鄧國(guó)強(qiáng)，范仲鑫，唐小明，劉道新

（湖南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，湖南長(zhǎng)沙 410027）

流感是由A 型流感病毒引起的，可導(dǎo)致多種禽類、鳥類、人類感染的一種重要傳染病[1]。高致病性禽流感主要由H5和H7亞型禽流感病毒引起，其發(fā)病率和死亡率都很高（50%～89%），在有些雞群中可達(dá)100%。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織將其列為必須報(bào)告的動(dòng)物疫病，我國(guó)將其列為一類動(dòng)物疫病。用禽流感疫苗對(duì)家禽進(jìn)行免疫預(yù)防是防控該病的有效措施。為了解湖南省規(guī)模養(yǎng)禽場(chǎng)高致病性禽流感免疫抗體情況，評(píng)估免疫效果，2017—2021 年，分別于每年春季（5 月）和秋季（11 月）在湖南省14 個(gè)市州隨機(jī)抽取規(guī)模養(yǎng)禽場(chǎng)采集血清樣品，進(jìn)行高致病性禽流感免疫抗體檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析，以期為高致病性禽流感防控提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料和方法

1.1 樣品來(lái)源

2017—2021 年，每年5 月和11 月分別從湖南省14 市州各隨機(jī)抽取1～2 個(gè)縣，共抽取26 個(gè)縣（不重復(fù)抽樣）進(jìn)行采樣。每縣隨機(jī)抽查3 個(gè)規(guī)模禽場(chǎng)（2 個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)、1 個(gè)水禽場(chǎng)，無(wú)規(guī)模水禽場(chǎng)的用規(guī)模雞場(chǎng)代替），每個(gè)規(guī)模雞場(chǎng)隨機(jī)采集血清15 份，每個(gè)規(guī)模水禽場(chǎng)隨機(jī)采集血清20 份，每個(gè)縣共采集血清樣本50 份（雞血清30 份、水禽血清20 份）。2017—2021 年，共抽查養(yǎng)禽場(chǎng)785 個(gè)、血清樣品12 957 份，樣品采集詳情見(jiàn)表1。

表1 樣品情況統(tǒng)計(jì)

1.2 試驗(yàn)方法

采用《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T 18936—2020）規(guī)定的血凝（HA）和血凝抑制試驗(yàn)（HI）方法，檢測(cè)H5 和H7 亞型禽流感抗體[2]。HI 抗體效價(jià)不低于1:16（4log2），判定為免疫抗體個(gè)體合格；場(chǎng)免疫個(gè)體總合格率不低于70%，判定為免疫抗體場(chǎng)合格。

采用卡方（χ2）檢驗(yàn)分析H5 和H7 亞型高致病性禽流感免疫抗體個(gè)體合格率和場(chǎng)合格率在不同禽種、不同季節(jié)和不同地區(qū)間的差異。

采用公式（1）（2）比較H5 和H7 亞型高致病性禽流感免疫抗體個(gè)體合格率和場(chǎng)合格率的依存關(guān)系，建立個(gè)體免疫合格率為X，場(chǎng)免疫合格率為Y的線性回歸方程，并用F檢驗(yàn)方法驗(yàn)證兩者的線性回歸關(guān)系[3]。

式中：a代表截距或常數(shù)項(xiàng)，b代表回歸系數(shù)，n代表調(diào)查對(duì)象數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 H5 亞型禽流感免疫抗體

2.1.1 個(gè)體合格率

2.1.1.1 不同禽種 2017—2021 年，湖南省家禽H5 亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率為93.75%。其中，2018 年春季合格率最高，為99.22%，2019年秋季最低，為87.52%；雞、鴨、鵝樣本的H5亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率分別為95.90%、85.95%、76.70%（表2）。隨著時(shí)間變化，雞的個(gè)體合格率波動(dòng)不大，鵝波動(dòng)最大（圖1）。經(jīng)查卡方分布臨界值表，按α=0.016 6 檢驗(yàn)水準(zhǔn)，比較不同禽種間H5 亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率差異，得到自由度V=1 的臨界值為5.02～6.63，經(jīng)差值法得到χ20.0166約等于5.97。任意2 種禽種間的P值比較，結(jié)果（表3）顯示，H5 亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率在雞中最高，其次是鴨，鵝最低，不同禽種間H5 亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表3 不同禽種間H5 亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率比較

表2 H5 亞型免疫抗體個(gè)體合格率情況

2.1.1.2 不同采樣季節(jié) 春季H5 亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率為93.27%，秋季為94.22%。比較春、秋兩季免疫抗體個(gè)體合格率，經(jīng)卡方檢驗(yàn)，χ2=5.034，以V=1 查卡方分布臨界值表，按α=0.05 的水準(zhǔn)，P＜0.05。結(jié)果顯示：秋季H5亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率明顯高于春季，春、秋兩季H5 亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率存在顯著差異。

