhì)土10%，石灰1%，石膏2%。

其他：生石灰，高效綠霉凈，溫度計(jì)，土壤濕度計(jì)等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 搭建大棚與整地

在貴州省貞豐縣貴州豐源食用菌栽培基地搭建傳統(tǒng)蔬菜大棚，四周及屋頂蓋上12針遮陽(yáng)網(wǎng)后再蓋上塑料膜，棚內(nèi)安裝噴灌系統(tǒng)、溫度計(jì)和土壤濕度計(jì)（用于監(jiān)測(cè)溫度及土壤濕度）。11 月中旬，將大棚內(nèi)面積約450 m2 地面，劃分成規(guī)格為寬2 m、長(zhǎng)45 m a、b、c、d、e 五個(gè)獨(dú)立的廂面，每個(gè)廂的面積為90 m2，再將每廂劃分3 個(gè)面積為30 m2的三重復(fù)（a-1、a-2、a-3；b-1、b-2、b-3；c-1、c-2、c-3；d-1、d-2、d-3；e-1、e-2、e-3）（圖1）。

圖1 整好后廂面

1.2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

向五個(gè)廂內(nèi)搬運(yùn)試驗(yàn)土壤（表1）：a 廂為草炭土和大田土1∶1 混合，大田土為常年耕種蔬菜和水稻的大田土壤，b、c 廂均為大田土，d 廂為混交林的腐殖土，e 廂為大棚附近相對(duì)貧瘠的紅土。對(duì)a、b、d、e廂采用“生石灰+高效綠霉凈”消毒土壤，c 廂僅用生石灰消毒土壤。生石灰用量為每廂4.5 kg，高效綠霉凈用量為每廂20 g 兌水20 kg[9]。具體操作：將稱取的生石灰，兌水的高效綠霉凈平均一分為二，一半分別撒或噴表層土壤后，深翻、翻細(xì)土壤，用剩下的生石灰和高效綠霉凈噴（撒）土壤消毒，再次深翻、翻細(xì)土壤。上述處理結(jié)束后，打開屋頂及四周遮陽(yáng)網(wǎng)，暴曬30 d。

表1 試驗(yàn)土壤及消毒方法

1.2.3 播種及管理

土壤暴曬結(jié)束后，打開棚內(nèi)噴灌系統(tǒng)，調(diào)節(jié)土壤含水量至30%，每個(gè)廂面開深約4~5 cm 的兩條小溝（溝間距50 cm 左右），將羊肚菌菌種揉碎后均勻撒在溝內(nèi)（條播），每個(gè)廂面播種30 袋菌種，播種結(jié)束后用小溝兩側(cè)土壤將菌種覆蓋，及時(shí)蓋上黑色地膜，兩邊用土塊壓緊，關(guān)閉所有遮陽(yáng)棚。

1.2.4 補(bǔ)水、放置外援營(yíng)養(yǎng)袋

播種后15 d 左右，將外援營(yíng)養(yǎng)袋一面打孔后孔朝下置于土壤表面，呈五點(diǎn)式擺放，每平方米放置5~7 袋。擺放好營(yíng)養(yǎng)袋后土壤補(bǔ)水，保持土壤含水量在30%左右。

1.2.5 催菇

每天掀開黑色地膜1~2 h 通氣，給予弱光照射，及時(shí)進(jìn)行土壤補(bǔ)水。播種后約50 d，若開春氣溫回升，菌絲菌霜復(fù)合體已長(zhǎng)滿整個(gè)廂面，可開始催菇。具體操作：調(diào)節(jié)土壤水分至40%，撤去黑色地膜光刺激，撤去外援營(yíng)養(yǎng)袋[10]。

1.2.6 考察內(nèi)容及方法

1.2.6.1 統(tǒng)計(jì)菌種成活、污染情況

播種后第10 天，用矩形框（0.5 m × 0.5 m）在每個(gè)廂面內(nèi)隨機(jī)選取10 個(gè)點(diǎn)，觀察框內(nèi)菌種污染情況，統(tǒng)計(jì)菌種污染率（菌種污染率=出現(xiàn)污染點(diǎn)數(shù)÷10×100%），分析土壤消毒效果。

