戴晉軍，廖燦青，2，覃先武，胡駿鵬，黃鑫，龔發(fā)源

（1.安琪酵母股份有限公司，湖北宜昌 443003；2.長江大學(xué)，湖北荊州 434023）

由于促生長類抗生素不規(guī)范和不科學(xué)使用，其所引起的抗生素殘留、細(xì)菌耐藥性等食品安全風(fēng)險(xiǎn)日益凸顯，2020 年7月，我國禁止在飼料中添加促生長類抗生素，因此，尋找“綠色、高效、無副作用” 的抗生素替代品成為畜牧行業(yè)的研究熱點(diǎn)。結(jié)合促生長類抗生素的作用機(jī)理，即預(yù)防疾病、提高飼料消化利用率和促進(jìn)動物生長，目前眾多研究開始聚焦到通過調(diào)控動物腸道健康以達(dá)到相應(yīng)的效果，在這方面益生菌、益生元及酶制劑類等產(chǎn)品被廣泛關(guān)注。

益生菌作為活性微生物或培養(yǎng)物，能夠直接調(diào)控動物腸道微生態(tài)菌群平衡，通過微生物本身或其代謝物達(dá)到預(yù)防腸道疾病、促進(jìn)消化和提高生長性能等效果。目前在動物養(yǎng)殖領(lǐng)域應(yīng)用較廣泛的益生菌主要包括：芽孢桿菌、乳酸菌、酵母菌等。其中，丁酸梭菌（Clostridium butyricum），又名酪酸梭菌，屬于一種厭氧的革蘭氏陽性芽孢桿菌，因其能形成內(nèi)生芽孢，具有較好的抗逆性，耐胃酸、耐膽鹽和耐高溫等優(yōu)勢成為目前首選的外源添加益生菌。

益生元包括多種物質(zhì)，如含氧多糖或寡糖、輔酶、某些氨基酸和維生素等，但現(xiàn)在研究和應(yīng)用較多的是寡糖類物質(zhì)。其中釀酒酵母細(xì)胞壁多糖源于釀酒酵母，是釀酒酵母經(jīng)液體發(fā)酵后得到的菌體，再經(jīng)自溶或外源酶催化水解，分離獲得的產(chǎn)品，主要多糖成分為甘露聚糖、β-1，3/1，6-葡聚糖。研究發(fā)現(xiàn)釀酒酵母細(xì)胞壁可通過提升免疫、改善腸道菌群、吸附霉菌毒素或病原菌等強(qiáng)化動物免疫功能。

酶制劑在畜牧養(yǎng)殖業(yè)的應(yīng)用，主要是補(bǔ)充家禽、家畜體內(nèi)消化道酶的自身供應(yīng)不足，同時(shí)消除飼料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，提高飼料中營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和轉(zhuǎn)化率。隨著研究深入和認(rèn)知發(fā)展，關(guān)于飼用酶制劑的研究和應(yīng)用已經(jīng)由內(nèi)源酶延伸至外源酶。而葡萄糖氧化酶作為動物體內(nèi)不能自主合成的外源酶，是目前市面上應(yīng)用比較廣泛且認(rèn)可度較高的酶制劑之一。葡萄糖氧化酶在體內(nèi)通過催化葡萄糖的氧化反應(yīng)，最終生成葡萄糖醛酸和過氧化氫，通過一系列的酶促反應(yīng)，起到保健腸道、抗氧化、減少霉菌毒素癥狀等作用，能夠達(dá)到減少和部分代替抗生素藥物的效果。

本研究旨在考察不同飼料添加劑對白羽肉雞生長性能、免疫及腸道微生物的影響，為科學(xué)、高效的抗生素替代方案及多種功能性添加劑組合在肉雞生產(chǎn)養(yǎng)殖中的實(shí)際應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 釀酒酵母細(xì)胞壁（安琪酵母生產(chǎn)，粗蛋白質(zhì)22.5%，β-葡聚糖26.9%，甘露聚糖27.8%）。丁酸梭菌制劑（市場收集，丁酸梭菌含量≥10 億CFU/g）。葡萄糖氧化酶制劑（市場收集，葡萄糖氧化酶活力≥2000 U/g）。

