高 旭，程 斌，高 煜，葛昌斌，丁延慶，曹 寧，辛智海，張立異

(1.貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院旱糧研究所，貴州貴陽 550006； 2.貴州大學(xué)農(nóng)學(xué)院，貴州貴陽 550025；3.漯河市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，河南漯河 462300； 4.貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，貴州貴陽 550025)

迄今為止，已經(jīng)有34個(gè)小麥條銹菌生理小種(CYR1～CYR34)和40多個(gè)致病類群(如洛10、雜46、貴農(nóng)22等)被命名，其中CYR32、CYR33和CYR34為當(dāng)前中國小麥條銹菌的主要流行小種。截止2020年，全球已有83個(gè)抗條銹病基因被正式命名，有40多個(gè)抗條銹病基因被暫時(shí)命名。但是，貴農(nóng)22致病類群出現(xiàn)以后，只有少數(shù)苗期抗病基因(、、等)對(duì)現(xiàn)有的條銹菌仍能保持有效的抗病性。CYR34小種主要分布在中國西南地區(qū)和西北甘肅等省份，目前該小種已經(jīng)擴(kuò)展至全國大部分麥區(qū)，對(duì)中國小麥安全生產(chǎn)和抗病育種工作造成嚴(yán)重威脅。因此，必須通過挖掘新的抗條銹病基因來拓寬抗性基因遺傳資源。

SNP芯片技術(shù)被廣泛應(yīng)用于小麥研究中，是一種高通量、微型、自動(dòng)化檢測(cè)SNP的手段。混池轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(BSR-Seq)技術(shù)無需檢測(cè)全基因組，且不涉及重復(fù)序列，所以對(duì)基因組較大的物種而言，BSR-Seq更為簡(jiǎn)便有效。Zhang等利用一個(gè)RIL群體(SW8588/Thatcher)并結(jié)合55K芯片，檢測(cè)到7個(gè)抗葉銹病QTL和6個(gè)抗條銹病QTL，其中有4個(gè)QTL對(duì)兩種病害兼具抗性。Jia等利用小麥品種濟(jì)麥23和泰農(nóng)18雜交構(gòu)建的F和F群體進(jìn)行BSR-Seq，將抗白粉病基因定位在5DS染色體標(biāo)記YTU3004和Swgi068/Bwm20之間。

貴協(xié)3號(hào)是利用以色列野生二粒小麥(，AABB，2=28)與光稃野燕麥(L.var.)進(jìn)行雜交，獲得的F代與貴農(nóng)22回交選育而成的普通小麥材料。2010―2021年，貴協(xié)3號(hào)在中國多個(gè)麥區(qū)對(duì)條銹病主要流行小種(CYR32、CYR33和CYR34)均表現(xiàn)為近免疫或高抗，充分說明該品種具有較好的持久抗病性，是一個(gè)具有利用價(jià)值的條銹病抗源。因此，本研究對(duì)貴協(xié)3號(hào)的條銹病抗性進(jìn)行研究，準(zhǔn)確定位其攜帶的抗條銹病基因，并發(fā)掘與抗條銹病基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，以期加快貴協(xié)3號(hào)在小麥抗病育種中的應(yīng)用，保障中國小麥安全生產(chǎn)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

以來自澳大利亞的高感條銹病小麥品種Avocet S為母本，以來自貴州大學(xué)張慶勤教授惠贈(zèng)的高抗條銹病品系貴協(xié)3號(hào)為父本，雜交得到的F種子自交形成F，F(xiàn)再以單籽粒傳法獲得227份F代重組自交系(RIL)群體，用于田間成株期條銹病的表型鑒定和基因型分析。感病對(duì)照品種為銘賢169。

1.2 成株期條銹病表型鑒定

于小麥成株期，在田間自然條件下對(duì)RIL群體及其親本進(jìn)行條銹菌混合生理小種的條銹病抗性鑒定。于2018和2019年的10月中旬，將RIL群體及其親本種植在貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院貴陽基地(26°29′ N，106°39′ E)；于2019年11月初，將RIL群體及其親本種植在四川省成都市雙流區(qū)試驗(yàn)基地(30°57′ N，103°92′ E)，三個(gè)環(huán)境分別用18GY、19GY和19CD來表示。每個(gè)家系種植1行，每行10株，每隔5行種植感病對(duì)照品種銘賢169作為誘發(fā)行。待銘賢169及感病親本Avocet S充分發(fā)病時(shí)，調(diào)查并記錄條銹病反應(yīng)型，參照Cheng等的方法，采用0～4級(jí)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，其中0～2級(jí)為抗病，3～4級(jí)為感病。

