劉艷紅 鄧霞飛 唐維 劉紅華 方智 張茜 劉澍秾 郭峰

鹽酸纈更昔洛韋是瑞士羅氏公司研發(fā)的口服抗巨細(xì)胞病毒感染藥物,2001 年5 月經(jīng)美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準(zhǔn)上市。適用于治療成人獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)患者的巨細(xì)胞病毒(CMV)視網(wǎng)膜炎；預(yù)防存在CMV 感染風(fēng)險(xiǎn)的實(shí)體器官移植患者的CMV感染［1-3］。鹽酸纈更昔洛韋是更昔洛韋的L-單纈氨酸酯,是更昔洛韋的前藥,提高了更昔洛韋的生物利用度近10 倍,故纈更昔洛韋片劑較注射用更昔洛韋優(yōu)勢明顯。該化合物在生物藥劑學(xué)分類上屬于生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)(BCS)Ⅲ類,其在水溶液中的溶解度具有pH 依賴性,隨pH 升高溶解度下降,在pH 4～6 范圍內(nèi)溶解度＞200 mg/ml,25℃且pH 7.0 時(shí)溶解度降至70 mg/ml,pH＜3.8 時(shí)穩(wěn)定性最好。片劑長期儲(chǔ)存過程中,易出現(xiàn)片子松散的情況,且有關(guān)物質(zhì)明顯增加［4-7］。本研究采用USP 40 版藥典相關(guān)方法對(duì)不同批次鹽酸纈更昔洛韋片萬賽維的相關(guān)質(zhì)量指標(biāo)進(jìn)行測定,分析不同批次檢驗(yàn)指標(biāo)是否存在差異,為臨床安全用藥提供依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 高效液相色譜儀(型號(hào)Waters e2695、2489UV/VIS 檢測器,Waters 公司),溶出試驗(yàn)儀(富科思FADT-1202RC 自動(dòng)溶出儀、FADT-1202QY 自動(dòng)取樣儀組成)。

1.2 試劑 鹽酸纈更昔洛韋(外購,純度為99.6%),萬賽維(外購,羅氏公司),甲醇(色譜純,默克公司),鹽酸(分析純,國藥集團(tuán)),三氟乙酸(色譜純,TEDIA公司)。

2 方法

2.1 含量測定方法 含量測定采用高效液相色譜法(HPLC 法)。

2.1.1 色譜柱 苯基硅烷鍵合膠為填充劑；流動(dòng)相：0.25%三乙胺溶液(取三乙胺2.5 ml,加水800 ml,用三氟乙酸調(diào)節(jié)pH至3,加水稀釋至1000 ml)-甲醇(93∶7)；流速：1.0 ml/min；檢測波長：254 nm；柱溫30℃；進(jìn)樣量：50 μl。

2.1.2 系統(tǒng)適用性溶液 取N-甲基纈更昔洛韋對(duì)照品適量,精密稱定,加0.001 mol/L 鹽酸溶液溶解并稀釋制成每1 ml 中約含1 μg 的溶液,搖勻,精密量取此溶液5 ml 與下述對(duì)照品儲(chǔ)備液15 ml,置50 ml 量瓶中,加0.001 mol/L 鹽酸溶液稀釋至刻度,搖勻,作為系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)溶液。取此溶液50 μl 注入液相色譜儀,記錄色譜圖,第2 個(gè)纈更昔洛韋差向異構(gòu)體峰與第1 個(gè)N-甲基纈更昔洛韋差向異構(gòu)體峰的分離度應(yīng)＞2。

2.1.3 對(duì)照品溶液 精密稱取鹽酸纈更昔洛韋對(duì)照品約26 mg,精密稱定,置100 ml 量瓶中,加0.001 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為對(duì)照品儲(chǔ)備液；精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液15 ml,置50 ml 量瓶中,加0.001 mol/L 鹽酸溶液稀釋至刻度,搖勻,作為對(duì)照品溶液。