播種后第 10 天、第 20 天、第 30 天、第 40 天，用矩形框（0.5 m×0.5 m）在每個(gè)廂面內(nèi)隨機(jī)選取10個(gè)點(diǎn)，觀察比較每個(gè)廂面土表菌絲的分布情況，統(tǒng)計(jì)菌絲覆蓋率（菌絲覆蓋率=生長(zhǎng)菌絲點(diǎn)數(shù)÷10×100%）。

1.2.6.2 出菇數(shù)及產(chǎn)量統(tǒng)計(jì)

來(lái)年氣溫回升，棚內(nèi)開始出菇，用矩形框（0.5 m×0.5 m）在每個(gè)廂面的三個(gè)重復(fù)內(nèi)隨機(jī)選取7 個(gè)點(diǎn)，共計(jì)21 個(gè)點(diǎn)，統(tǒng)計(jì)框內(nèi)出菇數(shù)（僅統(tǒng)計(jì)高≥3.0 cm 的羊肚菌子實(shí)體），計(jì)算每個(gè)廂面21 統(tǒng)計(jì)點(diǎn)的出菇總數(shù)和平均數(shù)，利用GraphPad Prism 7 軟件進(jìn)行平均數(shù)據(jù)差異性分析。采收成熟子實(shí)體后，統(tǒng)計(jì)每廂最終鮮菇產(chǎn)量，綜合分析栽培土壤對(duì)羊肚菌出菇密度和產(chǎn)量的影響。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同土壤栽培羊肚菌菌種污染、成活情況

播種第10天，五個(gè)廂面均不同程度出現(xiàn)菌種污染，同為“生石灰+高效綠霉凈”消毒處理的a、b、d、e四個(gè)廂面雖土質(zhì)不同，但菌種污染率相同（30%）。但是，對(duì)比同為大田土的b、c 兩個(gè)廂面發(fā)現(xiàn)，b 廂的菌種污染率為30%，c 廂菌種污染率為60%，表明采用“生石灰+高效綠霉凈”消毒土壤能有效防止羊肚菌菌種被污染。

播種后第 10 天、第 20 天、第 30 天、第 40 天，觀察發(fā)現(xiàn)a廂混合草炭土的土壤疏松程度和持水能力在各個(gè)時(shí)間段明顯強(qiáng)于其他廂面土壤。五個(gè)廂面的土表菌絲菌霜復(fù)合體分布情況見表2。由表2 可知，同為“生石灰+高效綠霉凈”消毒土壤a 與b、d、e發(fā)現(xiàn)，a 廂面在統(tǒng)計(jì)的前三個(gè)時(shí)間點(diǎn)（第10 天、第20天、第30天）的土表菌絲和菌霜覆蓋率分別為50%、70%、90%，相比同時(shí)期的另外三個(gè)廂面，菌絲覆蓋率均高，表明該廂面混合草炭土土壤疏松和持水能力強(qiáng)的特性，較其他廂面土壤更適于羊肚菌菌絲的生長(zhǎng)攀爬。相反 e 廂面在第 10 天、第 20 天、第 30 天的土表菌絲和菌霜覆蓋率分別為20%、40%、60%，三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均比a、b、d 廂面差，甚至當(dāng)播種后第40天，其他廂面的菌絲覆蓋率均能達(dá)100%，但e 廂面菌絲覆蓋率也僅為90%，表明肥沃土壤有利于羊肚菌菌絲生長(zhǎng)。

表2 土表菌絲菌霜覆蓋率

2.2 出菇統(tǒng)計(jì)