1.2 試驗(yàn)動物與分組 選擇1 日齡科寶白羽肉雞480羽，隨機(jī)分為4 個處理組，每處理組6 重復(fù)，每重復(fù)20只，各組間試驗(yàn)雞的平均體重差異不顯著（P ＞0.05）。試驗(yàn)分組如表1，基礎(chǔ)日糧配方參考NY/T 33-2004，分為兩階段日糧，且不含任何促生長抗生素類飼料添加劑，具體飼料指標(biāo)如表2。試驗(yàn)時(shí)間2021 年5～6月，試驗(yàn)周期42 d。試驗(yàn)期間飼養(yǎng)管理按常規(guī)進(jìn)行，養(yǎng)殖條件為地面平養(yǎng)，飼料料型為商品料粉碎后的粉料。按照肉雞常規(guī)免疫程序進(jìn)行免疫和管理，自由采食和飲水，采用24 h 光照制。

表1 試驗(yàn)處理與設(shè)計(jì)

表2 白羽肉雞飼料的主要指標(biāo) %

1.3 考察指標(biāo)

1.3.1 生長性能指標(biāo) 每個試驗(yàn)階段（21、42 d）結(jié)束前，禁食（自由飲水）12 h 后稱重，計(jì)算1～21、22～ 42 d 的平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）、料重比（F/G）和成活率。

平均日增重（ADG）：以重復(fù)為單位，飼養(yǎng)試驗(yàn)開始前和結(jié)束后分別稱重，稱重前禁食12 h，計(jì)算每個重復(fù)每只雞的平均日增重。平均日采食量（ADFI）：試驗(yàn)開始后，記錄每天的投料量和每天的剩料量，死亡雞只，計(jì)算每個重復(fù)每只雞的平均日采食量。耗料增重比（F/G）：由每個重復(fù)的總耗料量和總增重計(jì)算得出每個重復(fù)的平均料重比。

1.3.2 免疫器官指標(biāo) 在21 d 和42 d 屠宰前禁食12 h，僅供飲水。以重復(fù)為單位稱取各處理組體重，選取3 只與平均體重接近的試雞用于屠宰試驗(yàn)。取樣按照家禽屠宰測定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，分離胸腺、脾臟、法氏囊稱重與體重作比較。所得比值即為胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)。

1.3.3 血清新城疫抗體指標(biāo) 42 d 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每個處理每個重復(fù)3 只使用無抗凝劑采血管采血，4000 r/min 離心10 min 分離血清，用于檢測新城疫抗體滴度，禽流感抗體指標(biāo)采用高致病性禽流感診斷技術(shù)血凝（HA）和血凝抑制試驗(yàn)（HI）（GB/T18936-2003）測定。

1.3.4 腸道微生物 42 d 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，屠宰過程中在潔凈條件下采集回腸和盲腸中食糜樣品用于測定腸道微生物菌群（常規(guī)培養(yǎng)法）。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel進(jìn)行預(yù)處理，以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用SPSS 18.0 統(tǒng)計(jì)軟件中one-way ANOVA 進(jìn)行單因素方差分析，用Duncan 氏多重比較法分析差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同飼料添加劑對白羽肉雞生長性能的影響 肉雞生長性能數(shù)據(jù)如表3 所示，從42 日齡平均出欄重分析2 組＞1 組＞4 組＞3組，日糧中添加300 g/t 釀酒酵母細(xì)胞壁（2 組）對肉雞出欄重提升效果最佳，較對照組（1 組）提高7.0%。從全程1～ 42 d 的料肉比（F/G）分析4 組<3 組<2 組<1組，添加300 g/t 釀酒酵母細(xì)胞壁（2 組）較空白對照組（1 組）降低0.6%，但差異不顯著。

表3 不同飼料添加劑對肉雞生長性能的影響

2.2 不同飼料添加劑對42 d 肉雞免疫指標(biāo)的影響 如表4 所示，各組42 d 肉雞免疫器官指數(shù)的差異并不顯著。各組血清抗體滴度水平差異不顯著，添加300 g/t 釀酒酵母細(xì)胞壁（2 組）的血清新城疫抗體水平最高。

表4 不同飼料添加劑對42 d 肉雞免疫指標(biāo)的影響

2.3 不同飼料添加劑對白羽肉雞腸道微生物的影響 如表5 所示，各試驗(yàn)組腸道內(nèi)容物大腸桿菌數(shù)量均低于對照組，其中添加200 g/t 丁酸梭菌（3組）對于腸道大腸桿菌和沙門氏菌抑制作用最顯著，添加300 g/t 釀酒酵母細(xì)胞壁（2 組）效果次之。