1.3 混池轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及分析

采用TriZol法分別提取親本Avocet S和貴協(xié)3號(hào)的RNA，構(gòu)建親本池。根據(jù)RIL群體條銹病抗性鑒定結(jié)果，從中選取20個(gè)抗病家系(反應(yīng)型為0)建立抗病池(Br)，選取20個(gè)感病家系(反應(yīng)型為4)建立感病池(Bs)。每個(gè)家系分別取4粒種子播種于花盆中，置于培養(yǎng)箱(溫度16～25 ℃，光照16 h，光強(qiáng)22 000 lx)中進(jìn)行培養(yǎng)，待幼苗長(zhǎng)至2葉完全張開時(shí)，取每個(gè)單株的第二片葉中部(葉長(zhǎng)4 cm)，采用TriZol法分別提取RNA，等量混合，形成抗、感池。RNA樣品檢測(cè)合格后，用Illumina高通量測(cè)序平臺(tái)NovaSeq 6000進(jìn)行測(cè)序，將得到的各樣品的原始數(shù)據(jù)(raw reads)進(jìn)行評(píng)估，去除測(cè)序接頭、低質(zhì)量堿基、空載體等不可信數(shù)據(jù)后，得到高質(zhì)量的質(zhì)控后數(shù)據(jù)(clean reads)，用序列比對(duì)軟件STAR將其比對(duì)到中國春2.0參考基因組上。BSR-Seq數(shù)據(jù)分析由北京麥美瑞生物科技有限公司合作完成。利用STAR軟件將高質(zhì)量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)比對(duì)到中國春參考序列上并進(jìn)行過濾，保留只有唯一比對(duì)位置且錯(cuò)配數(shù)小于2%的序列比對(duì)結(jié)果，使用SAM tools軟件挖掘可能的變異位點(diǎn)，然后用Perl程序僅保留比對(duì)質(zhì)量大于phred值15、變異質(zhì)量大于phred值30、只有2種基因型、總深度在6～100 000之間、參考序列基因型深度大于3、變異基因型深度大于3、參考序列基因型深度比例大于5%以及變異基因型深度大于5%的比對(duì)結(jié)果。

1.4 55K SNP芯片的QTL定位

待RIL群體及其親本的幼苗長(zhǎng)到一葉一心期時(shí)，用北京天根生化科技有限公司生產(chǎn)的植物基因組DNA提取試劑盒(DP320)提取DNA。用濃度為1%的瓊脂糖凝膠電泳和GelDoxXR凝膠成像系統(tǒng)對(duì)提取的DNA進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，檢測(cè)合格后的DNA樣品利用55K SNP芯片進(jìn)行基因分型。根據(jù)基因型數(shù)據(jù)的檢出率、最小等位基因頻率(minor allele frequency，MAF)、雜合率等指標(biāo)對(duì)樣品和標(biāo)記進(jìn)行基本質(zhì)控(quality control，QC)。樣品QC標(biāo)準(zhǔn)：DQC>0.82，檢出率≥85%、雜合率≤10%。標(biāo)記QC標(biāo)準(zhǔn)：轉(zhuǎn)換類型(Conversion Type)為聚高分辨率(Poly High Resolution)、檢出率≥90%、MAF≥4%、雜合率≤10%、等位基因數(shù)=2。對(duì)經(jīng)過QC的基因型數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)記位點(diǎn)篩選，只保留親本基因型純合且有差異的位點(diǎn)。利用JoinMap 4.0的Kosambi函數(shù)構(gòu)建遺傳圖譜，將遺傳重組率相同的標(biāo)記劃分到同一個(gè)Bin圖譜中。用QTL IciMapping 4.0軟件的完備區(qū)間作圖法(inclusive composite interval mapping，ICIM)進(jìn)行QTL檢測(cè)，染色體步長(zhǎng)是0.1 cM，逐步回歸概率為<0.001，尋找LOD值>2.5的QTL，計(jì)算出每個(gè)QTL的遺傳貢獻(xiàn)率和加性效應(yīng)。

