沈丹丹 吳群 沈川 姜學(xué)美,*

(1 重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測研究院，重慶 401121；2 重慶市藥物過程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶 401121；3 重慶綦江區(qū)人民醫(yī)院，重慶 401420)

經(jīng)皮給藥制劑已成為除口服制劑、注射給藥制劑外臨床最常用制劑，包括透皮制劑和皮膚局部外用制劑，皮膚局部外用制劑旨在作用于皮膚或皮膚組織產(chǎn)生局部治療作用的藥物，其中常用的多為半固體制劑，如軟膏、乳膏、凝膠等。2018年7月11日，藥品審評(píng)中心(CDE)發(fā)布了《新注冊(cè)分類的皮膚外用仿制藥的技術(shù)評(píng)價(jià)要求(征求意見稿)》[1]，與FDA的多個(gè)局部外用制劑生物等效性評(píng)價(jià)指南草案[2-3]及Shah博士[4]提出的局部藥物分類系統(tǒng)(topical drug classification system,TCS)的評(píng)價(jià)思路基本一致，即處方(Q1)、處方用量(Q2)和微觀結(jié)構(gòu)特性(Q3)與參比制劑(reference listed drug,RLD)均相同時(shí)可采用體外研究替代體內(nèi)研究，對(duì)尚未啟動(dòng)一致性評(píng)價(jià)的皮膚局部外用制劑提出了研究方向，也是該類制劑未來一致性評(píng)價(jià)的趨勢(shì)。

曲安奈德益康唑乳膏(triamcinolone acetonide and econazole nitrate cream)是由Janssen公司開發(fā)的復(fù)方乳膏劑，商品名為Pevaryl?/Pevisone?，上市國家為英國和法國，規(guī)格為含硝酸益康唑10mg/g與曲安奈德1mg/g，主要用于治療皮炎、濕疹等，原研未進(jìn)口銷售。本品國內(nèi)有16家生產(chǎn)企業(yè)，已由廠家A地產(chǎn)化(商品名：派瑞松?，國藥準(zhǔn)字H20000454)，根據(jù)說明書[5]，其處方組成與原研產(chǎn)品在歐洲上市(Pevaryl?/Pevisone?)[6-7]的處方組成(Q1)相同。目前雖然我國尚未專門發(fā)布皮膚局部外用制劑RLD的選擇規(guī)定，但按照我國發(fā)布的《普通口服固體制劑參比制劑選擇和確定指導(dǎo)原則》，RLD首選國內(nèi)上市的原研藥品。因此，本研究以地產(chǎn)化產(chǎn)品派瑞松?為參比制劑，逆向解析處方組成(Q1)及關(guān)鍵功能性輔料苯甲酸(防腐劑)和依地酸二鈉(金屬離子螯合劑)的用量(Q2)，考察微觀結(jié)構(gòu)特性(Q3)，并與國產(chǎn)仿制藥的代表產(chǎn)品邦力?比較差異，為國內(nèi)生產(chǎn)企業(yè)開展該品種一致性評(píng)價(jià)提供研究思路，從而達(dá)到與參比制劑的Q1、Q2及Q3等同，實(shí)現(xiàn)以體外研究替代以臨床為終點(diǎn)的復(fù)雜的生物等效性研究。

1 儀器與試驗(yàn)材料

Waters e2695 高效液相色譜儀(Waters corporation)；K51502653型電子天平(Sartorius AG)；光學(xué)顯微鏡(Olympus corporation)；AQUALAB 4TE高精度溫控型水活度測定儀(美國Decagon)；S220-K酸度計(jì)(Mettler Toledo)；苯甲酸對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100419-201703，含量99.9%)；依地酸二鈉(杭州利人藥業(yè)有限公司，批號(hào)20190207，含量101.0%)；曲安奈德益康唑乳膏(商品名：派瑞松?，廠家A，批號(hào)JKJOD80)；曲安奈德益康唑乳膏(商品名：邦力?，廠家B，批號(hào)：2019010)；己烷磺酸鈉、磷酸、四氫呋喃、四丁基氫氧化銨均為分析純，乙腈、異丙醇、甲醇為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 Q1分析

根據(jù)派瑞松?說明書[5]、邦力?說明書[8]、Pevisone?[7]、Pevaryl?[6]，由表可見(表1)，國內(nèi)仿制藥邦力?與派瑞松?、Pevisone?及Pevaryl?Q1均不一致，派瑞松?與Pevisone?Q1一致。

表1 Q1比較Tab.1 Comparison of Q1

2.2 Q2分析

2.2.1 依地酸二鈉的含量測定

(1)色譜條件

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(Agilent ZORBAX SB-C18，250 mm×4.6 mm，5 μm)，以0.66%四丁基氫氧化銨溶液(pH6.5)-乙腈(8.5:1.5)為流動(dòng)相A，以甲醇-水(9:1)為流動(dòng)相B，先以流動(dòng)相A等度洗脫，待EDTA-Cu絡(luò)合物峰洗脫完畢后立即按表2梯度洗脫；檢測波長254 nm；柱溫30℃；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣量50 μL。

