梁飛龍，鄧岳文

(廣東海洋大學(xué) 珍珠研究所，廣東 湛江 524025)

引 言

馬氏珠母貝(Pinctadafucatamartensii)又稱合浦珠母貝(Pinctadafucata)，是中國(guó)養(yǎng)殖海水珍珠的最主要珍珠貝，養(yǎng)殖區(qū)位于廣東、廣西和海南沿海地區(qū)，其中廣東和廣西沿海生產(chǎn)的海水珍珠又稱為南珠，雷州半島為主產(chǎn)區(qū)[1]。海水珍珠培育包括植核貝的養(yǎng)殖、手術(shù)前處理、切片和植核、手術(shù)后休養(yǎng)、育珠貝養(yǎng)殖和收獲珍珠等步驟[2]。尹立鵬等[3]進(jìn)行了貝齡對(duì)馬氏珠母貝育珠效果的影響研究、符韶等[4]比較了不同殼色系馬氏珠母貝育珠結(jié)果、IWAI等[5]研究了性別對(duì)育珠效果的影響，梁飛龍等[6]、鄧陳茂等[7]進(jìn)行了馬氏珠母貝手術(shù)前處理研究，翁雄等[8]、符韶等[9]、張博等[10]進(jìn)行了植核技術(shù)研究，ATSUMI等[11-12]、LI等[13]、王慶恒等[14]、鄧遠(yuǎn)球等[15]進(jìn)行了育珠貝養(yǎng)殖技術(shù)研究。馬氏珠母貝在植核時(shí)受到嚴(yán)重創(chuàng)傷，手術(shù)工具、珠核和移植小片消毒處理不規(guī)范會(huì)造成手術(shù)創(chuàng)口和移植小片感染，導(dǎo)致育珠貝術(shù)后大量死亡和影響移植小片形成珍珠囊分泌珍珠質(zhì)；手術(shù)季節(jié)關(guān)系到貝體植核時(shí)的生理狀況，從而影響到育珠貝成活率、留核成珠率和商品珠率。本研究比較了幾種常用抗生素對(duì)馬氏珠母貝手術(shù)工具、珠核和移植小片的處理技術(shù)，探討了手術(shù)季節(jié)對(duì)馬氏珠母貝植核效果的影響，為馬氏珠母貝珍珠培育提供了技術(shù)支持。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)貝：湛江市雷州覃斗鎮(zhèn)后洪村海區(qū)人工養(yǎng)殖的馬氏珠母貝“海選1號(hào)”群體，貝體殼形端正，鱗片銳利，閉殼有力，貝殼表面光潔。手術(shù)貝：貝齡2.0齡，殼高6.0～6.5 cm，經(jīng)適當(dāng)?shù)氖中g(shù)前處理，外套膜呈半透明。小片貝：貝齡1.0—1.5齡，殼高5.0～5.5 cm，生長(zhǎng)線明顯，殼內(nèi)表面珍珠層呈虹彩色或者銀白色。

珠核：直徑5.8～6.2 mm，淡水麗蚌貝殼研磨而成。

養(yǎng)殖籠具：休養(yǎng)籠為錐形籠，高20 cm，底徑35 cm，網(wǎng)徑2.0 cm×2.0 cm。育珠籠為片籠，長(zhǎng)72 cm，寬50 cm，網(wǎng)徑3.0 cm×3.0 cm，分為4隔，每隔裝貝7～8只。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)1，設(shè)立頭孢克肟、四環(huán)素、阿奇霉素和羅紅霉素4個(gè)實(shí)驗(yàn)組，分別使用500、1 000和1 500 mg/L的濃度浸泡手術(shù)工具和珠核，每90 min更換一次處理液，同時(shí)用相同濃度處理液滴加在移植小片上保養(yǎng)處理3—5 min，每濃度組設(shè)3個(gè)重復(fù)組，每重復(fù)組植核1 200只貝，評(píng)估抗生素種類和濃度對(duì)馬氏珠母貝育珠貝成活率、留核率和商品珠率的影響。

實(shí)驗(yàn)2，分別在2017年春季(4月6—7日)、夏季(6月6—8日)和秋季(10月6—8日)進(jìn)行植核育珠，春季、夏季和秋季各分3組進(jìn)行植核，每季植核6 000只貝。比較手術(shù)季節(jié)對(duì)育珠貝成活率、留核率和商品珠率的影響。

