申 婷，董云龍，王夢欽，徐 達(dá)，嚴(yán)勝柒，張?jiān)品澹?/p>

（1.云南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，昆明 650500；2.生物能源持續(xù)開發(fā)利用教育部工程中心，昆明 650500）

農(nóng)業(yè)生產(chǎn)對(duì)氣候生態(tài)條件的依賴性強(qiáng)，氣候條件不僅決定作物的分布和品質(zhì)的形成［1］，且會(huì)改變農(nóng)作物的適宜性區(qū)劃［2，3］。中國是獼猴桃資源最為豐富的國家［4］，也是獼猴桃的主要產(chǎn)地，栽培面積和產(chǎn)量均居世界第一。到2011 年，僅陜西省獼猴桃栽培面積和產(chǎn)量就分別達(dá)到50 303 hm2和735 748 t［5］。在野生狀態(tài)下，獼猴桃多分布于濕潤區(qū)和半濕潤區(qū)的常綠闊葉林、常綠落葉混交林和針闊混交林，具有喜濕潤陰冷、喜陽懼烈陽的特性［6］。長期的林下生境，致使獼猴桃形成了復(fù)雜的溫度、光照互作關(guān)系及在這種關(guān)系下的光抑制敏感特征［7-9］。張指南等［10］研究表明，獼猴桃植株不耐高溫，35 ℃或以上的環(huán)境溫度會(huì)使葉片發(fā)生灼傷。Allan 等［11］研究表明，遮光率達(dá)30%~40%時(shí)，能提高獼猴桃果實(shí)的產(chǎn)量和品質(zhì)，但遮光率高于55%時(shí)反而對(duì)獼猴桃有害，適當(dāng)遮陰能顯著提高獼猴桃葉片的光合速率。原寒等［12］的研究也表明，不同獼猴桃品種對(duì)光照度的適應(yīng)性存在較大差異，高光強(qiáng)會(huì)引發(fā)獼猴桃光合機(jī)構(gòu)的損傷，且中華獼猴桃的光強(qiáng)適應(yīng)性一般高于美味獼猴桃。同時(shí)，獼猴桃植株也不耐低溫，近年來極端低溫天氣時(shí)有發(fā)生，低溫導(dǎo)致獼猴桃園遭遇凍害［13］。特別是葉片，由于其組織熱量較小，易受到冷凍壓力的影響，且葉片組織直接暴露于光照下，活細(xì)胞內(nèi)致死性冷凍的風(fēng)險(xiǎn)要比其他器官高［14，15］。因此，尋找適宜的獼猴桃栽培條件成為獼猴桃栽培產(chǎn)業(yè)亟待解決的問題。

近年來，葉綠素?zé)晒夥治黾夹g(shù)作為研究光合作用的重要手段之一，對(duì)研究植物葉片對(duì)光能的吸收、傳遞、耗散以及對(duì)外界脅迫的響應(yīng)等具有重要作用［3，16］。對(duì)植物葉綠素?zé)晒獾难芯浚煽焖?、?zhǔn)確地檢測植物光合生理狀態(tài)、對(duì)脅迫環(huán)境及生境條件的適應(yīng)性［17］。美味獼猴桃、中華獼猴桃、軟棗獼猴桃作為目前獼猴桃栽培中應(yīng)用較為廣泛的3 種類型［18］，其野生資源地理分布差異明顯，美味獼猴桃主要分布在中國西部，中華獼猴桃分布在東部，但更偏南，與美味獼猴桃的分布有交叉重疊，而軟棗獼猴桃主要分布區(qū)為東北、華中及陜西等地［19］，3 個(gè)栽培類型地理位置差異也很明顯。為此，本研究選取這3 種栽培類型的品種作為試驗(yàn)材料，經(jīng)短暫低溫、葉面遮陰、背部增光等處理措施，以葉綠素?zé)晒獬上窦夹g(shù)為手段，對(duì)其葉綠素?zé)晒鈪?shù)的差異及日變化進(jìn)行研究，以期為獼猴桃品種的選育、栽培、區(qū)劃研究提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