2.1.4 供試品溶液 取本品20 片,精密稱定,研細(xì),精密稱取適量(約相當(dāng)于纈更昔洛韋450 mg),置100 ml 量瓶中,加0.001 mol/L 鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取續(xù)濾液3 ml,置200 ml 量瓶中,加0.001 mol/L 鹽酸溶液稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液。

2.1.5 測定法 精密量取供試品溶液和對(duì)照品溶液各50 μl,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖,按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算,即得。

2.2 有關(guān)物質(zhì)測定方法 有關(guān)物質(zhì)測定采用HPLC 法。

色譜柱：苯基硅烷鍵合膠為填充劑；流動(dòng)相：0.25%三乙胺溶液(取三乙胺2.5 ml,加水800 ml,用三氟乙酸調(diào)節(jié)pH 至3,加水稀釋至1000 ml)-甲醇(93∶7)；流速：1.0 ml/min；檢測波長：254 nm；柱溫30℃；進(jìn)樣量：50 μl。

對(duì)照品溶液：取含量測定項(xiàng)下的纈更昔洛韋對(duì)照品溶液作為對(duì)照品溶液。

樣品溶液：取本品細(xì)粉適量(約相當(dāng)于纈更昔洛韋45 mg),精密稱定,置100 ml 量瓶中,加0.001 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液作為供試品溶液。取供試品0.2 ml,置100 ml 量瓶中,加0.001 mol/L 鹽酸溶液稀釋至刻度,搖勻,作為對(duì)照溶液。

測定法：精密量取供試品溶液、對(duì)照溶液和對(duì)照品溶液各50 μl,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2 倍。按外標(biāo)法以纈更昔洛韋計(jì)算更昔洛韋和鳥嘌呤相當(dāng)于纈更昔洛韋標(biāo)示量的含量,以自身對(duì)照法計(jì)算未知雜質(zhì)的含量,應(yīng)符合規(guī)定。見表1。

表1 雜質(zhì)含量判定表

2.3.4 種溶出介質(zhì)配制方法

2.3.1 pH 1.0 鹽酸溶液配制方法 量取9 ml 濃鹽酸(37%)加水稀釋成1000 ml,即得。

2.3.2 pH 4.5 醋酸-醋酸鈉溶液配制方法 稱取醋酸鈉2.99 g,加冰醋酸1.596 ml,稀釋成1000 ml,即得。

2.3.3 pH 6.8 磷酸二氫鉀-氫氧化鈉溶液配制方法磷酸二氫鉀6.805 g,氫氧化鈉0.944 g,加水稀釋成1000 ml,即得。

2.3.4 溶出介質(zhì) 純化水為溶出介質(zhì)。

2.4 溶出曲線測定方法 取本品12 片,以溶出介質(zhì)900 ml 為溶劑,轉(zhuǎn)速為50 r/min,于5、10、15、30 min各取樣10 ml,濾過,精密量取續(xù)濾液1 ml,置25 ml 量瓶中,加0.1 mol/L 鹽酸溶液稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液；另取鹽酸纈更昔洛韋對(duì)照品約25 mg,精密稱定,置100 ml 量瓶中,加0.1 mol/L 鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取2 ml,置25 ml 量瓶中,加0.1 mol/L 鹽酸溶液稀釋至刻度,搖勻,作為對(duì)照品溶液；取上述兩種溶液,照紫外-可見分光光度法,在254 nm 波長處分別測定吸光度,計(jì)算各個(gè)取樣點(diǎn)的溶出量［8］。

3 結(jié)果

3.1 三批鹽酸纈更昔洛韋片萬賽維檢測結(jié)果 三批鹽酸纈更昔洛韋片萬賽維的含量、有關(guān)物質(zhì)及溶出度無明顯差異,批間均一性較好。見表2。

表2 三批鹽酸纈更昔洛韋片萬賽維檢測結(jié)果(%)