1.5 多態(tài)性SSR標(biāo)記的篩選

根據(jù)BSR-Seq的分析結(jié)果和小麥55K SNP芯片的檢測(cè)結(jié)果，推斷染色體上差異SNP標(biāo)記分布數(shù)目最多、密度最大的區(qū)域?yàn)橘F協(xié)3號(hào)中抗條銹病基因所在的位置。之后根據(jù)Graingenes數(shù)據(jù)庫中目標(biāo)區(qū)域已知的22個(gè)SSR標(biāo)記(https://wheat.pw.usda.gov/)以及利用PrimerServer(http://202.194.139.32/PrimerServer/)在線設(shè)計(jì)的103個(gè)SSR標(biāo)記進(jìn)行標(biāo)記多態(tài)性的篩選。SSR標(biāo)記由南京金斯瑞生物科技有限公司合成。上述標(biāo)記首先在親本和抗、感池間進(jìn)行篩選，獲得的多態(tài)性標(biāo)記在RIL群體中進(jìn)行驗(yàn)證，最終獲得6個(gè)與目標(biāo)基因緊密連鎖的多態(tài)性SSR標(biāo)記 (表1)。

表1 6個(gè)多態(tài)性SSR標(biāo)記的引物信息Table 1 Primer information of six SSR markers

實(shí)驗(yàn)采用10.0 μL PCR反應(yīng)體系，包括模板DNA(80.0 ng·μL)1.0 μL，上、下游引物各(10 μmol·L)1.0 μL，2×Taq pcr mix 5.0 μL，ddHO 2.0 μL。PCR反應(yīng)程序：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性45 s，退火溫度視不同引物而定，退火30 s，72℃延伸1 min，35個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。用8.0%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè)，銀染顯色后觀察拍照。

1.6 數(shù)據(jù)分析

用Excel軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用SPSS軟件進(jìn)行單因素方差分析和相關(guān)性分析。定位到的QTL側(cè)翼標(biāo)記的物理位置和候選基因的相關(guān)信息通過小麥多組學(xué)網(wǎng)站(http://202.194.139.32)查詢；在Graingenes數(shù)據(jù)庫查找已經(jīng)報(bào)道的QTL側(cè)翼標(biāo)記或基因信息，并與國際小麥基因組測(cè)序聯(lián)盟(IWGSC，http://www.wheatgenome.org/)的中國春參考序列進(jìn)行比對(duì)，獲得它們的物理位置；從小麥多組學(xué)網(wǎng)站獲得中國春的參考基因組注釋信息。用基于R語言的繪圖包ggplot2(https://ggplot2.tidyverse.org/)和Mapchart 2.32(https://www.wur.nl/en/show/Mapchart.htm)進(jìn)行QTL峰值示意圖和染色體遺傳圖譜的繪制。

2 結(jié)果與分析

2.1 RIL群體及其親本成株期條銹病抗性的鑒定結(jié)果

對(duì)227個(gè)RIL群體及其親本在3個(gè)環(huán)境下進(jìn)行成株期條銹病抗性鑒定。結(jié)果表明，3個(gè)環(huán)境下RIL群體條銹病表型數(shù)據(jù)均呈連續(xù)分布，群體中抗、感株系的材料個(gè)數(shù)比值接近1∶1。方差分析結(jié)果(表2)顯示，環(huán)境對(duì)條銹病的發(fā)生有顯著影響。3個(gè)環(huán)境間的相關(guān)系數(shù)在 0.337～0.569之間，18GY、19GY與19CD的相關(guān)系數(shù)均較低，原因可能是四川地區(qū)的條銹病小種以CYR34為主，田間流行頻率高于貴州地區(qū)，病害更嚴(yán)重(表3)。

表2 3個(gè)環(huán)境下條銹病表型數(shù)據(jù)的單因素方差分析Table 2 ANOVA for the phenotypic data of stripe rust in RIL population under three environments

表3 3個(gè)環(huán)境下RIL群體條銹病反應(yīng)型的相關(guān)性分析Table 3 Correlation analysis of stripe rust infection type in RIL population under three environments

