潘 偉，陽澤春，林 森

（重慶市榮昌區(qū)中醫(yī)院，重慶 402460）

補陽還五湯載于《醫(yī)林改錯》，由黃芪、當歸、赤芍、地龍、川芎、紅花和桃仁組成。方中黃芪補益元氣，當歸活血通絡，赤芍、川芎、桃仁、紅花活血祛瘀，地龍通經(jīng)活絡、周行全身。主治中風之氣虛血瘀證，半身不遂，口眼?斜，語言謇澀，口角流涎，下肢痿廢，小便頻數(shù)，遺尿不禁［1］。

近年來，中藥配方顆粒劑作為一種新型制劑，其以中醫(yī)藥理論和傳統(tǒng)經(jīng)方為指導，在保持原湯劑的成分前提下，應用現(xiàn)代制藥工藝，將單味中藥飲片以水為提取溶劑，精制而成中藥配方顆粒劑，臨床根據(jù)需要組方入藥。由于其使用、儲存、攜帶方便等優(yōu)勢越來越受到臨床醫(yī)生及患者的青睞［2］。但是由于二者存在單煎和共煎的區(qū)別，中藥配方顆粒劑自上市以來備受爭論，爭論焦點在于中藥配方顆粒劑是否真的能取代傳統(tǒng)湯劑，中藥配方顆粒劑與傳統(tǒng)湯劑在化學成分及藥效學上是否等效［3-4］。

為論證二者藥效學的一致性，科研工作者們做了許多研究，得出的結果也不盡相同。在臨床療效觀察方面，傳統(tǒng)湯劑與配方顆粒劑療效層次不齊［5-12］，方劑組成不同，二者療效上也不盡相同。在含量測定方面，有研究發(fā)現(xiàn)，金銀花［13］、連翹［14］和三七［15］等單味傳統(tǒng)飲片和配方顆粒劑化學成分含量相當，而黃芪［16］、地龍［17］、獨活［18］和虎杖［19］等傳統(tǒng)飲片的有效成分含量明顯高于配方顆粒劑。在復方的傳統(tǒng)湯劑和配方顆粒劑方面，配方顆粒劑有高于傳統(tǒng)湯劑的（比如厚樸三物湯）［20］，有低于傳統(tǒng)湯劑（比如大承氣湯）［21］，也有和傳統(tǒng)湯劑相當?shù)模ū热缢木訙?2］。

為了進一步研究中藥配方顆粒劑與傳統(tǒng)湯劑在特定化學成分含量上是否具有一致性，本實驗以補陽還五湯為研究對象，選取方中赤芍的主要成分芍藥苷作為研究對象。采用HPLC測定補陽還五湯配方顆粒劑和傳統(tǒng)湯劑中芍藥苷的含量，分析比較其含量的差異，為補陽還五湯傳統(tǒng)湯劑和配方顆粒劑臨床療效一致性評價提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

儀器。美國Agilent 1260高效液相色譜儀及其化學工作站，包括四元梯度泵，DAD檢測器，自動進樣器，METTLER TOLEDO XP205、AL204型電子天平；SB-5200DTDN型超聲清洗器；UP超純水機。

試劑。所用甲醇為色譜純（德國默克公司生產(chǎn)），水為超純水，其他試劑均為分析純。

對照品。芍藥苷（批號 110736-201943）購自中國食品藥品檢定研究院，含量95.1%。

實驗材料。中藥飲片由重慶市榮昌區(qū)中醫(yī)院提供（黃芪，批號：201001-02；當歸，批號：200301-14；赤芍，批號：201201-03；地龍，批號：200401-05；川芎，批號：200801-17；紅花，批號：201001-09；桃仁，批號201105-05），中藥配方顆粒劑購自甲、乙、丙三個廠家。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性

色譜柱：ORBAXSB-AqC18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-水-乙酸（25∶75∶0.2）；檢測波長2﹕30nm；流速1.0mL/min；柱溫30℃；運行時間30min；進樣量20μL。芍藥苷出峰時間在18：30min左右，色譜峰理論塔板數(shù)為7783，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取芍藥苷對照品約10mg，加甲醇溶解并制成0.2 mg/mL的溶液即得對照品溶液。

2.3 補陽還五湯配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑溶液的制備

配方顆粒劑樣品溶液。根據(jù)前期處方來源，調劑不同廠家（廠家甲、乙、丙）生產(chǎn)的補陽還五湯配方顆粒劑（黃芪40g、當歸6g、赤芍12g、地龍10g、川芎12g、紅花10g、桃仁12g），組方成補陽還五湯，加80℃～100℃水攪拌使溶解，冷卻后加水稀釋至1L，得配方顆粒樣品溶液，過濾，備用。

傳統(tǒng)湯劑樣品溶液。按照臨床湯劑煎煮方法，稱取等當量藥材，加8倍量水（約至液面3cm）浸泡30min，煎煮2次，每次大火煎5min，然后轉為溫火慢煎30min，過濾，盡可能的榨干湯汁，合并煎液，加水定容至1 L，得傳統(tǒng)湯劑樣品，過濾，備用。