2.1.1.3 不同采樣地區(qū) 14 個(gè)市州H5 亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率由低到高分別是懷化（89.40%）、湘西州（89.85%）、湘潭（90.51%）、益陽(yáng)（90.57%）、株洲（91.04%）、永州（92.09%）、衡陽(yáng)（92.29%）、郴州（93.03%）、婁底（94.47%）、邵陽(yáng)（96.87%）、岳陽(yáng)（97.02%）、長(zhǎng)沙（97.90%）、張家界（98.00%）、常德（98.89%）（圖2）。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，P＜0.05，說(shuō)明H5 亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率在不同地區(qū)間存在顯著差異。

2.1.2 場(chǎng)合格率

2.1.2.1 不同禽種 2017—2021 年，湖南省H5亞型禽流感免疫抗體場(chǎng)合格率為93.25%。其中，2018 年春季合格率最高，為100%，2019 年秋季最低，為80.77%；雞、鴨、鵝樣本的H5 亞型禽流感免疫抗體場(chǎng)合格率分別為95.41%、82.61%、81.25%（表4）。隨著時(shí)間推移，場(chǎng)合格率的變化規(guī)律與個(gè)體合格率的變化規(guī)律基本一致（圖3）。H5 亞型禽流感免疫抗體場(chǎng)合格率在雞中最高，其次是鴨，鵝最低。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，不同禽種間H5 亞型禽流感免疫抗體場(chǎng)合格率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表4 H5 亞型免疫抗體場(chǎng)合格率情況

2.1.2.2 不同采樣季節(jié) 春季H5 亞型禽流感免疫抗體場(chǎng)合格率為93.32%，秋季為93.18%。比較春、秋兩季H5 亞型禽流感免疫抗體場(chǎng)合格率，經(jīng)卡方檢驗(yàn)，按α=0.05 的水準(zhǔn)，P＞0.05，說(shuō)明春、秋兩季H5亞型禽流感免疫抗體場(chǎng)合格率差異不顯著。

2.1.3 個(gè)體合格率與場(chǎng)合格率依存關(guān)系 利用1.2中的公式（1）（2）建立以H5 亞型禽流感個(gè)體免疫合格率為X，場(chǎng)合格率為Y的回歸方程：Y=1.224 1X-0.216 5。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，P＞0.01，說(shuō)明H5 亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率與場(chǎng)合格率之間不存在線性回歸關(guān)系。

2.2 H7 亞型禽流感免疫抗體

2.2.1 個(gè)體合格率

2.2.1.1 不同禽種 2017—2021 年，湖南省家禽H7 亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率為80.62%。其中，2021 年秋季合格率最高，為98.15%，2017年春季最低，為5.93%；雞、鴨、鵝樣本的H7 亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率分別為82.45%、78.26%、45.45%（表5）。隨著時(shí)間推移，雞、鴨、鵝樣的個(gè)體合格率整體呈升高趨勢(shì)（圖4）。H7 亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率在雞中最高，其次是鴨，鵝最低。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，不同禽種間H7亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表5 H7 亞型免疫抗體個(gè)體合格率情況

2.2.1.2 不同采樣季節(jié) 春季H7 亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率為70.91%，秋季為90.34%。比較春、秋兩季免疫抗體個(gè)體合格率，經(jīng)卡方檢驗(yàn)，P＜0.05，說(shuō)明免疫抗體合格率秋季明顯高于春季。

2.2.1.3 不同采樣地區(qū) 14 個(gè)市州H7 亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率由低到高分別是湘潭（71.72%）、益陽(yáng)（73.02%）、湘西州（75.01%）、懷化（75.42%）、株洲（75.48%）、永州（75.84%）、岳陽(yáng)（79.82%）、衡陽(yáng)（84.59%）、郴州（85.17%）、張家界（85.50%）、婁底（85.83%）、長(zhǎng)沙（86.50%）、邵陽(yáng)（86.67%）、常德（87.83%）（圖5）。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，P＜0.05，說(shuō)明H7 亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率在不同地區(qū)間存在顯著差異，其差異情況與H5 亞型相似。

2.2.2 場(chǎng)合格率

2.2.2.1 不同禽種 2017—2021 年，湖南省H7亞型禽流感免疫抗體場(chǎng)合格率為79.49%。其中，2021 年秋季合格率最高，為97.50%，2017 年春季最低，為1.28%；雞、鴨、鵝樣本的H7 亞型禽流感免疫抗體場(chǎng)合格率分別為81.19%、75.65%、37.50%（表6）。隨時(shí)間變化，H7 亞型禽流感免疫抗體場(chǎng)合格率有整體升高趨勢(shì)（圖6）。H7 亞型禽流感免疫抗體場(chǎng)合格率在雞中最高，其次是鴨，鵝最低。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，不同禽種間H7 亞型禽流感免疫抗體場(chǎng)合格率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