供試材料為3 個(gè)獼猴桃品種，分別為美味獼猴桃海沃德（Actinidia chinensisvar.deliciosa.cv.Hay?ward，Hw）、中華獼猴桃黃金果（Actinidia chinensiscv.Hort16A，Ho）及軟棗獼猴桃青海（Actinidia argutacv.Qinghai，Qh），栽培苗于2019 年冬季種植在云南師范大學(xué)生物能源持續(xù)開發(fā)利用教育部工程中心的溫室（E 102°45′—103°00′，N 24°42′—25°00′）。該地區(qū)年平均日照時(shí)數(shù)為2 200 h，年均降雨量為789.6 mm，年均溫度為14.7 ℃。所有栽培苗均在自然條件下進(jìn)行栽培，定期澆水。當(dāng)獼猴桃藤條長到30 片葉子以上，選取長勢良好、葉片完整、無病變、發(fā)育成熟的葉片進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

2020 年6 月26—28 日分別測定3 個(gè)品種成熟葉片的葉綠素?zé)晒鈪?shù)。試驗(yàn)共設(shè)置6 個(gè)處理，分別為空白對(duì)照（CK）、0 ℃冰水短暫處理（Low tempera?ture，LT）、葉片表 面遮陰［Shade，遮光率（23%±2%）］、葉片背面錫箔紙打光［Light，增光率（20%±2%）］、上午低溫短暫處理后中午及下午遮陰（Shade+LT）、上午低溫短暫處理后中午及下午打光（Light+LT）。早上6：30 將成熟葉片放入0 ℃冰浴2 h，其他葉片同時(shí)段分別進(jìn)行處理，遮陰葉片使用遮陰網(wǎng)進(jìn)行遮陰，打光葉片用錫箔紙對(duì)葉片背面進(jìn)行打光。所有成熟葉片將葉柄插入水中，間隔45 min噴灑適量水，防止葉片水分流失，所有試驗(yàn)均在溫室內(nèi)進(jìn)行，試驗(yàn)重復(fù)3 次。

1.3 葉綠素?zé)晒鈪?shù)

采用FC 800-O 型FluorCam 開放式葉綠素?zé)晒獬上裣到y(tǒng)（捷克PSI 公司）測定獼猴桃葉片的葉綠素?zé)晒鈪?shù)，測定時(shí)間為上午8：30、中午12：00、下午16：00。測定前進(jìn)行15 min 以上暗處理。測定初始熒光（F0）、最大熒光（Fm）、非光化學(xué)熒光淬滅系數(shù)（NPQ）以及光量子效率（Fv/Fm）等指標(biāo)。葉綠素含量測定采用日本柯尼卡美能達(dá)葉綠素測定儀SPAD-502 Plus測定，測定方法參照說明書。

1.4 數(shù)據(jù)處理

使 用Grphpad prism 8.0、Microsoft Excel 及PAST3 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 3 個(gè)品種獼猴桃葉片葉綠素?zé)晒鈪?shù)F0的日變化

2.1.1 3 個(gè)品種獼猴桃的葉綠素含量 圖1 和圖2為3 個(gè)品種獼猴桃的葉綠素含量及葉綠素?zé)晒鈪?shù)測定時(shí)的植株周邊溫度。從圖1 可以看出，海沃德的葉綠素含量較黃金果的略低，而青海的葉綠素含量高于海沃德和黃金果。上午、中午、下午測定時(shí)的溫度、光照度分別為（23±1）℃、（300±150）lx，（27±1）℃、（1 200±150）lx，（30±1）℃、（500±170）lx。因此，上午、中午、下午測定時(shí)的光照度為低、高、中。

圖1 不同品種獼猴桃葉片葉綠素SPAD 值

圖2 供試獼猴桃植株周邊上午、中午、下午的溫度變化

2.1.2 3 個(gè)品種獼猴桃葉片葉綠素?zé)晒鈪?shù)F0的分析 圖3 為3 個(gè)獼猴桃品種的葉綠素?zé)晒獾腇0成像圖，圖中測試葉片區(qū)域中紅色區(qū)域越大、色澤越偏紅，表明其熒光越高。圖3 顯示不同品種、不同處理獼猴桃葉片的F0熒光成像結(jié)果具有較大差異，表明獼猴桃葉片的F0不僅與品種有關(guān)，與測定時(shí)間、處理方式也有密切關(guān)系。為進(jìn)一步研究不同處理對(duì)3個(gè)獼猴桃品種葉綠素?zé)晒鈪?shù)F0的影響，對(duì)各處理、各品種的F0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并利用Grphpad prism 8.0 軟件進(jìn)行繪圖（圖4）。