采取先送核后送片的方法進(jìn)行植核手術(shù)，每貝植入珠核2顆，植核位置為“左袋”和“右袋”[2]。完成植核手術(shù)的手術(shù)貝，按照每籠35～40只的密度腹部向上密排于錐形休養(yǎng)籠中，吊養(yǎng)于浮笩休養(yǎng)，吊養(yǎng)水深150～200 cm，每2—3 d檢查一次育珠貝的恢復(fù)狀況同時(shí)清除死亡的育珠貝，調(diào)整養(yǎng)殖密度。休養(yǎng)期結(jié)束后，將育珠貝移到片籠中進(jìn)行珍珠育成，每籠裝貝28～32只，吊養(yǎng)水深100～150 cm，按常規(guī)方法進(jìn)行育珠貝養(yǎng)殖管理。

育珠貝休養(yǎng)時(shí)間為23—26 d，育珠時(shí)間為10個(gè)月。

1.3 數(shù)據(jù)處理分析

育珠貝成活率、留核率和商品珠率計(jì)算方法如下：

(1)

(2)

(3)

參照珍珠分級(jí)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 18781-2008的規(guī)定，商品珍珠達(dá)到下列標(biāo)準(zhǔn)：珍珠形狀A(yù)3級(jí)以上，珍珠形狀近圓形、圓形和正圓形；珍珠光澤D級(jí)以上，反射光較弱、表面能照見物體；光潔度C級(jí)以上，有較小的瑕疵，肉眼易觀察到；珍珠層厚度D級(jí)以上，珍珠層厚度大于0.3 mm。

采用文獻(xiàn)資料的方法比較各實(shí)驗(yàn)組育珠指標(biāo)差異[16-17]，利用雙因素方差分析比較抗生素種類和濃度對(duì)育珠貝成活率、留核率和商品珠率的影響，如果影響顯著，用最小顯著極差法(LSR)進(jìn)行多重比較，差異的顯著水平設(shè)為P<0.05。利用單因素方差分析植核季節(jié)對(duì)育珠貝成活率、留核率和商品珠率的影響，如果影響顯著，用最小顯著差數(shù)(LSD)檢驗(yàn)進(jìn)行各處理組平均數(shù)的比較，差異的顯著水平設(shè)為P<0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 幾種常用抗生素對(duì)手術(shù)工具、珠核和移植小片的處理效果

幾種抗生素對(duì)馬氏珠母貝手術(shù)工具、珠核和移植小片處理的育珠貝成活率、留核率和商品珠率如表1所示，方差分析結(jié)果如表2所示。

表1 實(shí)驗(yàn)1各組合育珠性狀比較

2.1.1 幾種抗生素對(duì)馬氏珠母貝手術(shù)工具、珠核和移植小片處理的育珠貝成活率

從表2可見，雙因素方差分析顯示，不同抗生素處理組育珠貝成活率差異不顯著(P>0.05)，不同濃度處理組間差異顯著(P<0.05)，抗生素種類與濃度之間無(wú)交互效應(yīng)(P>0.05)。為了減少誤差，將互作變異合并到誤差項(xiàng)中重新對(duì)藥物種類、濃度進(jìn)行F檢驗(yàn)，結(jié)果表明不同抗生素處理的育珠貝成活率差異不顯著，因此對(duì)藥物濃度各水平之間作多重比較。結(jié)果顯示，濃度500 mg/L組育珠貝成活率最低(28.99%)，顯著低于1 500 mg/L(33.02%)和1 000 mg/L(31.53%)組，1 500 mg/L和1 000 mg/L組差異不顯著，因此適合使用1 000 mg/L和1 500 mg/L的抗生素對(duì)植核工具、珠核和移植小片進(jìn)行消毒處理。

2.1.2 幾種抗生素對(duì)馬氏珠母貝手術(shù)工具、珠核和移植小片處理的育珠貝留核率

從表2可見，抗生素種類與濃度交互作用效應(yīng)極顯著(P<0.05)，抗生素種類和濃度對(duì)育珠貝的留核率具有顯著影響，因此對(duì)水平組合的育珠貝留核率平均數(shù)進(jìn)行多重比較，結(jié)果如表3所示。從表3可見，濃度1 500 mg/L和1 000 mg/L頭孢克肟、四環(huán)素，以及1 500 mg/L阿奇霉素組育珠貝留核率顯著高于其他處理組合組(P<0.05)，其中濃度1 500 mg/L頭孢克肟、四環(huán)素和1 000 mg/L頭孢克肟組的育珠貝留核率差異不顯著，1 500 mg/L四環(huán)素和1 000 mg/L頭孢克肟、四環(huán)素，以及1 500mg/L阿奇霉素之間差異不顯著。因此，馬氏珠母貝植核工具、珠核和移植小片處理的抗生素第一選擇為頭孢克肟和四環(huán)素，濃度為1 500 mg/L和1 000 mg/L，第二選擇為1500 mg/L阿奇霉素。