2.2 混池轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(BSR-Seq)結(jié)果

2.2.1 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量控制分析

對(duì)親本池和抗、感池分別進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，結(jié)果(表4)表明，原始數(shù)據(jù)包含144 240 863個(gè)reads，質(zhì)控后數(shù)據(jù)有139 976 742個(gè)reads，有效率為96.37%～98.11%，GC含量為57.00%～ 58.27%，質(zhì)量值Q20在98.16%～98.36%之間，Q30在94.41%～94.88%之間。

2.2.2 差異SNP的數(shù)目和位置

利用RIL群體的BSR-Seq分析結(jié)果，在小麥全基因組中共鑒定到277個(gè)與條銹病抗性關(guān)聯(lián)的高置信度SNP或Indel。其中，2AS染色體末端上的SNP數(shù)目最多，為258個(gè)，占全部SNP總數(shù)的93.1%，有8個(gè)差異SNP位于2AL、3BL、4BS、5AL和6BS染色體上，有11個(gè)差異SNP未被定位在染色體上。因此，推測(cè)目標(biāo)基因位于2AS染色體末端的12.0～59.0 Mb區(qū)間。

2.3 遺傳圖譜構(gòu)建結(jié)果

利用小麥55K SNP芯片對(duì)227個(gè)RIL群體及其親本進(jìn)行全基因組基因分型。對(duì)于雜合率大于10%的群體株系進(jìn)行了過濾，去除了23個(gè)樣品DNA，剩余有效基因型樣本數(shù)為204個(gè)。在約53 000個(gè)SNP中，有16 155個(gè)SNP在兩個(gè)親本之間具有多態(tài)性，過濾后剩余15 559個(gè)SNP，其中14 486個(gè)SNP有物理位置。利用Joinmap 4.0構(gòu)建遺傳連鎖圖譜時(shí)，剔除不連鎖的分子標(biāo)記，最終用于作圖的標(biāo)記數(shù)為6 364個(gè)。構(gòu)建的遺傳連鎖圖譜覆蓋了小麥21條染色體(圖1和表5)，圖譜總長(zhǎng)度為4 363.9 cM，標(biāo)記密度為1.5 cM。其中，3A染色體的長(zhǎng)度最長(zhǎng)(333.0 cM)，6A染色體的長(zhǎng)度最短(33.5 cM)。2A染色體的標(biāo)記密度最大，為3.2 cM，其遺傳圖譜長(zhǎng)度為258.3 cM。

從小麥A、B、D三個(gè)基因組來看，B基因組上的標(biāo)記數(shù)最多，為2 744個(gè)，占總標(biāo)記數(shù)的 43.1%，D基因組上的標(biāo)記數(shù)最少，為1 083個(gè)，占總標(biāo)記數(shù)的17.0%；從小麥七個(gè)同源群來看，第二同源群的標(biāo)記數(shù)最多，為1 313個(gè)，占總標(biāo)記數(shù)的20.6%，第六同源群的標(biāo)記數(shù)最少，為513個(gè)，占總標(biāo)記數(shù)的8.1%；從小麥21條染色體看，平均每條染色體上有303個(gè)標(biāo)記，其中2A染色體上的標(biāo)記數(shù)最多，為828個(gè)，占總標(biāo)記數(shù)的 13.0%，6A染色體上的標(biāo)記數(shù)最少，為48個(gè)，占總標(biāo)記數(shù)的0.7%(表5)。

表4 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)產(chǎn)出質(zhì)量情況Table 4 Quality of RNA-Seq data

每條染色體內(nèi)的黑、灰色代表標(biāo)記所在的位置，顏色越深表明該位置的標(biāo)記數(shù)越多；白色代表沒有連鎖標(biāo)記的區(qū)間。