圖3 3 個(gè)獼猴桃品種不同處理的F0葉綠素?zé)晒獬上窠Y(jié)果

比較3 個(gè)獼猴桃品種上午葉片正面對(duì)照組的F0及其葉綠素含量（圖4A、圖1），發(fā)現(xiàn)各品種的F0與葉綠素含量并不具有一致性，3 個(gè)品種的葉綠素含量為青海＞黃金果＞海沃德，其中黃金果與海沃德間不存在顯著差異（P＞0.05），但二者均與青海存在顯著差異（P<0.05）；而在對(duì)照組的F0中，海沃德與青海的F0較高，黃金果的F0較低，且前兩者間不存在顯著差異（P＞0.05），但與后者間存在顯著差異（P<0.05）。作為葉綠素?zé)晒夥治龅幕A(chǔ)，F(xiàn)0是PSⅡ（光系統(tǒng)Ⅱ）反應(yīng)中心完全開放時(shí)的熒光產(chǎn)量，在植物適宜生長環(huán)境下，F(xiàn)0恒定在一定范圍，大小與葉綠素濃度有關(guān)［20］。結(jié)果表明，試驗(yàn)地環(huán)境并非3 個(gè)獼猴桃品種的最適宜環(huán)境。3 個(gè)品種的野生基原植物分屬中華獼猴桃、美味獼猴桃和軟棗獼猴桃，其地理分布存在很大差異［19］，反映出各基原植物在其長期演化過程中形成了其獨(dú)特適應(yīng)性，與試驗(yàn)地昆明存在一定的差異。

圖4 不同品種獼猴桃葉片初始熒光F0值的日變化

圖4A 顯示，上午的低溫處理組中海沃德、黃金果及青海葉片正面的F0間均無顯著差異（P＞0.05）；遮陰處理組中海沃德與黃金果間不存在顯著差異（P＞0.05），但與青海間均存在顯著差異（P<0.05）；低溫遮陰處理組中，3 個(gè)品種間均存在明顯差異。結(jié)果表明，3 個(gè)品種對(duì)低溫、遮陰及其組合的響應(yīng)不一致，在環(huán)境適應(yīng)性上存在差異。

在中午的測量中（圖4B），與上午相比，對(duì)照組中海沃德葉片正面的F0下降，而黃金果和青海的F0上升，表明隨中午溫度、光照的升高，3 個(gè)獼猴桃品種的光合作用機(jī)構(gòu)都有一定程度的損傷。至下午（圖4C），對(duì)照組中海沃德的F0與中午的基本持平，黃金果的F0有所上升，而青海的F0回落，且較上午的F0低。F0反映的是處于最低激發(fā)態(tài)下葉綠素分子所吸收的光能，可從3 個(gè)途徑釋放所吸收的能量而回到基態(tài)，包括光化學(xué)反應(yīng)、熱耗散、熒光釋放［16］。當(dāng)植物受到環(huán)境脅迫致使光合作用機(jī)構(gòu)受到損傷，F(xiàn)0會(huì)發(fā)生變化，F(xiàn)0增加意味著光合作用機(jī)構(gòu)受到損傷，如隨后F0降低則表明葉片損傷的光合作用機(jī)構(gòu)能以熱耗散增加而得到修復(fù)［21，22］。結(jié)果表明，在溫度、光照升高條件下，海沃德、青海以熱耗散的方式對(duì)損傷光合作用機(jī)構(gòu)進(jìn)行修復(fù)；黃金果的損傷會(huì)進(jìn)一步加深，但這種損傷并非不可逆，雖然黃金果下午的F0有所升高，但與中午的F0間差異不明顯。試驗(yàn)結(jié)論表明，獼猴桃對(duì)低溫處理后的修復(fù)能力與葉片的葉綠素含量具一定的相關(guān)性。因此，在獼猴桃的抗性品種選育及抗性材料篩選時(shí)，可將葉片中葉綠素含量的高低作為一個(gè)指標(biāo)考慮。