表2 實(shí)驗(yàn)1抗生素種類和濃度對(duì)育珠貝成活率、留核率和商品珠率影響的方差分析

表3 各組合馬氏珠母貝育珠貝留核率平均數(shù)的多重比較結(jié)果

2.1.3 幾種抗生素對(duì)馬氏珠母貝植核工具、珠核和移植小片處理的育珠貝商品珠率

表2雙因素方差分析表明，不同抗生素種類和濃度處理的馬氏珠母貝育珠貝商品珠率差異顯著(P<0.05)，抗生素種類與濃度之間無(wú)顯著交互效應(yīng)(P>0.05)。為了減少誤差，將互作變異合并到誤差項(xiàng)中重新對(duì)藥物種類、濃度進(jìn)行F檢驗(yàn)，方差分析顯示抗生素種類和濃度對(duì)育珠貝商品珠率無(wú)顯著交互作用，利用LSR進(jìn)行育珠貝商品珠率多重比較，結(jié)果顯示頭孢克肟組的商品珠率最高(85.7%)，顯著高于其他抗生素處理組(P<0.05)，其次是阿奇霉素組(82.64%)和四環(huán)素組(80.96%)，兩者間差異不顯著(P>0.05)，羅紅霉素組(78.44%)顯著低于其他處理組(P<0.05)；濃度500 mg/L組的育珠貝商品珠率顯著低于1 500 mg/L組和1 000 mg/L組，1 500 mg/L和1 000 mg/L組差異不顯著。因此，馬氏珠母貝植核工具、珠核和移植小片消毒處理的合適抗生素為頭孢克肟、阿奇霉素和四環(huán)素，合適處理濃度為1 000 mg/L和1 500 mg/L。

2.2 季節(jié)對(duì)馬氏珠母貝植核育珠效果的影響

不同手術(shù)季節(jié)的馬氏珠母貝植核育珠結(jié)果如表4所示，不同季節(jié)手術(shù)的育珠貝成活率差異顯著(P<0.05)，秋季(10月)植核的育珠貝成活率最高(51.93%)，夏季(6月)植核的育珠貝成活率最低(29.33%)。不同季節(jié)植核的育珠貝留核率和商品珠率差異不顯著(P>0.05)。

表4 馬氏珠母貝不同季節(jié)植核育珠的結(jié)果

3 討論

3.1 幾種抗生素對(duì)馬氏珠母貝育珠效果的影響

根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)，抗生素分為四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、β-內(nèi)酰胺類和氨基糖苷類，四環(huán)素類抗生素是20世紀(jì)40年代末發(fā)現(xiàn)的廣譜抗生素，能夠抑制革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌的活性，具有抗炎、抗凋亡和神經(jīng)保護(hù)作用[18]。頭孢克肟為第三代頭孢菌素，屬β-內(nèi)酰胺類抗生素，對(duì)革蘭氏陰性菌具有強(qiáng)的抗菌活性，對(duì)呼吸道感染、尿路感染、耳鼻喉科感染具有顯著的療效[19]。阿奇霉素和羅紅霉素是大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，適用于敏感細(xì)菌引起的呼吸道、尿道、生殖道、皮膚和軟組織感染[20-22]。