表5 不同飼料添加劑對42 d 肉雞腸道微生物的影響 lg cfu/g

3 討論

3.1 不同飼料添加劑對白羽肉雞生長性能的影響 平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料肉比（F/G）能夠反映動物的生長性能，飼料中添加功能性飼料添加劑的最主要目的之一就是提高其生長性能。目前包括釀酒酵母細(xì)胞壁、丁酸梭菌、葡萄糖氧化酶在內(nèi)的飼料添加劑在提升肉雞生長性能方面研究眾多。Pascual 等（2020）研究發(fā)現(xiàn)，肉雞日糧中添加200～ 500 ppm 酵母細(xì)胞壁對育雛期的生長性能沒有顯著改善作用，但隨著養(yǎng)殖周期延長，育成期肉雞的飼料轉(zhuǎn)化率和出欄重均顯著增加；管秀界等（2020）研究發(fā)現(xiàn)，日糧添加0.5～ 10 kg/t 酵母細(xì)胞壁對21 日齡肉雞生長性能無顯著影響，但提高了42 日齡肉雞的平均體重。趙強(qiáng)等（2019）研究發(fā)現(xiàn)，肉雞日糧添加100～600 g/t 的丁酸梭菌，肉雞ADFI 和ADG 較對照組有一定提升，但是差異不顯著，且隨著丁酸梭菌添加量增加而呈下降趨勢，耗料增重比也有降低趨勢；鄭愛娟等（2019）研究發(fā)現(xiàn)，飼糧添加丁酸梭菌未顯著影響肉雞21 日齡和42 日齡體重、1～ 21日齡平均日增重和料重比，與無抗對照組相比，飼糧添加丁酸梭菌極顯著降低了1～ 21 日齡肉雞平均日采食量；徐明霞（2021）研究表明飼糧中添加丁酸梭菌可極顯著提高肉雞平均日增重，其中日糧添加600 g/t 丁酸梭菌組與抗生素組相比差異顯著。崔細(xì)鵬等（2018）研究表明，在日糧中添加葡萄糖氧化酶能夠顯著的提高白羽肉仔雞全期日增重，降低料肉比；王洪軍（2019）研究發(fā)現(xiàn)，肉雞日糧添加1000 U/g 葡萄糖氧化酶，與抗生素組相比可顯著降低1～21、21～42 d 肉雞的料肉比；郭玉光等（2019）研究發(fā)現(xiàn)，前期日糧（0～ 21 d）添加150 g/t 葡萄糖氧化酶，后期日糧（21～ 42 d）添加100 g/t 葡萄糖氧化酶能夠顯著提高肉雞階段體重和平均日增重，且提升效果優(yōu)于抗生素組。在本試驗(yàn)研究中，不同類型的飼料添加劑對肉雞生長性能提升效果不同，與對照組相比，釀酒酵母細(xì)胞壁對肉雞的出欄重及飼料效率的作用最顯著，而丁酸梭菌和葡萄糖氧化酶的作用并不明顯，可能與益生菌和酶制劑產(chǎn)品本身的差異有關(guān)。

3.2 不同飼料添加劑對白羽肉雞免疫水平的影響 胸腺、脾臟和法氏囊作為家禽主要的免疫器官，是家禽免疫機(jī)能的重要指標(biāo)，可反映家禽的非特異性免疫水平。而實(shí)際肉雞生產(chǎn)過程中，會接受系列化的免疫程序管理，而針對特定病原菌的血清抗體水平則反映了家禽的特異性免疫水平。管秀界等（2020）研究發(fā)現(xiàn)，使用0.5～ 10 kg/t 釀酒酵母細(xì)胞壁替代肉雞日糧中的金霉素，可提高新城疫抗體水平，同時(shí)刺激免疫系統(tǒng)發(fā)育；黃婧溪等（2018）對比兩種酵母細(xì)胞壁多糖對肉雞免疫機(jī)能的影響時(shí)，發(fā)現(xiàn)高含量的甘露聚糖和β-葡聚糖有利于提高免疫器官指數(shù)，增強(qiáng)肉雞的細(xì)胞免疫水平。何菊等（2018）研究發(fā)現(xiàn)，肉雞日糧添加100～200 g/t 丁酸梭菌CB1 制劑與對照組和抗生素組相比，42 d 法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)顯著提高；周奕含（2021）研究發(fā)現(xiàn)肉雞基礎(chǔ)日糧中添加2000 mg/kg 丁酸梭菌可顯著提高肉仔雞胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)。王洪軍（2019）研究發(fā)現(xiàn)添加4000 U/g 葡萄糖氧化酶可顯著提高21 d 肉雞的脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)，顯著增加42 d 肉雞血清新城疫抗體水平；高晶萍等（2022）研究表明，肉雞飲水添加0.1%葡萄糖氧化酶，對肉雞的免疫器官指數(shù)及血清新城疫抗體水平無顯著影響，但是與乳酸菌聯(lián)合使用會有正向效果。本試驗(yàn)中，各試驗(yàn)組對于肉雞的免疫器官指數(shù)有一定影響，但是差異不顯著；對42 d 肉雞血清新城疫抗體水平而言，釀酒酵母細(xì)胞壁的作用效果最佳，這可能與釀酒酵母細(xì)胞壁中富含的β-1，3-1，6 葡聚糖能夠通過免疫信號通路激活宿主特異性和非特異性免疫反應(yīng)有關(guān)。