由圖4A 可知，上午經(jīng)短暫低溫處理后，與對(duì)照相比，2 個(gè)獼猴桃品種葉片正面的F0均有增高，其中海沃德的升高不明顯，而黃金果升高較明顯，與對(duì)照呈顯著差異（P<0.05）。至中午，海沃德的F0比對(duì)照高，而黃金果和青海的F0比對(duì)照低，但海沃德與對(duì)照間無顯著差異，而黃金果、青海與其同時(shí)段的對(duì)照間差異顯著（P<0.05）（圖4B）。至下午，2 個(gè)獼猴桃品種海沃德、黃金果的F0變化趨勢與中午的變化趨勢一致（圖4C），青海的F0稍高于對(duì)照，但二者差異不顯著。表明3 個(gè)品種盡管其光合機(jī)構(gòu)有損傷，但均能以熱耗散的方式而修復(fù)［21，22］，且修復(fù)能力與其葉綠素含量有關(guān)，黃金果與青海的葉綠素含量較高（圖1）。魏樺［23］利用電導(dǎo)率評(píng)價(jià)法對(duì)不同獼猴桃資源的抗寒性進(jìn)行評(píng)價(jià)的結(jié)果為海沃德屬高抗品種，而黃金果是中抗品種，與本研究結(jié)果不同，可能是其他因素不同導(dǎo)致的。獼猴桃葉片由于組織熱量較小、保護(hù)結(jié)構(gòu)單一，對(duì)冷害的敏感性要高于其他器官［14，15］，且休眠狀態(tài)下的抗性往往要高于生長活躍狀態(tài)。

對(duì)低溫遮陰處理組進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)上午海沃德葉片正面的F0與對(duì)照相比顯著下降，黃金果與青海的F0顯著升高。而在中午、下午的測定中，與上午相應(yīng)的低溫遮陰處理組相比，海沃德雖有上升，但上升幅度不明顯；而黃金果、青海的F0下降，且與上午相應(yīng)處理間差異明顯，但中午、下午間差異不明顯。表明低溫遮陰處理后，經(jīng)中午、下午的高溫、高光強(qiáng)環(huán)境后，雖然海沃德的損傷一直延續(xù)，但這種情況并沒有加深，說明海沃德經(jīng)過低溫、高溫、高光強(qiáng)生境后，遮陰能在一定程度上緩解其損傷。結(jié)果同時(shí)表明，遮陰處理后，不管經(jīng)中午、下午的高溫、高光強(qiáng)，黃金果和青海都能以熱耗散的形式緩解光合機(jī)構(gòu)的損傷。遮陰不僅有利于提高3 個(gè)獼猴桃品種的光合效率，同時(shí)也有助于緩解溫度、光照、低溫對(duì)其葉片光合機(jī)構(gòu)的損傷。國內(nèi)外的諸多研究均表明，適當(dāng)遮陰能顯著提高獼猴桃葉片的光合速率及提高獼猴桃的產(chǎn)量、質(zhì)量［11，14］，與本試驗(yàn)的結(jié)果相同，同時(shí)還表明在非適應(yīng)條件下，遮陰會(huì)降低非適宜環(huán)境對(duì)獼猴桃葉片的損傷。因此，在獼猴桃栽培過程中，如發(fā)生低溫、高溫、高光強(qiáng)等環(huán)境脅迫時(shí)，可采用遮陰以避免進(jìn)一步受害。

從圖3 可以看出，在對(duì)照組中，海沃德葉片背面所顯現(xiàn)熒光的紅色明顯，其次是黃金果，而青海的較弱，與前文所述試驗(yàn)地并非3 個(gè)品種的適宜地一致。表明就試驗(yàn)地昆明而言，獼猴桃品種海沃德不適宜在這里生長；同時(shí)經(jīng)中午高溫、高光強(qiáng)后，背部打光處理有助于黃金果和青海2 個(gè)品種光合機(jī)構(gòu)的損傷修復(fù)。因此，在經(jīng)歷低溫、高溫、高光強(qiáng)等環(huán)境脅迫時(shí)，除采用葉片正面的遮陰處理外，采用葉片背部打光處理，在一定程度上也有助于避免脅迫的加劇。