2.4 抗條銹病QTL的定位結(jié)果

根據(jù)小麥55K SNP芯片的基因型數(shù)據(jù)和條銹病表型鑒定數(shù)據(jù)，利用QTL IciMapping 4.0進(jìn)行條銹病抗性QTL的定位。結(jié)果共檢測(cè)到7個(gè)抗條銹病QTL，分別分布在1B(1)、2A(2)、2D(1)、5A(2)和6B(1)染色體上，其中可在3個(gè)環(huán)境中被檢測(cè)到，其位于2AS染色體0.00～2.47 cM的遺傳區(qū)間內(nèi)，物理區(qū)間為15.87～31.89 Mb(16.02 Mb)，其3年的LOD值變化范圍為9.79～14.62，標(biāo)記區(qū)間為AX-108824773～AX-111675237，可解釋的表型變異率為17.07%～34.59%，是一個(gè)穩(wěn)定的主效QTL(表6)。、、和僅在19CD環(huán)境下檢測(cè)到，LOD值變化范圍為2.79～ 6.65，可解釋的表型變異率為4.48%～11.58%。僅在18GY環(huán)境下檢測(cè)到，LOD值為 3.62，可解釋的表型變異率是5.50%。僅在19GY環(huán)境下檢測(cè)到，LOD值為 3.39，可解釋的表型變異率為7.29%。除的加性效應(yīng)來自母本Avocet S外，其他6個(gè)QTL的加性效應(yīng)均來自父本貴協(xié)3號(hào)。

2.5 多態(tài)性引物的篩選結(jié)果

根據(jù)QTL定位結(jié)果和轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，在2AS染色體的目標(biāo)區(qū)段內(nèi)設(shè)計(jì)了103對(duì)SSR標(biāo)記引物，同時(shí)從GrainGenes數(shù)據(jù)庫上選擇了該區(qū)段內(nèi)已報(bào)道的22對(duì)SSR標(biāo)記引物。利用這125對(duì)標(biāo)記引物對(duì)親本和抗、感池進(jìn)行多態(tài)性標(biāo)記篩選，最終獲得6個(gè)與抗條銹病位點(diǎn)緊密連鎖的SSR標(biāo)記，分別為Xcfd36、Xwmc382、hls-2A-04、hls-2A-17、hls-2A-18和hls-2A-103，這些SSR標(biāo)記在親本和抗、感池中的篩選結(jié)果如圖2所示。進(jìn)一步在RIL群體中隨機(jī)選取40個(gè)株系材料進(jìn)行驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)這些標(biāo)記均能較好地區(qū)分抗、感株系(圖3)，因此可用于進(jìn)一步的圖譜加密。

將6個(gè)多態(tài)性SSR標(biāo)記在RIL群體中的基因分型結(jié)果與55K SNP芯片檢測(cè)結(jié)果整合，利用QTL IciMapping 4.0軟件重新進(jìn)行連鎖分析，并用Mapchart V2.3.0重新繪制2AS染色體的遺傳圖譜(圖5)。綜合3個(gè)環(huán)境的結(jié)果表明，被定位到2AS染色體1.70～4.11cM的遺傳區(qū)間，標(biāo)記區(qū)間為hls-2A-103～AX-108824773，對(duì)應(yīng)的物理區(qū)間為15.87～18.91 Mb(3.04 Mb)。說明抗條銹病位點(diǎn)的定位區(qū)間從16.02 Mb縮小到3.04 Mb的物理區(qū)間內(nèi)(表7)。

表5 RIL群體的21條染色體圖譜長(zhǎng)度及SNP標(biāo)記密度Table 5 Mapping length and SNP marker density on the 21 chromosomes of RIL population

表6 3個(gè)環(huán)境下檢測(cè)到的抗條銹病QTLTable 6 QTLs for stripe rust resistance detected under three environments

G：貴協(xié)3號(hào)；A：Avocet S；R：抗病池；S：感病池。

2.6 候選基因預(yù)測(cè)分析

根據(jù)上述結(jié)果，貴協(xié)3號(hào)中的抗條銹病位點(diǎn)被定位于2AS染色體15.87～ 18.91 Mb的物理區(qū)間范圍內(nèi)。利用小麥多組學(xué)網(wǎng)站與中國春2.0版本進(jìn)行比對(duì)，識(shí)別小麥基因ID、注釋及相應(yīng)序列。結(jié)果在上述區(qū)間內(nèi)共預(yù)測(cè)到13個(gè)候選基因(表8)，其中TraesCS2A02 G042400.1與抗病蛋白(NBS-LRR)相關(guān)，TraesCS2A02G040300.1與糖基轉(zhuǎn)移酶相關(guān)，TraesCS2A02G041200.1與谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶相關(guān)。