植核育珠過(guò)程中，對(duì)珠核和移植小片進(jìn)行處理的作用是提高移植小片的活力，促進(jìn)移植小片細(xì)胞增殖快速形成珍珠囊細(xì)胞分泌珍珠質(zhì)，防止感染，促進(jìn)創(chuàng)口愈合，提高小片與珠核、組織與珠核的親和力，目的是提高育珠貝的成活率、留核成珠率和珍珠質(zhì)量[2,23-27]。例如，金啟增等[23]使用珍珠生長(zhǎng)激素浸泡移植小片，育珠期6個(gè)月的實(shí)驗(yàn)組育珠貝正圓珠率、白色珍珠比例和珠層厚度比對(duì)照組提高了9.28%、22.57%和52 μm。鄧陳茂等[2]指出，用3%聚乙烯吡咯烷酮(簡(jiǎn)稱PVP)或者1/5 000熒光素伊爾名諾R2或者0.2%三磷酸腺苷二鈉(ATP)海水溶液浸泡小片能夠顯著提高珍珠質(zhì)量，用1/50 000金霉素海水浸泡移植小片，同時(shí)用十萬(wàn)分之一的金霉素海水處理手術(shù)工具和珠核育珠效果更佳。王梅芳等[25]用匹配的處理液對(duì)小片和珠核處理的育珠貝脫核率為31%～32%，對(duì)照組為46.2%，育珠貝成活率和百貝收珠率顯著高于對(duì)照組。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，使用1 000 mg/L和1 500 mg/L的頭孢克肟、四環(huán)素和阿奇霉素對(duì)馬氏珠母貝手術(shù)工具、珠核和移植小片進(jìn)行處理，能夠顯著提高育珠貝的成活率、留核率和商品珠率。引起海洋貝類致病的細(xì)菌主要為革蘭氏陰性菌(G-)，是條件致病菌，通過(guò)改善養(yǎng)殖條件和使用合適的抗生素可以預(yù)防和治療條件致病菌引起的疾病[28-29]。溫崇慶等[30]從馬氏珠母貝手術(shù)創(chuàng)口分離到5個(gè)種的弧菌，其中4種為海水動(dòng)物常見致病菌，屬于條件致病菌。頭孢克肟對(duì)革蘭氏陰性菌抑制作用較強(qiáng)，而海水中主要致病細(xì)菌為革蘭氏陰性菌，因此頭孢克肟的處理效果最佳。四環(huán)素對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌的活性具有抑制作用，效果次之。阿奇霉素和羅紅霉素對(duì)革蘭氏陰性菌的抑制作用較弱，效果又次之。筆者認(rèn)為，利用合適濃度的抗生素對(duì)馬氏珠母貝手術(shù)工具中的開口針、通道針和送核器等進(jìn)行消毒處理，可以減少送核和送片過(guò)程中，工具對(duì)切口、通道和核位周圍組織的感染。其次，對(duì)珠核進(jìn)行消毒處理，能夠有效減少珠核從切口送到核位過(guò)程中，以及珠核到達(dá)核位后對(duì)貝體周圍組織的感染，并且經(jīng)消毒處理的珠核有利于移植小片在珠核表面增殖形成珍珠囊分泌珍珠質(zhì)。第三，抗生素可以抑制或殺滅移植小片上附著的病原微生物，因此經(jīng)消毒保養(yǎng)處理的移植小片能夠快速形成珍珠囊，提高育珠貝的商品珠率和珍珠質(zhì)量。

3.2 手術(shù)季節(jié)對(duì)馬氏珠母貝育珠效果的影響

手術(shù)季節(jié)與育珠貝養(yǎng)殖環(huán)境和植核母貝性腺發(fā)育水平密切相關(guān)，不同季節(jié)的海區(qū)環(huán)境條件如水溫、流速、海水渾濁度、餌料生物的豐度不同，其次不同季節(jié)的植核母貝生理狀態(tài)不同，導(dǎo)致季節(jié)影響到育珠效果。KY等[31]觀察到，秋季(水溫25.1～26.1 ℃)植核的珠母貝育珠貝45 d平均死亡率為1.2%、留核率91.1%，而春季(水溫28.1～29.4 ℃)植核的育珠貝死亡率為8.0%、留核率79.4%，后者育珠貝死亡率是前者的6倍多，留核率后者比前者低11.7%；KY等[31]認(rèn)為春季高溫和隨后夏季高水溫導(dǎo)致低溶氧，以及降水帶來(lái)的低比重和有毒有害藻類、細(xì)菌的大量繁殖是造成春季植核的育珠貝成活率和留核率比秋季低的主要原因。本實(shí)驗(yàn)表明，10月植核的育珠貝成活率(51.93%)顯著高于4月(32.37%)和6月(29.33%)植核的育珠貝，但成活的育珠貝留核率和和商品珠率差異不顯著。育珠貝的成活狀況與Ky研究結(jié)果相似。筆者認(rèn)為，6月至9月是雷州半島沿海高溫、暴雨和臺(tái)風(fēng)多發(fā)季節(jié)，水環(huán)境的溫度、鹽度急劇變化，影響了育珠貝手術(shù)后的恢復(fù)和存活。其次，餌料生物的組成和種類發(fā)生變化。第三，7月強(qiáng)勁的西南風(fēng)將水體攪混濁，影響育珠貝的呼吸和攝食。第四，10月后育珠貝的性腺發(fā)育水平低于春季和夏季，貝體處于比較適合植核的狀態(tài)。因此，4月和6月植核的育珠貝成活率、留核率和商品珠率比10月植核的育珠貝低。