(2) 溶液的配制

供試品溶液的配制：取本品約1.25 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加甲醇5 mL，超聲1 min使曲安奈德與硝酸益康唑溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，過濾，精密量取續(xù)濾液2 mL，置10 mL量瓶中，加入0.1%硫酸銅溶液1 mL，用水稀釋至刻度，搖勻。

對(duì)照品溶液的配制：取依地酸二鈉約25 mg，精密稱定，置20 mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度。精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加入0.1%硫酸銅溶液1 mL，用水稀釋至刻度，搖勻。

(3) 測定結(jié)果

結(jié)果表明(圖1)O，w派瑞松?中金屬螯合劑依地酸二鈉的含量為0.142%(W/W)，即含依地酸二鈉1.42 mg/g。邦力?未檢出依地酸二鈉。

2.2.2 苯甲酸的含量測定

(1) 色譜條件

辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(Luna C8，250 mm×4.6 mm，5 μm)，取己烷磺酸鈉0.94 g，加乙腈-異丙醇-水-85%磷酸(140:140:720:1)溶解并稀釋至1000 mL為流動(dòng)相A，取己烷磺酸鈉0.94 g，加甲醇-水-85%磷酸(900:100:1)溶解并稀釋至1000 mL為流動(dòng)相B，按表3梯度洗脫；檢測波長227 nm；柱溫40℃；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣量10 μL。

表3 苯甲酸測定法的洗脫梯度Tab.3 Gradient elution for the determination of benzoic acid

(2) 溶液的配制

供試品溶液的配制：取本品1.25 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加四氫呋喃2 mL，超聲1 min使溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

對(duì)照品溶液的配制：取苯甲酸對(duì)照品約10 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

(3) 測定結(jié)果

結(jié)果表明(圖2)，派瑞松?中防腐劑苯甲酸其處方用量為0.18%(W/W)，即含苯甲酸1.8 mg/g。邦力?未檢出苯甲酸。

2.3 Q3分析

2.3.1 藥用活性成分的晶型及粒度測定

取本品適量，置于載玻片上涂成薄層，覆以蓋玻片，注意防止氣泡進(jìn)入，立即采用光學(xué)顯微鏡在10×40倍下觀察活性成分的晶型與粒度，見圖3～4。結(jié)果表明，派瑞松?中活性成分為柱狀晶體，粒度為14.28 μm(D90)，而邦力?中活性成分為粗大柱狀晶體和針狀結(jié)晶的混合，粒度約為52.43 μm(D90)，說明兩種產(chǎn)品的活性成分均混懸于乳膏基質(zhì)中，但是粒度差異較大，派瑞松?中活性成分為粒度明顯小于邦力?。

2.3.2 乳滴粒度的測定

取本品適量，置于載玻片上涂成薄層，覆以蓋玻片，注意防止氣泡進(jìn)入，立即采用光學(xué)顯微鏡在10×40倍下觀察乳滴粒度(圖5～6)。結(jié)果表明，派瑞松?中乳滴粒度為5.71 μm(D90)，邦力?中乳滴粒度為2.55 μm(D90)，說明派瑞松?中乳滴粒度明顯大于邦力?。

2.3.3 水活度的測定

根據(jù)藥品審評(píng)中心郭滌亮等[9]的研究，皮膚局部外用制劑的微觀結(jié)構(gòu)特性還應(yīng)考察水活度指標(biāo)，以評(píng)價(jià)產(chǎn)品中游離水的含量。取本品各適量，置于密閉容器中，采用冷鏡露點(diǎn)法在25℃下測定，派瑞松?與邦力?水活度值分別為1.0062和0.9698。