3.3 不同飼料添加劑對白羽肉雞腸道微生物的影響 家禽腸道具有雙重功能，既是作為消化和吸收營養(yǎng)物質(zhì)的重要器官，又是保持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的第一道先天屏障。而腸道里存在豐富的微生物菌群，對腸道發(fā)揮生理功效具有重要意義。腸道微生物菌群的穩(wěn)定一定程度的決定了機(jī)體腸道的健康水平，比如像大腸桿菌或沙門氏菌等致病菌大量繁殖而失衡，就會引發(fā)動物機(jī)體損傷甚至死亡。因此，眾多飼料添加劑主要是在腸道中通過調(diào)節(jié)消化道菌群而發(fā)揮生理功能。釀酒酵母細(xì)胞壁作為一種特殊的真菌多糖，其特殊的空間結(jié)構(gòu)及功能位點(diǎn)在體外和體內(nèi)都具有吸附病原菌的作用（Liu等，2021），同時(shí)酵母細(xì)胞壁富含的甘露寡糖還可作為益生元在后腸促進(jìn)乳酸桿菌、雙歧桿菌等厭氧菌的增殖；夏林等（2008）研究發(fā)現(xiàn)，肉雞日糧中添加750 g/t 的釀酒酵母細(xì)胞壁多糖，盲腸內(nèi)大腸桿菌和沙門氏菌的數(shù)量顯著降低，乳酸桿菌數(shù)量顯著增加；賀淼等（2015）研究顯示，在肉雞日糧中添加1 kg/t 釀酒酵母細(xì)胞壁，盲腸內(nèi)容物中大腸菌落總數(shù)降低44.39%。何菊等（2021）研究發(fā)現(xiàn)，肉雞日糧添加丁酸梭菌制劑對肉雞回腸、盲腸乳酸桿菌和雙歧桿菌的增殖有顯著促進(jìn)作用；李懷宇（2021）研究顯示，肉雞日糧添加125、250、500、1000 mg/kg 的丁酸梭菌可顯著降低盲腸大腸桿菌數(shù)量，分別降低23.80%、21.25%、17.53%和14.20%；250 mg/kg 和1000 mg/kg 丁酸梭菌可顯著提高雙歧桿菌數(shù)量，分別提高20.09%和33.33%。郭玉光等（2019）研究發(fā)現(xiàn)肉雞日糧添加100 g/t 葡萄糖氧化酶能夠顯著降低22 d 和43 d盲腸大腸桿菌和沙門氏菌數(shù)量，顯著提高乳酸菌數(shù)量；高晶萍等（2022）研究發(fā)現(xiàn)肉雞飲水中添加0.1%葡萄糖氧化酶，在門水平上可顯著提高盲腸擬桿菌門（Bacteroidetes），在屬水平上可顯著提高狄氏副擬桿菌（Parabacteroides）和長棲糞桿菌（Faecalibacterium）。本試驗(yàn)結(jié)果顯示釀酒酵母細(xì)胞壁和丁酸梭菌對42 d 肉雞盲腸的大腸桿菌和沙門氏菌數(shù)量影響顯著，丁酸梭菌的作用效果更佳，主要是丁酸梭菌在腸道定植能夠產(chǎn)生丁酸等短鏈脂肪酸，能降低腸道pH 直接抑制大腸桿菌等病原菌增殖，同時(shí)促進(jìn)乳酸桿菌和雙歧桿菌等有益菌的生長。

4 小結(jié)

本試驗(yàn)結(jié)果表明，釀酒酵母細(xì)胞壁在提升生長性能和免疫水平上效果最佳；丁酸梭菌對于肉雞腸道菌群的改善效果最佳。