來(lái)年3 月，氣溫回升，所有廂面均開始出菇（圖3）。采用矩形框（0.5 m×0.5 m）在每個(gè)廂面的三個(gè)重復(fù)內(nèi)各隨機(jī)選取7 個(gè)點(diǎn)，每廂共計(jì)21 個(gè)點(diǎn)，統(tǒng)計(jì)不同廂內(nèi)出菇情況（表4），將出菇平均數(shù)進(jìn)行數(shù)據(jù)差異性分析（圖2）。結(jié)合表3 及圖2 可知，對(duì)比同為大田土的b、c 兩個(gè)廂面，在每個(gè)廂面的21 個(gè)統(tǒng)計(jì)點(diǎn)中，b 廂的出菇平均數(shù)（7.29 枚）和出菇總數(shù)（153枚）均高于c 廂的出菇平均數(shù)（6.71 枚）和出菇總數(shù)（141枚），b廂出菇更密，差異顯著（圖2）。這很有可能是c 廂僅用生石灰消毒土壤，播種后羊肚菌大部分菌種發(fā)生污染，從而導(dǎo)致出菇密度降低。對(duì)比同為“生石灰+高效綠霉凈”消毒土壤的a、b、d、e 四個(gè)廂面（表3），a廂21個(gè)統(tǒng)計(jì)點(diǎn)的出菇平均數(shù)（9.14枚）和出菇總數(shù)（192 枚）均高于b 廂（7.29 枚，153 枚）、d廂（7.24 枚，152 枚）、e（4.24 枚，89 枚），a 廂的出菇密度最高，e 廂的出菇密度最低，b、d 廂居中，與 a 廂對(duì)比差異均顯著（圖2）。由此可見，雖然羊肚菌菌絲的給養(yǎng)主要由外援營(yíng)養(yǎng)袋提供，但出菇密度仍與土壤肥沃性密切相關(guān)。試驗(yàn)a廂的混合草炭土基于自身土質(zhì)特性和土壤肥沃等因素，出菇密度最高，e 廂貧瘠土出菇密度最低。

圖3 不同生長(zhǎng)階段的羊肚菌子實(shí)體

表3 試驗(yàn)出菇統(tǒng)計(jì)

圖2 廂面統(tǒng)計(jì)樣本出菇平均數(shù)差異性分析

2.3 產(chǎn)量

采收結(jié)束后統(tǒng)計(jì)羊肚菌鮮菇總產(chǎn)量，結(jié)果同為大田土b、c 兩個(gè)的廂面羊肚菌鮮菇總產(chǎn)量分別為33.19 kg，27.28 kg，c 廂因大部分菌種被污染，導(dǎo)致鮮菇產(chǎn)量低于b 廂。同為“生石灰+高效綠霉凈”消毒土壤的a、b、d、e 四個(gè)廂面，a 廂的鮮菇產(chǎn)量最高，為 39.30 kg，e 廂的鮮菇產(chǎn)量最低，為 17.22 kg，b 廂（33.19 kg）、d 廂（34.42 kg）鮮菇產(chǎn)量居中，與出菇密度統(tǒng)計(jì)結(jié)果基本一致。

3 小結(jié)與討論

因有獨(dú)特的地理位置及氣候優(yōu)勢(shì)，貴州省目前已成為食用菌的優(yōu)勢(shì)產(chǎn)區(qū)，并逐漸形成包括羊肚菌在內(nèi)的多種珍稀菌類品種綜合發(fā)展的格局[11-12]。目前，在貴州主要以大田和林下的“秋種春收”模式栽培羊肚菌為主，栽培面積逐年增加[8，13]。然而，羊肚菌栽培關(guān)鍵技術(shù)主要是靠模仿和復(fù)制，生產(chǎn)穩(wěn)定性差[13]。據(jù)筆者了解，貴州大多數(shù)羊肚菌栽培者往往僅用生石灰消毒土壤，播種后菌種污染率居高不下。試驗(yàn)用生石灰結(jié)合高效綠霉凈處理栽培六妹羊肚菌的土壤，能有效降低羊肚菌菌種污染率。

外援營(yíng)養(yǎng)袋技術(shù)的應(yīng)用使我國(guó)的羊肚菌栽培取得了突破性的進(jìn)展，但栽培土壤的選擇是否會(huì)對(duì)羊肚菌生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生影響一直是個(gè)疑問[13]。試驗(yàn)結(jié)果表明，羊肚菌的出菇數(shù)與土壤的肥沃性存在直接關(guān)系，混合草炭土非常適宜羊肚菌菌絲的生長(zhǎng)，且出菇密度和產(chǎn)量明顯優(yōu)于其他土壤。研究結(jié)果對(duì)指導(dǎo)貴州當(dāng)?shù)匮蚨蔷母弋a(chǎn)栽培，推動(dòng)羊肚菌產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展具有重要意義。