圖4D 顯示，上午對(duì)照組的3 個(gè)獼猴桃品種葉片背面的F0存在差異，黃金果最高，青海次之，海沃德最低，且黃金果、青海的F0與海沃德間存在顯著差異（P<0.05），而黃金果與青海間無顯著差異。經(jīng)低溫處理后，3 個(gè)品種的F0均發(fā)生不同程度的降低，其中只有黃金果低溫處理的F0與對(duì)照差異顯著，表明低溫處理對(duì)獼猴桃葉片背面F0的影響沒有葉片正面的影響大，這可能與獼猴桃葉片的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)具有一定的相關(guān)性，獼猴桃葉片的角質(zhì)層薄，柵欄細(xì)胞層少，一般為2 層，海綿細(xì)胞多。這也是強(qiáng)光照會(huì)降低獼猴桃光合效率，適當(dāng)遮陰有助于獼猴桃光合效率提高的根本原因。

由圖4D 可知，背面打光處理后，在上午測定時(shí)段，海沃德及黃金果的F0與對(duì)照間差異顯著（P<0.05）；雖然青海的F0升高，但與對(duì)照間無顯著差異。低溫背面打光處理的F0變化與背面打光處理的F0變化一致。至中午、下午，隨著溫度、光照的提高，3個(gè)獼猴桃品種的F0均發(fā)生變化，但大部分處理組與對(duì)照間并無明顯差異，表明背面打光在一定程度上可緩解低溫處理對(duì)葉片光合機(jī)構(gòu)的損傷。F0的統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果（圖4D、E、F）與上述熒光成像的分析結(jié)論相一致。葉綠素?zé)晒獬上褡鳛橐环N能直觀反映植物光合生理狀態(tài)、對(duì)環(huán)境脅迫及生境條件適應(yīng)性的檢測手段［17］，從圖像與數(shù)據(jù)分析的高度吻合性可直接利用圖像分析技術(shù)來進(jìn)行植物生長及其對(duì)環(huán)境適宜性的判定。目前，已廣泛用于植物的光合效率評(píng)價(jià)、突變體篩選、表型組研究等領(lǐng)域［24］，隨著遙感技術(shù)、數(shù)字農(nóng)業(yè)的發(fā)展，葉綠素?zé)晒獬上窦夹g(shù)有了更為廣泛的運(yùn)用前景。

2.2 3 個(gè)品種獼猴桃葉片正面葉綠素?zé)晒鈪?shù)Fv/Fm和NPQ 的變化

2.2.1 3 個(gè)品種獼猴桃葉片正面葉綠素?zé)晒鈪?shù)

Fv/Fm分析 圖5 中數(shù)值反映測試獼猴桃葉片的外界脅迫及熱耗散情況（最大坐標(biāo)值分別為1.00、0.60、0.75）。Fv/Fm是反映植物PSII 光化學(xué)的最大量子效率，用于植物脅迫檢測［25，26］。Fv/Fm在正常范圍值為0.74~0.83，非脅迫條件下該參數(shù)很少變化，但外界的任何類型脅迫都會(huì)導(dǎo)致PSII 損壞（通常稱為光抑制），從而導(dǎo)致Fv/Fm降低，該參數(shù)常用來指示環(huán)境的脅迫程度或環(huán)境脅迫對(duì)光合作用機(jī)構(gòu)的損傷程度［27］。

圖5 顯示，不同品種、不同處理獼猴桃葉片正面的Fv/Fm具有較大差異，與品種、測定時(shí)間、處理方式密切相關(guān)。上午測定中，對(duì)照組3 個(gè)獼猴桃品種間Fv/Fm差異不明顯。中午，對(duì)照組3 個(gè)獼猴桃品種的Fv/Fm相對(duì)上午黃金果上升，海沃德略下降，青海變化不明顯。下午，對(duì)照組中海沃德的Fv/Fm略低于正常范圍值，青海在正常范圍內(nèi)，而黃金果相對(duì)中午回落，且在3 個(gè)時(shí)段中Fv/Fm最低。結(jié)果表明，在溫度、光照升高的條件下，海沃德、青海葉片受到的光抑制得到部分修復(fù)；黃金果能承受的溫度、光照異于其他2 個(gè)品種，反映出3 個(gè)品種在環(huán)境脅迫下光抑制存在一定差異。