2.2.2.2 不同采樣季節(jié) 春季H7 亞型禽流感免疫抗體場(chǎng)合格率為68.38%，秋季為90.40%。比較春、秋兩季H7 亞型禽流感免疫抗體場(chǎng)合格率，經(jīng)卡方檢驗(yàn)，P＜0.05，說(shuō)明春、秋兩季H7 亞型禽流感免疫抗體場(chǎng)合格率差異顯著。

2.2.3 個(gè)體合格率與場(chǎng)合格率依存關(guān)系 利用1.2中的公式（1）（2）建立以H7 亞型禽流感個(gè)體免疫合格率為X，場(chǎng)合格率為Y的回歸方程：Y=1.038 7X-0.041 9。用F檢驗(yàn)驗(yàn)證回歸系數(shù)，P＜0.01，說(shuō)明H7 亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率與場(chǎng)合格率之間存在線性回歸關(guān)系。R2=0.99，說(shuō)明99%H7 亞型禽流感場(chǎng)合格率可以由個(gè)體合格率解釋。

3 討論

禽流感免疫抗體個(gè)體合格率在雞中最高，其次是鴨，鵝最低，與石芳等[4]研究結(jié)果一致。不同禽群間高致病性禽流感免疫抗體個(gè)體合格率差異大，可能是因?yàn)榕c接受相同疫苗免疫的雞相比，水禽的抗體滴度更低，維持時(shí)間短，抗體水平下降速度更快[5]。秋季禽流感免疫抗體個(gè)體合格率高于春季，可能與湖南省2017 年春季有些養(yǎng)禽場(chǎng)設(shè)有免疫H7 亞型禽流感疫苗，拉低了春季的平均合格率有關(guān)；且有些抽樣場(chǎng)在春季免疫1 次，秋季未出欄時(shí)實(shí)行再次免疫，加強(qiáng)免疫也提高了禽流感免疫抗體合格率。

湖南省規(guī)模養(yǎng)禽場(chǎng)H5 亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率和場(chǎng)合格率相對(duì)較高，常年比較穩(wěn)定，H7 亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率和場(chǎng)合格率呈整體上升趨勢(shì)，與湖南省對(duì)高致病性禽流感采取強(qiáng)制免疫有關(guān)，且H5 亞型禽流感疫苗比H7 亞型使用時(shí)間更早，所以抗體水平表現(xiàn)更加穩(wěn)定。不管是H5 亞型禽流感免疫抗體還是H7 亞型免疫抗體，在不同地區(qū)、不同場(chǎng)群間存在較大差異的原因：一是有些地區(qū)的養(yǎng)禽場(chǎng)主對(duì)高致病性禽流感的防疫意識(shí)不強(qiáng)，認(rèn)為所養(yǎng)家禽存欄時(shí)間短，出欄快，不會(huì)發(fā)生高致病性禽流感，從而放棄了免疫；二是有些地區(qū)對(duì)禽流感疫苗的運(yùn)送、保存管理不到位，造成疫苗失效；三是個(gè)別縣（區(qū)）使用了不同廠家生產(chǎn)的針對(duì)不同毒株的禽流感疫苗，且存在去年未使用完的疫苗，在今年已換新的情況下，仍繼續(xù)使用的現(xiàn)象。因此，各地職能部門需要加大宣傳力度，提高養(yǎng)禽場(chǎng)主對(duì)高致病性禽流感防控的認(rèn)識(shí)，加強(qiáng)對(duì)禽流感疫苗運(yùn)送、保存的管理，強(qiáng)化冷鏈措施，選擇合適的疫苗，并進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)高致病性禽流感免疫抗體的監(jiān)測(cè)。

H5 亞型禽流感免疫個(gè)體合格率與場(chǎng)合格率之間不存在線性回歸關(guān)系，可能與H5 亞型禽流感免疫抗體合格率近年來(lái)波動(dòng)不明顯，并且抽樣場(chǎng)數(shù)、每場(chǎng)抽樣數(shù)量偏少，導(dǎo)致X離均差平方和（Lxx）小，從而F值偏小有關(guān)。這提示在免疫抗體比較穩(wěn)定時(shí)，仍要做好免疫抗體監(jiān)測(cè)和評(píng)估工作，增加抽樣場(chǎng)數(shù)和每場(chǎng)抽樣數(shù)量，為以后高致病性禽流感免疫抗體監(jiān)測(cè)和效果評(píng)估提供參考。H7 亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率與場(chǎng)合格率之間存在線性回歸關(guān)系，因此可以利用H7 亞型禽流感免疫抗體個(gè)體合格率與場(chǎng)合格率的線性回歸方程，估算湖南省規(guī)模養(yǎng)禽場(chǎng)H7 亞型禽流感免疫抗體場(chǎng)合格率情況，為湖南省防控H7 亞型禽流感提供數(shù)據(jù)支持。