3.2 三批鹽酸纈更昔洛韋片萬賽維在不同介質(zhì)中的溶出曲線數(shù)據(jù) 依照溶出曲線的測定方法,分別測定鹽酸纈更昔洛韋片萬賽維在4 種不同溶出介質(zhì)中的溶出曲線,其溶出曲線對(duì)比顯示,三批鹽酸纈更昔洛韋片萬賽維在不同溶出介質(zhì)中的溶出曲線數(shù)據(jù)無明顯差異,批間均一性較好。見表3,表4,表5,表6。

表3 三批鹽酸纈更昔洛韋片萬賽維在pH 1.0 介質(zhì)中溶出曲線數(shù)據(jù)

表4 三批鹽酸纈更昔洛韋片萬賽維在pH 4.5 介質(zhì)中溶出曲線數(shù)據(jù)

表5 三批鹽酸纈更昔洛韋片萬賽維在pH 6.8 介質(zhì)中溶出曲線數(shù)據(jù)

表6 三批鹽酸纈更昔洛韋片萬賽維在水介質(zhì)中溶出曲線數(shù)據(jù)

4 討論

服用纈更昔洛韋后更昔洛韋的生物利用度在各種研究人群中是相似的。心臟、肝臟和腎臟移植患者根據(jù)腎臟功能調(diào)整方案口服纈更昔洛韋后機(jī)體更昔洛韋暴露量相似。僅在進(jìn)餐情況下,口服纈更昔洛韋450～2625 mg 與更昔洛韋AUC 成劑量比例關(guān)系。

4.1 吸收 纈更昔洛韋是更昔洛韋的前體藥物,能很好地從胃腸道吸收并快速在小腸壁和肝內(nèi)代謝成更昔洛韋。從纈更昔洛韋轉(zhuǎn)化來的更昔洛韋的絕對(duì)生物利用度大約60%。纈更昔洛韋的全身暴露少而且是一過性的,24 h 曲線下面積(AUC24)和峰濃度(Cmax)分別僅為更昔洛韋的1%和3%?？诜}酸纈更昔洛韋片450～2625 mg 的劑量與更昔洛韋AUC 的比例關(guān)系是在餐后情況下研究的。當(dāng)與食物同服900 mg 的鹽酸纈更昔洛韋片時(shí),以更昔洛韋測定的平均AUC24 和Cmax都增大,分別為30%和14%。建議鹽酸纈更昔洛韋片與食物同服。

4.2 分布 由于纈更昔洛韋迅速轉(zhuǎn)化成更昔洛韋,未測定鹽酸纈更昔洛韋的蛋白結(jié)合率。更昔洛韋的濃度在0.5 μg/ml 和51 μg/ml 以上時(shí)血漿蛋白結(jié)合率是1%～2%,靜脈給藥后更昔洛韋的穩(wěn)態(tài)分布容積是(0.680±0.161)/kg。

4.3 代謝 纈更昔洛韋快速水解成更昔洛韋；沒有發(fā)現(xiàn)其他的代謝產(chǎn)物?？诜未?000 mg 放射標(biāo)記的更昔洛韋后,在糞便或尿中檢測到的放射活性產(chǎn)物不超過1%～2%。

4.4 清除 口服鹽酸纈更昔洛韋片后,鹽酸纈更昔洛韋片清除的主要途徑是腎臟排泄,方式為腎小球?yàn)V過和腎小管主動(dòng)分泌更昔洛韋。更昔洛韋通過腎清除占全身清除的(81.5±22.0)%。

多項(xiàng)研究顯示［7,8］,鹽酸纈更昔洛韋片藥理作用明顯,作用機(jī)制較新穎,毒性低,不良反應(yīng)少,臨床療效顯著,患者依從性高,應(yīng)用安全。

綜上所述,通過對(duì)鹽酸纈更昔洛韋片萬賽維三批樣品相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,表明鹽酸纈更昔洛韋片萬賽維不同批次之間重現(xiàn)性較好,批間差異在可接受范圍內(nèi),各項(xiàng)指標(biāo)無明顯差異,是仿制藥品優(yōu)良的參比制劑,臨床上也可以放心使用。