低溫處理組中，上午經(jīng)過短暫低溫處理后與對(duì)照組相比，海沃德和青海的Fv/Fm升高較明顯，黃金果的Fv/Fm略有降低。至中午，海沃德和青海的Fv/Fm急劇下降，但黃金果的Fv/Fm呈上升趨勢，3 個(gè)品種與其同時(shí)段的對(duì)照間差異明顯。表明隨溫度、光照的增強(qiáng)，海沃德和青海受到短暫低溫后，光抑制加劇，可能由于在短暫低溫后凍害造成反應(yīng)機(jī)制受損。但黃金果光抑制降低，說明在一定的溫度、光強(qiáng)下，不同品種間光抑制響應(yīng)不同。至下午，3個(gè)品種的Fv/Fm變化趨勢與其相應(yīng)的對(duì)照組差異明顯；與中午的變化趨勢相反，海沃德和青海的Fv/Fm上升，黃金果的Fv/Fm略有降低，與上午相應(yīng)低溫處理的變化相比呈下降趨勢。遮陰處理組中，3 個(gè)品種的Fv/Fm變化趨勢與低溫處理組一致，但下午有所差異。3 個(gè)獼猴桃品種的Fv/Fm變化趨勢有差異，與不同品種間對(duì)溫度及光強(qiáng)的適應(yīng)性有關(guān)，黃金果的高光合效率需要一定的高光照，這也許是黃金果需種植于氣溫較高的區(qū)域；而對(duì)于海沃德和青海，適度光照有助于光合作用損傷的修復(fù)（圖5）。

經(jīng)低溫遮陰處理后，上午3 個(gè)獼猴桃品種葉片正面的Fv/Fm與對(duì)照相比略升高。而中午、下午的測定中，與上午相應(yīng)處理組相比，海沃德和青海的Fv/Fm雖有下降，但變化并不明顯，而黃金果無明顯變化。表明低溫遮陰處理后，經(jīng)中午、下午的高溫、高光強(qiáng)環(huán)境后，雖然3 個(gè)獼猴桃品種光抑制一直延續(xù)，但并沒有加深趨勢（圖5）。此結(jié)果與F0的分析結(jié)果相一致，說明在發(fā)生低溫、高溫、高光強(qiáng)等環(huán)境脅迫時(shí)，可采用遮陰以避免進(jìn)一步的危害。上述結(jié)果對(duì)3 個(gè)品種獼猴桃在試驗(yàn)地昆明的種植有一定的理論指導(dǎo)意義。

圖5 不同品種獼猴桃葉片正面的非光化學(xué)熒光淬滅NPQ和光量子效率Fv/Fm的日變化

2.2.2 3 個(gè)品種獼猴桃葉片正面葉綠素?zé)晒鈪?shù)

NPQ的分析NPQ是植物的一個(gè)光保護(hù)過程，在光照下，葉綠素的散熱速率常數(shù)迅速增加，激發(fā)能可反映PSⅡ反應(yīng)中心以熱形式耗散掉過剩光能的比例，避免植物光合機(jī)構(gòu)受損傷［28］。NPQ主要由熱耗散引起，用其估算熱能耗散掉的光能從而降低光合反應(yīng)中心的光能分配。在環(huán)境脅迫下，NPQ的增加對(duì)降低光抑制有重要作用［29］。

圖5 顯示，上午對(duì)照組和低溫處理組3 個(gè)品種間NPQ差異不明顯；遮陰處理組中海沃德、黃金果及青海的NPQ差異明顯，其大小順序?yàn)楹Ｎ值?青海>黃金果，海沃德和青海的NPQ與對(duì)照組相比明顯上升，黃金果無明顯差異；低溫遮陰處理組中，海沃德和黃金果的NPQ差異明顯，兩者與青海無明顯差異。結(jié)果表明，3 個(gè)獼猴桃品種的葉綠素含量不同，葉綠素的散熱速率常數(shù)呈不同程度的增加，由于光保護(hù)機(jī)制不同，低溫、遮陰及其組合處理的熱耗散程度不同。

至中午（圖5），對(duì)照組中黃金果的NPQ上升，海沃德的NPQ下降，青海的NPQ變化不明顯；表明隨中午溫度、光照的變化，青海應(yīng)對(duì)脅迫環(huán)境的光保護(hù)機(jī)制優(yōu)于海沃德和黃金果；在低溫處理組中，海沃德和黃金果的NPQ與同期對(duì)照組差異明顯，且較上午NPQ略高，但青海的NPQ較上午低。結(jié)果表明，隨著溫度、光照變化，不同品種通過增加NPQ以降低光抑制。在遮陰和低溫遮陰處理組中，3 個(gè)獼猴桃品種的NPQ與同時(shí)段的對(duì)照組差異明顯，且大部分處理高于對(duì)照組，但較上午呈下降趨勢。