2.4 方法學考察

線性關系考察：精密量取芍藥苷對照品10.24mg，加甲醇溶解稀釋至50mL，得到對照品溶液。吸取對照品溶液2，5，10，15，20，25μL注入到色譜儀中，記錄峰面積。以峰面積（A）為縱坐標、芍藥苷進樣量（C）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程A=1314.5C-7.8881，r=0.99（n=6）。結果芍藥苷進樣量在0.3895～4.8691μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：取同一對照品溶液，重復進樣6次，每次進樣20μL，記錄峰面積。峰面積結果的RSD為0.8%（n=6），表明儀器的精密性良好。

重現(xiàn)性試驗：取傳統(tǒng)湯劑樣品6份，依法制備供試品溶液并測定含量，結果分別為：165.72、164.44、164.58、163.42、163.96、164.55mg/劑。傳統(tǒng)湯劑中芍藥苷平均含量為164.45 mg/劑，RSD為0.47%（n=6），表明方法重現(xiàn)性良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，室溫放置12h，每隔2h進樣20μL，記錄峰面積。峰面積結果的RSD為1.2%（n=6），表明供試品溶液在12h內穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗：

傳統(tǒng)湯劑供試液的配置：稱取等當量藥材，加水（約至液面3cm）浸泡30min，煎煮2次，每次大火煎5min，然后轉為溫火慢煎30min，過濾，合并煎液，加水稀釋至1000mL，得到傳統(tǒng)湯劑供試品，濃度為0.165mg/mL。

標準品溶液的配置：精密量取芍藥苷對照品約10mg，加少量甲醇溶解并用流動相稀釋至50mL，得到的標準品濃度約為0.2mg/mL。

加樣回收率測定：精密吸取上述供試液1mL，加入標準品溶液1mL，混勻，過濾。按照色譜條件測定峰面積，計算回收率和RSD。結果見表1。6次測試樣品回收率在97.01%～101.73%，平均回收率為99.42%，RSD為1.72%。

表1 芍藥苷加樣回收試驗結果 （n=6）

2.5 樣品含量測定

取對照品溶液和不同供試品溶液，各進樣20L，讀取峰面積，按外標法計算含量。結果如表2所示。補陽還五湯傳統(tǒng)湯劑中芍藥苷含量為164.58mg/劑，三家配方顆粒劑芍藥苷含量分別為126.19mg/劑，110.68mg/劑和48.09mg/劑。

表2 樣品測定結果

3 討 論

3.1 流動相的選擇

查閱相關文獻［23］及結合預實驗，我們最終選取甲醇-水-乙酸（25∶75∶0.2）作為流動相，柱溫30℃等度洗脫。在該體系下，芍藥苷色譜峰峰形好，對稱性高，背景干擾小。

3.2 傳統(tǒng)湯劑和配方顆粒劑質量評價

從表3樣品含量測定結果來看，同一批藥品的含量差異不大，這表明傳統(tǒng)湯劑煎煮工藝及配方顆粒劑制劑生產(chǎn)工藝均較為穩(wěn)定，本實驗選取的中藥飲片品質較為穩(wěn)定。從芍藥苷含量測定結果來看，配方顆粒劑芍藥苷含量遠低于傳統(tǒng)湯劑，不同廠家生產(chǎn)的配方顆粒劑，芍藥苷含量也具有很大的差別。造成差異的原因可能在于各個生產(chǎn)企業(yè)的標準不一樣。2021年4月，國家藥典委員會出臺了《關于執(zhí)行中藥配方顆粒國家藥品標準有關事項的通知》，發(fā)布了首批160個中藥配方顆粒國家藥品標準，并于2021年11月正式執(zhí)行。配方顆粒劑國家標準的出臺，將進一步規(guī)范了中藥配方顆粒劑的生產(chǎn)和使用，其品質將會得到大幅度提升。

補陽還五湯化學成分復雜，僅選取了其中特定化學成分—芍藥苷進行了測定，初步評價了傳統(tǒng)湯劑和配方顆粒劑在有效成分含量上的差異，為進一步評價二者臨床療效差異提供了基礎，為配方顆粒劑在臨床上的使用提供了依據(jù)，具有較強的臨床實際指導意義，同時也為配方顆粒劑的進一步開發(fā)和改進提供了較好的數(shù)據(jù)和參考。但補陽還五湯為中藥復方，各組分之間以協(xié)同作用發(fā)揮療效，僅以芍藥苷含量這個化學成分指標仍較難評價孰優(yōu)孰劣，同時本研究采用的樣本量偏少，沒有基于相同來源的飲片和配方顆粒劑進行比較二者成分的差異。因此在后續(xù)的研究中，必須擴大樣本量的同時再結合臨床應用研究才能進行全面系統(tǒng)的比較。隨著現(xiàn)代制藥技術的發(fā)展，不斷推動中藥劑型的改革，也是對中藥湯劑的臨床療效提出的新挑戰(zhàn)，今后臨床工作中還需要進一步評價有效成分和中藥臨床療效之間的關系，探討配方顆粒劑和傳統(tǒng)湯劑之間的療效比較，以便更好的推動傳統(tǒng)中藥的現(xiàn)代化發(fā)展，讓其更好的服務于患者。