2.3.4 pH的測定

取本品各適量，依法操作。派瑞松?與邦力?pH值分別為2.95和3.15，派瑞松?pH值更高。

3 討論

3.1 Q1與Q2的差異

根據(jù)《新注冊(cè)分類的皮膚外用仿制藥的技術(shù)評(píng)價(jià)要求(征求意見稿)》[1]，仿制藥與參比制劑的輔料在定性(Q1)和定量(Q2)上應(yīng)相同，輔料的濃度差異不應(yīng)超過±5%。本研究逆向解析派瑞松?與國產(chǎn)仿制藥邦力?Q1及Q2差異，結(jié)果表明兩者產(chǎn)品Q1和Q2均不一致。根據(jù)Pevaryl?英國說明書[6]公開的結(jié)果，Pevaryl?中苯甲酸的處方用量為2 g/kg(0.2%，g/g)，與Pevisone?法國說明書[7]公開的結(jié)果一致，本研究測得派瑞松?防腐劑苯甲酸處方用量為1.8 g/kg(0.18%，g/g)，而聶鶴云等[10]對(duì)派瑞松?中苯甲酸的含量測定結(jié)果為1.5 g/kg(0.15%，g/g)，由此可見，地產(chǎn)化產(chǎn)品派瑞松?與原研產(chǎn)品Pevaryl?及Pevisone?中苯甲酸的含量差異均超過±5%，說明Q2不同；根據(jù)Niazi[11]和Janssen公司申請(qǐng)的專利WO9619186[12]，依地酸二鈉的優(yōu)選處方用量為1 g/kg(0.1%，g/g)，本研究測得派瑞松?金屬螯合劑依地酸二鈉的處方用量1.4 g/kg(0.14%，g/g)，說明地產(chǎn)化產(chǎn)品派瑞松?與原研產(chǎn)品Pevaryl?的依地酸二鈉含量差異也超過±5%，說明Q2存在較大差異。根據(jù)藥品審評(píng)中心郭滌亮等[13]對(duì)皮膚局部外用仿制藥RLD選擇的考慮，其中指出對(duì)于皮膚局部外用制劑不同產(chǎn)地的原研產(chǎn)品在Q1和Q2存在差異，則可能導(dǎo)致產(chǎn)品Q3和產(chǎn)品安全性、有效性的差異。地產(chǎn)化產(chǎn)品派瑞松?與原研產(chǎn)品Q1相同但Q2不相同，說明派瑞松?不適宜作為本品一致性評(píng)價(jià)的RLD。

3.2 Q3的差異

根據(jù)顯微鏡觀察結(jié)果，地產(chǎn)化產(chǎn)品派瑞松?基質(zhì)內(nèi)藥用活性成分的晶體為柱狀晶體，而國內(nèi)仿制藥邦力?中為粗大柱狀晶體和針狀結(jié)晶的混合，派瑞松?中活性成分為粒度明顯小于邦力?，說明二者的微觀結(jié)構(gòu)不同，提示可能影響體外釋放行為，進(jìn)而影響藥物的生物等效性；派瑞松?中乳滴的粒徑明顯大于邦力?，說明使用的基質(zhì)性質(zhì)存在較大的差異；水活度測定結(jié)果表明，派瑞松?產(chǎn)品中水活度值高于邦力?，說明派瑞松?游離水更高。綜上表明，兩者產(chǎn)品Q3的差異可能是由于Q1和Q2不同引起的。

3.3 參比制劑的選擇

按照國家藥監(jiān)局關(guān)于發(fā)布化學(xué)仿制藥參比制劑遴選與確定程序的公告(2019年第25號(hào))，RLD遴選的順序依次為：國內(nèi)上市的原研藥品、經(jīng)審核確定的國外原研企業(yè)在中國境內(nèi)生產(chǎn)或經(jīng)技術(shù)轉(zhuǎn)移生產(chǎn)的藥品、未進(jìn)口原研藥品。但是對(duì)于皮膚局部外用制劑，尤其是半固體制劑的處方工藝很大程度上決定了藥物在皮膚上的釋藥性能，進(jìn)而影響藥物的安全性與有效性，因而皮膚局部外用制劑RLD的選擇尤為重要，通過科學(xué)有效的逆向工程手段確定RLD輔料的用量范圍和多個(gè)RLD之間的質(zhì)量對(duì)比，保證RLD的準(zhǔn)確性和唯一性，將有助于獲得微觀結(jié)構(gòu)特性的等同性，實(shí)現(xiàn)用體外研究替代體內(nèi)生物等效性研究的目的。本研究通過對(duì)地產(chǎn)化產(chǎn)品派瑞松?的Q1及Q2分析，說明不適宜作為曲安奈德益康唑乳膏一致性評(píng)價(jià)的RLD。原研公司Johnson&Johnson Consumer Inc.在全球范圍內(nèi)采用Pevaryl?(英國等)/Pevisone?(法國等)商品名上市曲安奈德益康唑乳膏，Q1比較發(fā)現(xiàn)，法國上市產(chǎn)品Pevisone?與國內(nèi)地產(chǎn)化產(chǎn)品派瑞松?(派瑞松?是Pevisone?的音譯中文名)的輔料種類完全相同，而英國上市產(chǎn)品Pevaryl?中加入了花香水作為香精。因此建議國內(nèi)生產(chǎn)企業(yè)采用Janssen-Cilag Limited在法國上市的Pevisone?作為本品一致性評(píng)價(jià)的RLD。

3.4 小結(jié)

國產(chǎn)仿制藥邦力?與地產(chǎn)化產(chǎn)品派瑞松?Q1和Q2明顯不一致，因而Q3也存在顯著性差異，進(jìn)一步推測邦力?與原研產(chǎn)品Pevisone?Q3差異可能更大，關(guān)于Q3如何影響本品體外釋放及體外透皮行為的差異還有待進(jìn)一步研究。