至下午（圖5），短暫低溫、遮陰、低溫遮陰處理組中，3 個(gè)品種的NPQ與同時(shí)段的對(duì)照組差異明顯，其NPQ都高于對(duì)照組，且大部分處理與中午、上午相比呈下降趨勢。F0和Fv/Fm的結(jié)果分析表明，在獼猴桃栽培過程中，如發(fā)生低溫、高溫、高光強(qiáng)等環(huán)境脅迫時(shí)，可采用遮陰來避免進(jìn)一步的為害。

2.3 3 個(gè)品種獼猴桃葉片背面葉綠素?zé)晒鈪?shù)Fv/Fm和NPQ 的變化

從圖6 中可以看出，3 個(gè)獼猴桃品種不同處理不同時(shí)段集中在Fv/Fm變化，而NPQ沒有明顯變化。說明在葉片背面不通過增加NPQ來降低光抑制，可能通過其他途徑來減輕光抑制對(duì)植株的影響。

圖6 不同品種獼猴桃葉片背面的非光化學(xué)熒光淬滅NPQ和光量子效率Fv/Fm的日變化

上午對(duì)照組3 個(gè)品種的Fv/Fm存在差異，青海最高，黃金果次之，海沃德最低，且黃金果與海沃德、青海間存在明顯差異。經(jīng)低溫處理后，雖然3 個(gè)品種的Fv/Fm均發(fā)生不同程度的變化，與對(duì)照組相比，海沃德的Fv/Fm上升，青海的Fv/Fm下降，黃金果的Fv/Fm無明顯變化。表明短暫低溫處理對(duì)3 個(gè)品種葉片背面的Fv/Fm也造成了脅迫，且脅迫程度高于葉片正面。背面打光處理后，在上午測定時(shí)段，3 個(gè)品種的Fv/Fm與對(duì)照呈明顯差異；雖然青海的Fv/Fm升高了，但低于對(duì)照組，黃金果與對(duì)照組相比明顯降低，海沃德差異不明顯。

至中午、下午，在低溫處理組中，與上午相比3個(gè)獼猴桃品種的Fv/Fm均發(fā)生降低，除黃金果外都高于同時(shí)段的對(duì)照組；背面打光及低溫背面打光處理組中，3 個(gè)品種與同時(shí)段的對(duì)照組相比，除低溫背面打光處理組黃金果的Fv/Fm偏低外，其他的Fv/Fm變化較??；與上午相比，黃金果的Fv/Fm呈明顯上升趨勢，海沃德和青海的Fv/Fm呈下降趨勢。隨溫度、光照的提高，3 個(gè)品種的Fv/Fm均發(fā)生變化，但海沃德和青海的Fv/Fm各處理組大體上明顯高于對(duì)照組，說明不同處理一定程度上能緩解海沃德和青海的光抑制作用，但黃金果的光抑制加深，表明不同品種可采取適當(dāng)?shù)娜~背低溫及打光來降低光抑制對(duì)葉片的損壞，但整體變化表明，過高溫度、光強(qiáng)會(huì)加重光抑制。

3 討論

葉綠素?zé)晒鈪?shù)可作為植物應(yīng)對(duì)外界脅迫能力的參考指標(biāo)。初始熒光F0是PSⅡ（光系統(tǒng)Ⅱ）反應(yīng)中心完全開放時(shí)的熒光產(chǎn)量，F(xiàn)0是熒光分析的基礎(chǔ)，在植物適宜生長環(huán)境下，F(xiàn)0恒定在一定范圍，其大小與葉綠素濃度有關(guān)。葉綠素是植物光合作用的基礎(chǔ)，其含量的變化對(duì)光合作用有重要影響，含量下降會(huì)影響總?cè)~綠素?zé)晒馑剑?0］。本研究中雖然3 個(gè)品種的葉綠素含量與F0變化不具有一致性，但當(dāng)受到低溫脅迫時(shí)不同品種間的修復(fù)能力與葉片的葉綠素含量有關(guān)，且3 個(gè)品種的F0在不同處理不同時(shí)段的變化幅度不同，總體上為海沃德>黃金果>青海。