3 討 論

3.1 抗條銹病基因的遺傳定位

本研究利用BSR-seq技術(shù)，將貴協(xié)3號(hào)抗條銹病位點(diǎn)初步定位于2AS染色體12.0～59.0 Mb的物理區(qū)間內(nèi)(約47.0 Mb)；而利用小麥55K SNP芯片則將定位到更小的物理區(qū)間(約16.02 Mb)，該區(qū)間包含在BSR-seq的定位區(qū)間內(nèi)，這說明55K SNP芯片技術(shù)的定位結(jié)果更加精確。

目前，在2AS染色體上已報(bào)道的抗條銹病基因有、、、和。其中，來源于硬粒小麥Wollaro，來源于美國軟紅粒小麥Pioneer 26R61。是從人工小麥滲入系CH7086中定位到的苗期抗條銹病基因，其抗性來源于彭提卡偃麥草。的抗病性來源于普通小麥品種中麥175。推測(cè)與、、和不同。來源于偏凸山羊草()，是一個(gè)苗期抗病基因，攜帶該基因的單基因系表現(xiàn)為高感，研究發(fā)現(xiàn)，載體品種Trident對(duì)CYR34小種表現(xiàn)為高感；但通過田間觀察發(fā)現(xiàn)，另一個(gè)載體品種VPM1對(duì)CYR34小種表現(xiàn)為中抗，推測(cè)VPM1中可能不僅含有，還含有其他未知的抗條銹病基因。Wang等報(bào)道，和也是基因的等位變異。為了明確和之間的差異，我們利用的特定CAPS標(biāo)記URIC/LN2無法在貴協(xié)3號(hào)中擴(kuò)增出標(biāo)記目標(biāo)條帶，所以推測(cè)與不同。為了進(jìn)一步明確貴協(xié)3號(hào)中的與上述基因/QTL的相關(guān)性，還需要利用等位性檢測(cè)等手段進(jìn)行判定。

3.2 候選基因預(yù)測(cè)分析

目前，已經(jīng)克隆的多個(gè)小麥銹病基因均具有NBS-LRR結(jié)構(gòu)，例如小麥抗條銹病基因和，抗葉銹病基因和，以及抗稈銹病基因和等。本研究根據(jù)所在2AS染色體末端 15.87～18.91 Mb的區(qū)間范圍，共預(yù)測(cè)到13個(gè)候選基因，其中TraesCS2A02G042400.1與抗病蛋白(NBS-LRR)相關(guān)，推測(cè)其可能是的候選目的基因。TraesCS2A02G040300.1與糖基轉(zhuǎn)移酶相關(guān)，糖基轉(zhuǎn)移酶在植物抗病過程中不僅可通過修飾植物激素來調(diào)節(jié)植物抗病能力，還是植物超敏反應(yīng)抵御病害的必要因素。前人研究發(fā)現(xiàn)，UDP-糖基轉(zhuǎn)移酶(UGT)通過將小麥中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)糖基化為DON-3-葡萄糖苷(D3G)，有助于增強(qiáng)赤霉病的抗性。值得注意的是，TraesCS2A02G041200.1與谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶相關(guān)，而小麥抗赤霉病基因可編碼一種谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)，所以這兩個(gè)基因也有可能是的候選基因。后期我們將繼續(xù)開發(fā)新的標(biāo)記，擴(kuò)大遺傳作圖群體，構(gòu)建剩余雜合群體，實(shí)現(xiàn)抗條銹病位點(diǎn)的精細(xì)定位，進(jìn)一步縮減目標(biāo)區(qū)段，最終確定目標(biāo)基因。

A～F分別代表6個(gè)多態(tài)性標(biāo)記hls-2A-04、hls-2A-17、hls-2A-18、hls-2A-103、Xcfd36和Xwmc382，M代表標(biāo)記DL2000，GX3代表貴協(xié)3號(hào)，AVS代表Avocet S，1～40代表RIL群體內(nèi)隨機(jī)挑選的40個(gè)家系。

表7 利用開發(fā)的SSR標(biāo)記重新定位 Qyr.gaas.2ATable 7 Relocation of Qyr.gaas.2A using the developed SSR markers

表8 候選區(qū)間內(nèi)差異SNP的小麥基因功能注釋Table 8 Functional annotation of wheat genes with differential SNPs in candidate intervals