光是影響植物通過光合作用獲取能量的重要因素之一，植物在長期的進(jìn)化過程中，演化形成了物種的獨(dú)特光照適應(yīng)性［31］，植物形態(tài)和生理上可對(duì)不同光照條件作出可塑性反應(yīng)［32］。葉片是對(duì)環(huán)境敏感性較高的器官［33］。植物葉片葉綠素?zé)晒鈪?shù)能夠快速反應(yīng)植物受到外界脅迫的響應(yīng)。在高輻照度下，光合裝置吸收過多的光能導(dǎo)致葉綠體含有葉綠素的反映中心失活或受損［34-36］。因此，光合活性受到光的抑制［37，38］。許大全等［21］研究表明，F(xiàn)0降低表明熱耗散增加，植物光合機(jī)構(gòu)的損傷能以熱耗散的方式修復(fù)。本研究中，經(jīng)過短暫低溫處理后，3 個(gè)獼猴桃品種均能以熱耗散的方式修復(fù)，但修復(fù)能力跟葉綠素含量有關(guān)。遮陰處理中，海沃德在經(jīng)過低溫、高溫、高光強(qiáng)環(huán)境后，遮陰能在一定程度緩解損傷；葉片背面打光在一定程度上也可緩解低溫處理對(duì)葉片光合機(jī)構(gòu)的損傷，該結(jié)果與李西文等［39］、榮立蘋等［40］、閆小莉等［41］的研究結(jié)果一致。

分布在溫帶地區(qū)的許多植物都具有感知非凍結(jié)低溫并增強(qiáng)防凍的能力，這種現(xiàn)象稱為冷適應(yīng)［42］。短暫低溫引起葉片氣孔部分關(guān)閉的氣孔限制和葉肉細(xì)胞光合活性下降的非氣孔限制，從而導(dǎo)致植物光合速率降低［43］。任何脅迫都會(huì)導(dǎo)致PSΠ 的失活損傷，即光抑制［44］。Fv/Fm常被作為判斷是否發(fā)生光抑制的標(biāo)準(zhǔn)，其降低是光合作用光抑制的顯著特征［45］。本研究中，3 個(gè)獼猴桃品種葉片正背面不同處理的Fv/Fm值均低于正常范圍，但在不同處理組中，3 個(gè)品種的Fv/Fm變化程度為黃金果>海沃德>青海。隨溫度、光照增加，對(duì)照組的Fv/Fm呈上升趨勢，上升程度為青海>海沃德>黃金果，表明不同品種間的適應(yīng)性存在差異；在遮陰及低溫遮陰處理組中，3個(gè)品種與對(duì)照組相比，呈先升高后降低的趨勢，變化幅度較小，說明遮陰能對(duì)光抑制起到一定的削弱作用。對(duì)于葉片背面，不同品種可采取適當(dāng)?shù)娜~背低溫及打光來降低光抑制對(duì)葉片的損壞。這一結(jié)果與李清雪等［46］研究結(jié)果相似。

本研究中，NPQ整體呈下降趨勢，在不同時(shí)段不同處理的變化幅度為海沃德>黃金果>青海。NPQ和Fv/Fm的協(xié)同變化，在Fv/Fm增加（降低）的大部分處理中，NPQ都增加（降低），表明光合效率的提高是以提高NPQ（熱耗散）為代價(jià)，可能是獼猴桃栽培中易發(fā)生葉片灼傷的原因，當(dāng)其光合作用機(jī)構(gòu)發(fā)生損傷時(shí)，增加NPQ是緩解光合作用機(jī)構(gòu)損傷的途徑之一，獼猴桃光合作用機(jī)構(gòu)損傷的修復(fù)依賴于NPQ（熱耗散）。

由于獼猴桃分布全國，品種較多，不同品種間對(duì)環(huán)境的適應(yīng)機(jī)能存在差異，因此，運(yùn)用植物葉片葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力學(xué)參數(shù)指標(biāo)進(jìn)行不同品種抗逆性評(píng)價(jià)時(shí)，需根據(jù)品種各自特征，結(jié)合植物生理特性以及其他抗逆性指標(biāo)，綜合分析獼猴桃抗性育種及不同獼猴桃品種的地域栽培。